Способ получения трансгенной птицы
Изобретение относится к биологии и может быть использовано в генной инженерии при создании трансгенной птицы с важными хозяйственными признаками. Целью изобретения является получение нескольких инъецированных яйцеклеток от одной особи за одну операцию. Это достигается тем, что микроинъекцию чужеродной ДНК проводят через фолликулярные оболочки в зародышевый диск каждой незрелой яйцеклетки яичника без их извлечения. Положительный эффект заключается в получении нескольких инъекцированных яйцеклеток от одной особи за одну операцию и получении трансгенной птицы. 1 табл.
Изобретение относится к биологии, в частности к генной инженерии, и может быть использовано для получения трансгенной птицы. Целью изобретения является получение нескольких инъецированных яйцеклеток от одной особи за одну операцию. П р и м е р. Эксперименты проводили на птице породы белый леггорн линии П6. Птицу выращивали в виварии при индивидуальном клеточном содержании и искусственном осеменении. Хирургическое вскрытие брюшной полости проводили под местной анестезией в области живота, за левым бедром так, чтобы открывался доступ к яичнику. Микроинъекцию по предлагаемому способу проводили микрокапилляром диаметром 2-4 мкм через фолликулярные оболочки поочередно в каждый зародышевый диск фолликулов яичника. Для микроинъекций использовали генетическую конструкцию, состоящую из гена гормона роста человека с металлотионеиновым промотором. Микроинъекцию в зародышевый диск фолликулов проводили через фолликулярные оболочки с использованием налобных увеличительных очков. Оперированных кур зашивали и сажали на свои места в клетки. Снесенные курицей после операции яйца, соответственно числу инъецированных фолликулов, инкубировали до вывода цыплят. Результаты проведения экспериментов по получению трансгенной птицы предлагаемым способом следующие: Оперировано, голов 25 Инъецировано яйцеклеток, шт. 75 Снесено яиц, шт. 45 Получено цыплят, голов 26 Из них выращено, голов 19 (6 петухов, 13 курочек) в том числе трансгенных, голов 4 У полученных цыплят трансгенность определяли по наличию человеческого гена гормона роста в их геноме, а также по содержанию человеческого гена гормона роста в их крови. ДНК цыплят, выделенную из клеток крови фенол-хлороформным методом, анализировали на наличие последовательностей введенной чужеродной ДНК гибридизационными методами. Курочек анализировали на наличие введенного гена в снесенных яйцах. Петухов анализировали по ДНК в сперме. У цыплят в возрасте 1,5-4 месяцев до и после скармливания им в течение двух дней корма с добавкой сернокислого цинка (для активации металлотионеинового промотора) брали кровь из крыловой вены. Тестирование полученных по предлагаемому способу цыплят на наличие в их крови человеческого гормона роста было проведено двумя методами: иммуноферментным с моноклональными антителами к человеческому гормону роста; радиоиммунологическим с поликлональными антителами. Четыре особи из 19 полученных кур (21%) оказались трансгенными. У трех голов иммунологическими методами был зарегистрирован в крови гормон роста человека. У одной курицы был найден ген гормона роста в сносимых ею яйцах. Положительный эффект способа выражается в том, что он позволяет получить несколько инъекцированных яйцеклеток от одной особи за одну операцию и получить трансгенную птицу. Анализ птицы, полученной по предлагаемому способу приведен в таблице.
Формула изобретения
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСГЕННОЙ ПТИЦЫ, включающий хирургическое вскрытие брюшной полости и микроинъекцию чужеродной ДНК в яйцеклетку, отличающийся тем, что, с целью получения нескольких инъецированных яйцеклеток от одной особи за одну операцию, микроинъекцию чужеродной ДНК проводят через фолликулярные оболочки в зародышевый диск каждой незрелой яйцеклетки яичника без их извлечения.РИСУНКИ
Рисунок 1
