Способ получения экзоформы 3 @ ,4 @ -о- бензилиденхартреузина

 

Изобретение касается производных хартреузина, в частности способа получения экзоформы 3Ъ,4Ъ-0-бензилиденхартреузина-полупродукта для получения новых производных хартреузина в экзоформе. Цель - создание способа получения нового полупродукта для синтеза новых биологически активных веществ. Процесс ведут реакцией хартреузина с диметилацеталем бензальдегида или с бензальдегидом в присутствии кислотного катализатора - N-толуолсульфоновой, N-фенолсульфоновой или камфорсульфоновой кислоты и нейтрального растворителя - хлороформа, метиленхлорида, этилацетата или диметилформамида при 0-50°С с получением смеси экзои эндоформ 3Ъ,4Ъ-0-бензилиденхартреузина. Затем эндоформу из этой смеси селективно превращают в хартреузин действием N-толуолсульфоновой, мезитиленсульфоновой, камфорсульфоновой кислотой, сульфонокислотной смолой, соляной кислотой или хлоридом цинка в смеси растворителей воды, метанола или этанола с хлороформом, этилацетатом или диметилформамидом при 5-40°С. После чего из полученной смеси выделяют экзоформу с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. Т.пл. 165-200°С. Использование нового полупродукта позволяет получать новое соединение, обладающее высокой эффективностью против клеток лейкемии Р-3888 при токсичности ЛД 50=30-40 мг/кг. 4 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (д) С 07 Н 15/26

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К FlATEHTV (z) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

flO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 3886653/23-04 (22) 25.04.85 (31) 323.391/85 (32) 20.02.85 (33) JP (46) 30.08.90. Бюл. Р 32 (71) Исихара Сангио Кайся, Лтд (JP) (72) Хироюки Мори, Нобутоси Ямада, Хидео.Суги и Кендзи Кон (JP) (53) 547.917.07(088.8) (56) Canser Research. 1977, v 37, р. 1666-1672. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКЗОФОРМЫ 3,4-О-БЕНЗИЛИДЕНХАРТРКУЗИНА (57) Изобретение касается производных хартреузина, в частности способа по— лучения экзоформы 3,4 -О-бензилиденхартреузина — полупродукта для получения новых производных хартреузина в экзоформе. Цель — создание способа получения нового полупродукта для синтеза новых биологически активных веществ. Процесс ведут реакцией хартреузина с диметилацеталем бенэальдегида или с бензальдегидом в присутствии

Изобретение относится к способу получения нового промежуточного сое.- . цйнения для получения хартреузинового,SU„„ 15900Ù А3 кислотного катализатора — п-толуолсульфоновой, и-фенолсульфоновой или камфорсульфоновой кислоты и нейтрального растворителя — хлороформа, метиленхлорида, этилацетата или диметилформамида при 0-50 С с получением сме си -экзо- и эндоформ 3,4 -О-бензили/ I денхартреузина. Затем эндоформу из. этой смеси селективно превращают в хартреузин действием и-толуолсульфоновой, мезитиленсульфоновой, камфорсульфоновой кислотой, сульфонокйслотной смолой, соляной кислотой или хлоридом цинка в смеси растворителей воды, метанола или этанола с хлороформом, этилацетатом или диметилформамидом при 5-40 С. После чего из полученной смеси выделяют экзоформу с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. Т. пл. 165-200 С. Использоо вание нового полупродукта позволяет получать новое соединение, обладающее высокой эффективностью против клеток лейкемии Р-3888 при токсичности JID, =

= 30-40 мг/кг. 4 табл. производногв или его соли, а именно к экзоформе 3,4 -О-бензилиденхартреуэина формулы

1590046 которое является полупродуктом для получения новых производных хартреузина в экзоформе формулы; нС 5

О

CQ.

О

Н

СН3

Цель изобретения — способ получения(нового соединения экзофориы

3,4 -.0-бензилиденхартреузина — промежуточного продукта для синтеза новых производных хартреузина, которые обладают лучшим спектром биологических свойств, чем сам хартреузин.

