Способ выделения гликозаминогликанов из мочи

Авторы патента:

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

A61K31/716 - глюканы

Изобретение относится к клинической биохимии и может быть использовано для косвенной оценки степени тяжести тканевых повреждений путем количественного определения очищенных гликозаминогликанов, выделенных из мочи. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта за счет более полного осаждения гликозаминогликанов. Образец мочи доводят до PH 6,0-6,5, обрабатывают этанолом в конечной концентрации 60%, выдерживают не менее 6 ч, определяют осадок, растворяют в 1-3 М водном растворе хлорида натрия и повторно обрабатывают этанолом. Способ позволяет повысить на 10-15% выход гликозаминогликанов и обеспечивает упрощение и ускорение выделения гликозаминогликанов. Способ можно использовать как диагностический тест для косвенной оценки степени тяжести повреждения соединительной ткани при различных заболеваниях.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4353310/28-14 (22) 30.12.87 (46) 15.04.90. Бюл. № 14 (71) Саратовский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии (72) Д. В. Косягин (53) 612.015 (088.8) (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ ИЗ МОЧИ (57) Изобретение относится к клинической биохимии и может быть использовано для кос венной. оценки степени тяжести тканевых пов реждений путем количественного определения очищенных гликозаминогликанов, выделенных из мочи. Цель изобретения вЂ” повыИзобретение относится к клинической биохимии и может быть использовано для косвенной оценки степени тяжести тканевых повреждений при различных заболеваниях путем количественного определения выделенных и очищенных гликозаминогликанов (ГАГ) мочи.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта за счет более полного осаждения ГАГ.

Способ осуществляют следующим образом.

Кислотно-щелочное состояние мочи,коррегируют, доводя до значения рН 6,0 вЂ” 6,5, при котором происходит максимальное осаждение ГАГ.

1 объем мочи смешивают с 1,6 объемами 96 этанола и оставляют при температуре +4 С на срок не менее 6 ч для образования осадка. Сформировавшийся хлопьевидный осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. Осадок растворяют в 1 вЂ” 3 М водном растворе хлористого натрия, ГАГ переходят в раствор, „„SU„„1556678 (51)5 А 61 К 31/70, G 01 N 33/50 шение выхода целевого продукта за счет более полного осаждения гликозаминогликанов. Образец мочи доводят до рН 6,0вЂ”

6,5, обрабатывают этанолом в конечной концентрации 60Я, выдерживают не менее 6 ч, определяют осадок, растворяют в 1 вЂ” 3 М водном растворе хлорида натрия и повторно обрабатывают этанолом. Способ позволяет повысить на 10 вЂ” 150 0 выход гликозаминогликанов и обеспечивает упрощение и ускорение выделения гликозаминогликанов. Способ можно использовать как диагностический тест для косвенной оценки степени тяжести повреждения соединительной ткани при различных заболеваниях. нерастворившиеся частицы удаляют с помощью центрнфугирования или фильтрования через среднепористый фильтр.

Для вторичного осаждения ГАГ к 1 объему центрифугата или фильтрата, содержащего ГАГ, прибавляют 1,6 объема 96 этанола, смешивают и оставляют не менее чем на 6 ч при температуре +4 С для формирования осадка. Осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. Определяют в осадке -ГАГ по концентрации входящих в их состав углеводов йли изучают их качественный состав.

Пример 1. При исследовании суточной мочи здорового человека из 1050 мл отобрали 20 мл, измерили рН, составивший 6,0.

5 мл мочи смешали с 8 мл 96 этанола, оставили при +4 С на 6 ч. Осадок отделили центрифугированием при 3000 об/мин на обычной лабораторной центрифуге в течение 30 мин. Осадок растворили в 4 мл

3 М водного раствора хлорида натрия.

Нерастворенные частицы удалили с по1556678

Формула изобретения

Составитель Н. Гуляева

Редактор М. Циткина Техред И. Верес Корректор О. Кравцова

Заказ 674 Тираж 554 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат «Патент», r Ужгород, ул. Гагарина, 101 мощью фильтрования через среднепористый фильтр. К 2 мл фильтрата добавили 3,2 мл

96 этанола, смешали и оставили при +4 С на 18 ч. Образовавшийся осадок отделили центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. В осадке определили содержание входящих в состав ГАГ уроновых кислот карбазоловым способом. Пересчитали содержание уроновых кислот в ГАГ на всю суточную мочу, которое составило 2,2 мг. (При определении содержания ГАГ в моче известным способом оказалось 2,0 мг, т. е. выход по предлагаемому способу выше на 10Я).

Пример 2. Больному с.переломом левой голени проведено исследование мочи предлагаемым способом. Из 1400 мл суточной мочи отобрали 20 мл, измерили рН, составивший 5, 7, добавлением 1 н раствора едкого натра и 1 н раствором соляной кислоты довели рН мочи до 6,2. Вся дальнейшая процедура выделения ГАГ проводилась по примеру 1, за исключением того, что осадок ГАГ растворяли в 4 мл 1 М водного раствора хлорида натрия и нерастворимые частицы удаляли центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. За сутки выделено больным 4,3 мг. (При определении содержания ГАГ в моче известным способом оказалоеь 3,7 мг, выход по сравнению с прототипом выше на 16Я).

