Способ подготовки пробы гемолимфы для электрофоретических исследований

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Изобретение относится к способам биохимической диагностики близкородственных видов и генетико-биохимических исследований, применяемым при изучении генетической структуры видов и популяций, а именно к электрофорезу гемоглобинов. С целью упрощения подготовки пробы и увеличения сроков хранения проб гемолимфы для электрофореза при положительных температурах (до 20-25°С), облегчения транспортировки и подготовки в полевых условиях пробы наносят на пластины из инертного материала, высушивают на воздухе и в таком виде хранят и транспортируют. Перед фракционированием их переводят в жидкое состояние нанесением на мазки 40%-ного раствора сахарозы в трис-глициновом буфере, если проба находится на твердой подложке, или путем размачивания пропитанных гемолимфой кусочков фильтровальной бумаги в 20%-ном растворе сахарозы в трис-глициновом буфере.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„ I 536312 A1 (51)5 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АBTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4329869/28-14 (22) 18,11.87 (46) 15,01.90, Бюл. 11 2 (71) Институт биологии внутренних вод им. И.Д,Папанина (72) Н,А.Шобанов (53) 612,015(088,8) (56) Богданов Л,В„ Коваль Е,Э.

Черноиванов В.А, Рекомендации по использованию электрофоретических данных при межпопуляционных.и межвидовых сравнениях. Владивосток,ТИНРО, 1980, (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРОБЫ ГЕИОЛИ1У1

4Ы ДЛЯ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ (57) Изобретение относится к способам биохимической диагностики близкородственных видов и генетико-биохимических исследований, применяемых при

Изобретение относится к способам биохимической ди агностики близкородственных видов и генетико-биохимических исследований, применяемых при изучении генетической структуры видов и популяций, а именно к электрофореэу гемоглобинов °

Цель изобретения вЂ” упрощение подготовки пробы и увеличение сроков хранения °

Указанная цель достигается тем, что согласно предлагаемому способу пробы гемолимфы наносят на пластины из инертного материала, высушивают на воздухе при комнатной температуре и в таком виде хранят и транспортируют.

2 изучении генетической структуры видов и популяций, а именно к электрофорезу гемоглобинов, С целью упрощения подготовки пробы и увеличения сроков хранения проб гемолимфы для электрофореза при положительных температурах (до 20-25 С), облегчения транспортировки и подготовки в полевых условиях пробы наносят на пластины из инертного материала, высушивают на воздухе и в таком виде хранят и транспортируют. Перед фракционированием их переводят в жидкое состояние нанесением на мазки 407-ного раствора сахароэы в трис-глициновом буфере, Если проба находится на твердой под- а ложке, или путем размачивания пропиЯ таннмх темолимфой кусочков фильтре- Щ вальной бумаги в 207.-ном растворе сахарозы в трис-глициновом буфере.

Перед фракционированием пробы переводят в жидкое состояние путем нанесения на мазки 407-ного раствора сахарозы в трис-глициновом буфере, если проба находится на твердой пластинке, или путем размачивания пропитанных гемолимфой кусочков фильтровальной бумаги в 20Х-ном растворе сахарозы в трис-глициновом буфере.

Пример. В мае 1986 г. на

Рыбинском водохранилище были собраны личинки CHironomus plumosus (24 экз.) и обработаны следующим образом: каждый экземпляр прокалывали препаровальной иглой на стеклянной пластинке, часть вытекшей .гемолимфы пастеровской пипеткой переносили в 40Х-ный раст153631 2

Составитель В, Зотов

Техред М.Ходанич Корректор И,Муска

Редактор М,Циткина

Заказ 106 Тираж 499 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент", г.ужгорол, у-л. Гагарина,101 вор сахарозы, в трис-глициновом буфере, оставшуюся на пластинке гемолимфу высушивали на воздухе. Сухие пробы гемолимфы хранили при комнатной температуре (20-24 С) в течение

0 5

34 дней. Перед фракционированием сухие пробы на стеклянных пластинках переводили в жидкое состояние путем нанесения на часть мазка нескольких капель 40%-ного раствора сахарозы: в трис-глициновом буфере, Через 3-!