Пример 1. 1, В 500 мл безводного хлороформа растворяют 20 r хартреузина с последующим добавлением

23,8 г бензальдегиддиметилацеталя, 25

2 г п-толуолсульфоновой кислоты и

100 г молекулярного сита 5А 1/16. Полученную смесь подвергают реакции с перемешиванием при комнатной температуре (25 С) в течение 1 ч.

После завершения реакции добавляют

6 мл пиридина и полученную смесь фильтруют через целит, после чего фильтрат концентрируют до объема примерно

250 мл и полученный раствор счищают с помощью хроматографии на колснке с силикагелем для получения кристаллов смеси экзоформы и эндоформы 3,4 -0",I

-бензилиденхартреузина.

2. Затем указанные кристаллы раст- 40 воряют в 200 мл хлороформа с последукщим добавлением 25 мл 0,01 н.раствора соляной кислоты — метанола, приготовленного из концентрированной соляной кислоты и метанола. Полученную 45 смесь подвергают реакции с перемешиванием при комнатной температуре (25 С) в течение 18 ч.

После завершения реакции добавляют пиридин и полученную смесь фильтруют, после чего фильтрат концентрируют при пониженном давлении с получением сме(( си хартреузина и экзоформы 3,4 -0-бензилиденхартреузина. Затея эту смесь подвергают хроматографии с ис55 пользованием колонки с силикагелем для получения кристалла экзоформы

3,4 -0-бензилиденхартреузина. Указанные кристаллы подвергают повторной кристаллизации из смеси хлороформа и этанола для получения .8,6 г кристаллов экзоформы, т. пл. 165 — 200(С.

ЯМР (60 МГц, К CDCl ):. 1,30 (ЗН, j = 7 Гц, — СН,); 1,48 (ЗН, Гц СНз), 2,83 (ЗН, С, Ar-CH3);

3,40 (ЗН, С, -0-СН ); 5,27 (1Н, g, ) = 8 Гц, аномер протон); 5,89 (1Н, g, j = 4 Гц, аномер протон); 6,32 (1Н, С, -О-СН-0-); 7, 17-8,23 (10Н, аромат протон); 11,70 (1Н, С, фенол, протон).

Пример 2. 1. В 300 мл безводного хлороформа растворяют 10, 0 г хартреузина с последующим добавлением

30 мл бензальдегида, 1 г и-толуолсульфоновой кислоты и 50 г молекулярного сита 4А 1/16 и полученную смесь под» вергают реакции с перемешиванием при

I комнатной температуре в течение 20 ч.

После завершения реакции реакционную смесь фильтруют через целит и фильтрат концентрируют до примерно 150 мл, после чего полученный раствор чистят с помощью хроматографии на колонке с силикагелем для получения кристаллов смеси зкзоформы и эндоформы 3,4 -0-бензилиденахартреузина.

2. По методике примера 1 (2)полученные кристаллы обрабатывают, чтобы получить экзоформу 3,4 -0-бензили/ денхартреузина.

Используя методику примеров синтеза 1 и 2 осуществлены синтезы, перечисленные в табл. 1 и 2, при различных условиях.

Далее описаны конкретные примеры синтеза экзоформ производных хартреузина формулы (II) или его солей.

Получение 1. Экзоформа 6-0-(N,N-диэтил- -аланил)-3,4 -0-бензилиденf хартреузингидрохлорида (далее называется как соединение 6) . . В смеси 1,4 мл безводного пиридина и 0,7 мл безводного хлороформа растворяют 100 мг экзоформы 3,4 -,-0/

-бензилиденхартреузина, полученного в примере синтеза 1, после чего добавляют 60 мг N,N-диэтил-р-аланина и

113 мг дициклогексилкарбодиимида и полученную смесь подвергают реакции при комнатной температуре в течение

4 ч.