Пример 3. При исследовании суточной мочи больного с переломом бедра из 1000 мл мочи отобрали 20 мл, измерили рН, который составил 6,5. Вся дальнейшая процедура выделения ГАГ проводилась по примеру 1. Осадок ГАГ растворяли в 4 мл 2 М водного раствора хлорида натрия. 3а сутки выделено больным 5,4 мг. (При определении содержания ГАГ в моче известным способом оказалось 4,9 мг, т. е. выход повышен на 10Я).

Предлагаемый способ выделения ГАГ из мочи позволяет более полно получить целевой продукт (выход ГАГ повышается на

10 вЂ” 15Я), ускорить и упростить процедуру

10 выделения ГАГ. Кроме того, в предлагаемом способе не используются дефицитные реактивы, в частности цетилпиридинийхлорид и цетилтриметиламмонийбромид.

Разработанный способ выделения ГАГ из мочи позволяет проводить исследования количественного содержания ГАГ, их состава в моче человека и животных..

Способ выделения гликозаминогликанов из мочи путем коррекции рН образца осаждения гликозаминогликанов органическим соеди не н нем, выдержи в ани я на холоде, отделения осадка, растворения осадка в водном растворе соли, повторного осаждения этанолом, выдерживания на холоде и отделения целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого про. дукта, рН в образце мочи устанавливают

6,0 вЂ” 6,5, первое осаждение проводят добавЗ0 лением этанола в конечной концентрации

60Я, выдерживают смесь не менее 6 ч, а растворение осадка осуществляют в 1 вЂ” 3 М водном растворе хлорида натрия.

Способ выделения гликозаминогликанов из мочи

Способ определения функции спермиев // 1551343

Изобретение относится к медицине, в частности к диагностике бесплодия в браке

Способ количественного определения содержания алкалоидов в семенах и вегетативной массе люпина // 1541515

Изобретение относится к биохимии растений и может быть использовано в селекции и семеноводстве люпина, а также в животноводстве при определении качества содержащих люпин кормов

Способ определения лимфоцитарных антигенов и антилимфоцитарных антител в сыворотке крови // 1532873

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления лимфоцитарных антигенов и антилимфоцитарных антител

Способ подготовки проб для количественного определения лекарственных средств группы первичных ароматических аминов в ткани печени // 1529118

Изобретение относится к токсикологической химии и может быть использовано при проведении химико-токсикологических и судебно-химических исследований

Способ определения веществ группы средних молекул в биологических жидкостях // 1520445

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в медицине для определения веществ группы средних молекул в биологических жидкостях

Способ определения порога однократного действия метаболизируемых ароматических веществ // 1497570

Изобретение относится к медицине, позволяет повысить точность и надежность установления санитарных стандартов в воздухе рабочей зоны, а именно порога однократного действия ароматических метаболизируемых веществ, например стирола, бензола, N-хлортолуола, а также снижает трудоемкость исследований, необходимых для установления указанного норматива

Способ получения препарата для определения моноаминов на основе иммобилизованной моноаминооксидазы // 1495378

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению иммобилизованных органоидов клетки и ферментов, и может найти применение при получении биокатализаторов, а также в химическом, клиническом и токсилогическом анализе

Способ определения индивидуальной чувствительности к бета- блокатору в ишемической стадии острого инфаркта миокарда // 1478121

Изобретение относится к области медицины ,в частности, к кардиологии

Приспособление для проведения иммуноферментного анализа // 1474549

Изобретение относится к иммунохимии и может быть использовано при проведении иммуноферментного анализа

Способ получения средства,обладающего иммуностимулирующей активностью // 1098551

Способ получения карбоксиметилированных @ -1,3-глюканов // 1024011

Патент 402539 // 402539

Способ получения препарата, содержащего бета-глюканы // 2220728

Изобретение относится к медицине, парфюмерной и пищевой промышленности, к производству лекарственных и биологически активных веществ

Способ проведения антикоагулянтной терапии у детей с термической травмой // 2318521

Изобретение относится к области медицины

Способ профилактики тяжелых осложнений беременности у пациенток с тромбофилией // 2367446

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству, и касается профилактики тяжелых осложнений беременности у пациенток с тромбофилией

Мукоадгезивные ксилоглюкансодержащие препараты, полезные в медицинских устройствах и в фармацевтических препаратах // 2403012

Изобретение относится к медицине

Способ пролонгированного воздействия на рефлексотерапевтические точки (филлеропунктура) // 2406478

Изобретение относится к медицине, а именно - к рефлексотерапии

Способ лечения генерализованных васкулитов при нейроинфекциях у детей // 2444353

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для лечения генерализованных васкулитов при нейроинфекциях у детей

Фармацевтическая композиция для лечения атопического дерматита // 2453303

Изобретение относится к медицине, а именно к лекарственным препаратам в форме мази, и может найти применение при лечении атопического дерматита

Препарат для заживления ран и предотвращения адгезии повязки к ране, содержащий хитозан-глюкановый комплекс // 2455995

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается препарата для влажного заживления ран и предотвращения адгезии повязки к ране, содержащего фармакологически приемлемый хитозан-глюкановый комплекс или его соль, в комбинации с одним или более другим полисахаридом или их соответствующими солями, и антисептик, причем хитозан-глюкановый комплекс обладает динамической вязкостью 2.5 Па·с-30 Пa·c при концентрации раствора 2.5% при 25°С и угловой скорости вращения 0.0314 рад/сек, и содержанием глюкозамина в диапазоне от 0.05 (n/n) до 20 (n/n)