5 мин сухая гемолимфа размокала, ее перемешивали с нанесенным раствором и шприцем наносили на гель, 15

Электрофорез проводили в блоках

7,5% разделяющем полиакриламидном ге ле (рН 3,9) и 4Х концентрирующем.

,Размер пластины геля 230х90х2 мм, ., Электродный буфер вЂ” 0,1 М трис-гли, циновый (рН 8,3). Режим фракционирования контролировали по силе тока.

В режиме предфореза вЂ” 60 мА, при концентрировании вЂ” 30 мА,при разделении вЂ” 25 100 мА. После окончания электрофореза пластину геля помещали на 2-3 мин, в 7%-ный раствор уксусной кислоты, затем на 5 мин в окрашивающий раствор (2 г бенэидина растворяли в 1 л кипящей воды, полученный раствор г ! быстро охлаждали, при этом выпадали розово-серебристые хлопья, добавляли .5 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл

33Х-ной перекиси водорода), затем в

50%-ный этанол на 15 мин, ополаскивали водой или 10Х-ным раствором гли( (церина, промокали между листами фильтровальной бумаги

Сухие пробы после 6 мес хранения при комнатной температуре сохранили спектр, но пероксидазная активность гемоглобинов изменилась, Использование предлагаемого способа подготовки, хранения и транспортировки проб гемолимфы позволяет хранить пробы гемолимфы при комнатной температуре до 6 мес, осуществлять подготовку проб в полевых условиях в многодневных экспедициях без применения специальных реактивов и оборудования, обеспечивает простоту транспортировки проб, пересылку их по почте, в том числе в обыкновенных конвертах, Формул а и э обретения

Способ подготовки пробы гемолимфы для электрофоретических исследований, включающий отбор гемолимфы, хранение и перевод в жидкую фазу, о твЂ” л и ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения подготовки пробы и увеличения сроков хранения, пробу помещают на пластину из инертного материала, высушивают и хранят на воздухе о при температуре не более 25 С, а перевод в жидкую фазу осуществляют

40%-ным раствором глюкозы в трис-глициновом буфере при хранении проб на твердой подложке и 20Х-ным раствором при хранении проб на фильтровальной бумаге.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики опухолей молочной железы

Способ лечения туберкулеза легких // 1534398

Изобретение относится к фтизиатрии

Способ диагностики наружного генитального эндометриоза // 1534397

Изобретение относится к медицине, точнее к гинекологии

Способ дифференциальной диагностики бактериальных и вирусных менингитов // 1534396

Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской микробиологии, и может быть использовано при диагностике менингитов

Способ диагностики аллергического диатеза // 1534395

Изобретение относится к медицине и касается диагностики аллергического диатеза

Способ определения функционального состояния спортсменов // 1533657

Изобретение относится к медицине, в частности к спортивной медицине, и может быть использовано во врачебно-спортивной практике для определения функционального состояния спортсменов

Способ количественного определения полипептидных компонентов средней молекулярной массы в крови // 1532877

Изобретение относится к медицине, а именно к способам исследования крови при диагностике патологических состояний, и может быть использовано для количественного определения полипептидных компонентов средней молекулярной массы в крови

Способ отбора токсичных химических соединений липофильной природы // 1532871

Изобретение относится к медицине, конкретно токсикологии, и может быть использовано для отбора токсичных химических соединений липофильной природы, оказывающих влияние на организм человека

Способ дифференциальной диагностики гломерулонефрита и пиелонефрита у детей // 1532870

Изобретение относится к области медицины, в частности к педиатрии и может быть использовано для дифференциальной диагностики пиелонефрита и гломерулонефрита у детей

Способ определения антиоксидантной активности химических соединений // 1532869

Изобретение относится к экспериментальной и клинической медицине, в частности к медицинской биофизике, клинической фармакологии, биохимии, патофизиологии, и может быть использовано для определения прои антиоксидантной активности химических соединений

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750