После завершения реакции добавляют метанол и 10 мл смешанного растворителя хлороформ — этилацетат (1: 10).

Затем полученную смесь фильтруют и фильтрат концентрируют при пониженном давлении, после чего полученное

5 1590046 таким образом маслянистое в:.ще:TBo отделяют с помощью хроматографии на ко-. лонке с силикагелем и получают 100 мг пергирования каждого из соединении Ь4, 69 и 70 и небольшого количества натрийкарбоксиметилцеллюлозы (Па. СИС) в физиологическом растворе и суспензии или растворы каждого из соединений плюс небольшое количество ПАВ (например, Твин-80) в физиологическом раст воре.

Для сравнения указанное лечение

I было проведено с использованием

50 мг/кг — сутки х 3 суспензии хартреузина, способ включал растворение хартреузина в смешанном растворе 0,2 М

Na, Н1 О и N,N — гиметилацетамида (4

1 по объему) при концентрации 5 мг ;.- .

В этом случае отношение тест-контроль (7) составило 105Х.

Острая токсичность: LD ц 30-40 мг/кг и более. LD3o хартреузина равно .

50 мг/кг и более.

Формула изобретения

Д продукта.

Указанный продукт растворяют в

20 мл смешанного растворителя хлоро форма — этилацетат (1: 10) и полученный раствор обрабатывают разбавленной соляной кислотой. После вымывания этилацетатом слоя соляной кислоты до-. бавляют хлорид натрия и полученную смесь экстрагируют хлороформом, Слой . хлороформа промывают водным раствором хлорида натрия, после чего просушивают над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении для получения 33 мг экзоформы 6-0-(N,N-пиэтил — р-аланил)-3,4 -О/ /

-бензилиденхартреузина, В смеси 0,39 мл 0 1 н.водного раствора соляной кислоты и 10 мл воды растворяют 33 мг этого производного хартреузина и полученный раствор .промывают этилацетатом и затем подвергают сушке вымораживанием с получением

33 мг соединения.

Зкзоформы производных хартреузина, с полученные из экзоформы 3,4 -О-бензилиденхартреузина по изобретению, приведены в табл. 3.

Как показано в описанных ниже экс5

Способ получения экзоформы 3,4 -О.-бензилиденхартреузина формулы периментальных примерах, соединения экзоформы формулы (ZI.) обладают высокой эффективностью против клеток лейкемии Р-388.

Ниже описаны противоопухолевая активность и острая токсичность.

Противоопухолевая активность.

У мышей линии BDF, интраперитонеально инокулировали клетки лейкемии в количестве 1 х 10 клеток/мышь и

6 каждое предназначенное для испытания лекарство назначали внутривенно на первый, пятый и девятый дни после ино кулирования. Смертность мышей наблюдали в течение 30 дней и определяли отношение среднего времени выживаемости в испытании и контроле в каждой подопытной группе, при этом период выживаемости контрольной группы, которой давали физиологический раствор, принимали за .100.

Полученные результаты показаны в табл. 4. Были использованы следующие лекарства: растворы, приготовленные с добавлением физиологического раство ра к каждому из соединений 6, 7, 8, 11 и 39; суспензии готовили путем дис сн, отличающийся тем, что хартреузин подвергают взаимодействию с диметилацеталам бензальдегида или с бензальдегидом в присутствии и-толуолсульфоновой, п-фенолсульфоновой, бензолсульфоновой, и-хлорбензолсульфоновой или камфорсульфоновой кислоты в качестве кислотного катализатора, и хлороформа, метиленхлорида, этилацетата или диметилформамида в качестве нейтрального растворителя при 0— о

50 С с получением смеси:экзо- и эндо45 ! ( форм 3,4 -О-бензилиденхартреузина, из которой эндоформу затем селективно превращают в хартреузин действием

ll-òîëó6ëñóëüôoí0âoé кислотой, мезитиленсульфоновой кислотой, камфорсульфоновой кислотой, сульфонокислотной смолой, соляной кислотой или хлоридом цинка в смеси растворителей — воды, метанола или этанола с хлороформом, этилацетатом или диметилформамидом о гни 5-40 С с последующим выделением экзоформы 3,4 -О-бензилиденхартреузина из полученной смеси с помощью колоночной хроматографии на силикагеле.

1590046 л сс

uq cn

clCO

СО СЧ ф ьс! сс сс фСЧ ИЛ м

CO с

in сЧ м

О Р м ь

»ь л Р

С4 л и

»с лм ь л

С 4 с Ch

С(Х1! оооо

ug ь

° - СЧ 1- - О и

C4 С4 С4 ф СЧ

СЧ

Ь D Ю ь ю а л л О Ъ О

С»4

СО

1 л

С 4 аэ

С4

С»

С4

Ш 00

СЧ С 4

1 л °

< 4 СЧ

Ю

Л 1

Х Х E ц v о э

Х I И о и

Ф Х

Ю ь

СЧ ь

Ю

Ю

СЧ

С7

С7

С 4

Ю

С7 ь

Ю

Ю Ю ю ь (Ч о са

Э

К о

1-4 !

I I

5 l

E I.9

С 4 л

О 1

СЧ л

С

СЧ л

in

4Ч

О Ъ

С»4 л

iьС1

СЧ л ь/

СЧ л

СЧ

Ю ь- C4

1 о

Я Е о э A

Lt ф «Г Э

Я Р, no p

Л1 К» Л °

dI л

CI 5 Я

1 pR v.

s4

1 cd з Е

CJ

М,:!!

1 I о о

R cd ч cd

С о

Э

I !!

« о

I 1

Х о

Я эо фо

СР Х И Х ОХCOIC о ьс с4 л л л

Ю Ю

Ch

СЧ, Ю о с

СЧ С4 л

Ю Ю оь

С 4

Ch

СЧ

О1

СЧ л

Ch

С 4

О\ Ch

СЧ СЧ л ° ю ь о э ь

О ь Ю Ю

»С о ь ь

С7

»4

Р

Рю д о о

Ц

М о 1

«Ц Ф g Э Ф

13оr сь » 1 о ф

Х и о

Э 47 оХ

РlC

, и ф

И в о

cd

1 а4

Х о

1-4 ь4 ф

1 1 &»

C C4 К

3 ф Э

И о

d4Р, О

Ф о

СС4

Э ъО оХ

Р Х ф л

М э о

f о Х

g v ф о о

Сб о.

Э Й ф

VR"

О Ig

Д 4 ф

3590046

2 а о в о

СЧ

>» ф И а t!

Ф

I х

Я х &

3 о х

Е»

Ф х х ф х о х

X а о в о а о

X а о

8 о а о

X а о в о о а

X а о в о а о у о х

Е» о м ь м л

О м

» ь м

@ ь м

C) м

О м

Ю

О м

Ю

Ю м

°

I

1. Р Р

1. О

5

at о о ° х о

o i5 )» 6

1 Д ф

» о х ф Е

Ф

К о

Е-<

»

1 Р

C)

Ln

СЧ м

» ь м

C) I х ф

v x (3 х ф ф о о

E x о х д в

Ь. 1А 1

-й"

v x а cd ф о

h4 в ф

1 E

1 к м

v ca ф о м в

I ф о к х-о х X о о х . о ц

2 х

6 о и к

Ф х х ф х о х

Ф к о о -в

М

I сь

Х Al

Ф о х о в х Ф ф ф К !»

Ф Ръ1

Хих

1 р, O Cd о х

Вхсф ф о

ывх

1 х к ф о

hc в р о

o5g

Ik

clt К х о х к ф

О Eo m

E о к

v х х.х ф

1» а cd Ф

oxX о х

I к о

Yi

I х л х о

Ф

I

Ф и о х х

E о о

«f

Ф

Ь О ГЪ (Ч cn @

»Г сп

О а л

О

Ъ Р

°, с». 0

X m х х

x( о а х х фР

Х OJ

Р

Р. ф о td

Ф 1

X x

o at

"3 х

X

Q цр

kf х л

3" о и о у о

O - О со О

СЧ C»I (Ч ° —. <Ч ь л г а а иЪ

СЧ .. c4 C 4 c»t <Ч м м м м м м м м м

1590046

Соль

Соединение

126,5 - 136,0

НС1

160, 0 — 165,0

НС1

152,0 — 156,0 з РРОО (.Нз 11НСОСН Нн.

160,5 — 163,0

НС1

-СН

152,0 — 158,0

3 PPOOÔ з

-СН

СН,ЫН, 142,0 - 148,5

НС1

С,Н5

НС1

Н РО з

-СН сн,и{сн, ), СНз

-СН

СН2 БНСН(Снз ) 2

СН, -СН

СН

СН,ННСОСН,И(СН,), С2Н

-(СН ) -N

2 2

7 - (СН2 ) з - (1-пир ролили нил )

8 - (СН2 ) з ННСОСнз Мн, о

CQ

Таблица 3 о

Температура плавления, С

154, 5 — 160,0

152,5 — 158,0!

1590046

СН

-СН

СН2 ННСОСРз

СН з

-СН

-(СН ),Ян

HCi

1/3

H po

НС1

15

17

19

НС1

Н РО+

24

ИНСОСГ з

СН, ИНСО (фенил) — (СН2 ) Нн (СН ) NHC.HO

-(сн, ), ннсосг, -(сн,),янсоссд, — (СН ) МНСО (фенил)

--(СН,),NHCOCF, СН3

-Сн, н

СОСУ (СН ) ., -Сн Сн-NHCOCFз (сн,), -(сн ) -N О б (CH2)2 сн(снз ) 2

-СН

СН2 NH2

-(СН,),NHCOCH, СН

-СН СН

Продолжение табл. 3

163,0 — 173,0

158,0 — 167, 0

170, 5 — 174, 5

163,5 — 167,0

155 0 159 5

160,0 — 172,0

169,0 - 175,0

165,0 — 173,0 160,0 — 165,0

172,0 — 185,0

f65,0 — 174,0

162,0 - 171,0

152,0 — 159,5

153 0 — 160 0

162,0 - !76,0

184,0 — 193,0

1590046

Продолжение табл. 3

176,0 — 186,0

156,0 - 165,0

-(СН ) ИСОСГ (СН2 )1

-СН вЂ” — СН-NHCOOCH, 25

26 (фенил ) 27 э

-СН

160,0 — 167,0

СН,МНСООСН (фенил) -сн

175,0 — 185,0

СН, NHCOOCH (фенил)

-СН, ИНСООСН, (фенил)

-(СН, ), NHCOOCH (фенил) .СН

-СН, СН ЫНСОСН NH (фенил) СН,ООС.

-(СН,),ИНСОСН,NH (фенил) СН,OOC

-(СН,), ННСООСН (фенил)

СН(СНз)1

-СН

176,0 — 183,0

155,5 — 165,0

129,5 — 139,0

30

32

148, Π— 153,0

i 56,0 — 167, О

182,0 — 189,0

NHCOOCH (фенил) (СН, )

-СН СН-ИНСОСР—,(СН, ) МНСООСН, (фенил) 176.,0 — 185,0

178 0 — 186 0

36

СН,-(3-индолил)

ЯНСООСН,фенил) (eeHm ) -СН

165,0 — 173,0

-CH

195,0 — 202,,0

НСООСН, (фенил)

СН2 Снз

-СН

НС1 53в5 160н0

CH N(CH ) „

СН

-СН

202,0 — 209,5

СН(СН, )

СН Б

СООСН,, (фенил) 2 3 4

1590046

173,0 — 187,0

НС1

41 з сн

-СН

164,0 — 172,0

185, 0 — 195,0

НС1

163,5 — 167,0 †(СНг)гЯ(снз)г з

СН

-СН

СНг Ннснз

45 сн

-СН

HCl

169 0 — 173 0

-(Сн, ), ННСН, 47

175,0 — 178,0

171,0 г 181,0

156,0 — 163,0

150,0 — 158,0

170, Π— 180, О

52

190,0 — 200,0

169,0 — 174,0

178,0 — 186 0

187, Π— 194,0

170,0 — 176,0

184, Π— 188,0

164, 5 — 171,0.

186,0 — 196,0

179,0 — .191,0

194 Π— 204 0

214 0 217 0

-(сн,),ннсосн,ин, СНг ЯНСОСНг Хнг

СНз

-СН

СНг Инг

CCHH

CH2 N

СООСН (фенил) СН

48 -(сн ) ы

СООСН, (фенил) — (СНг ) з ОН.

-СНгОСОСНз

-Снг ОСОСНг СНг Сl

-(Снг ),г Зоснз . CHç

53 -СИ ОСН, (фенил)

54 (СНг ) г Яснз

55 . —. (СНг ) г СОСНз

56, - (СНг ) (фенил) (CHã)гС1

58 -(СНг)зОСНг (фенил)

59 -(СНг)гног

60 -СН ОСО (фенил)

61 -(сн, ), so, сн, 62 -СНг СН(СНз ) г

63 -с(сн,), 18

Продолжение табл. 3

1590046.

НС1

73

Таблица 4

Тест/ко троль, СВВ +

С н кон1

j Х

b с

138

214

203

248

Ь с

184

216

Ь с

b с

Ь

192

229

Ь с

184

216

242

16

Ь . 181

Ь . 205. с 233

Ъ с

186

220

Ь 161 с 223

Ь 212

Ъ - 195

Ъ с

292

19

Ь с

161

197

146

203

241

186

173

b с

23

203

165

Ь с

186

262

Ь

Ь с

206

241

214

155 с

64 - (СНг ) г СНз

65 — (СНг ) г СН=СНг

66 - (фенил) ОСНз (и

67 -(фенил) Cl (р)

68 - (фенил) СУ, (p)

Ф

69 С (СНз )-СНСНз ®)

70 — (циклопропил) СНз

71 -СН -Н з

2 г г 3

СН, СН, -СН, ОСН, 13: Ь 184 с 233

Продолжение табл.3

178, Π— 188,0

186,0 - 194,0

178,0 - 183,0

190,0 — 202,0

227э0 233. 0

182,0 — 188,0

180,0 — 185,0

146 0 — 152,0

185,0 — 188,5

199,0 — 200,0

1590046

Продолжение табл ° 4

196

238

Ь с с

Ь с

28

Ь с

181

Ь с

57

58

33

Ъ с

198

167

184

Ь

34 Ь

35 с

36 с

37 с

38 с

39 а

66

49

68

69

70 с

51

Ъ

Ь с

203

205

243

219

199

71

72

73 с

Ь

53

Ь с

224

Ь с

157

210 Символы а-с обозначают следующие дозы: а 10 мг/кг х х 3; Ъ 20 мг/кг х 3; с 40 мг/кг х 3.

Отношение среднего времени выживаемости между под опытными и контрольными животными.

Составитель Г. Коннова

Редактор Н. Киштулинец Техред М.Дидьис Корректор О. Кравцова

Заказ 2550

Тираж 295

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101. 29

31

Ь

Ь

Ь

Ь с

Ъ

Ь

Ь с

157

167

186

153

197

173 135

153

146

135.

192

175!

67

214

250

62

63

64

Ь

С

Ъ

Ъ а

Ь

Ь

Ъ а

Ъ а

Ь.

179

222

203

243

214

198

189

138

202

198

153

199

162

130

192

165 .1 50

146