Флуоресцентный индикатор перекиси водорода
Изобретение относится к аналитической химии, а именно к флуоресцентным индикаторам перекиси водорода и может быть использовано в различных областях науки и народного хозяйства для определения перекисных соединений. Для этого к раствору производных 1,2,3,4-тетрагидро-β-карболин-3-карбоновой кислоты в фосфатном буфере добавляют равный объем исследуемого раствора, содержащего перекись водорода. Флуоресценцию измеряют после определенного времени инкубирования пробы при 37°С на флуориметре. По калибровочному графику определяют содержание перекиси водорода.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК (!9) (!!) 532867 А1 (51)4 G Ol N 31 22
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н А STOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
2 (57) Лзобретение относится к аналитической химии, а именно к флуоресцентным индикаторам перекиси водорода, и может быть использовано в различных областях науки и народного хозяйства для определения перекисных соединений, Для этого к раствору производных 1, 2, 3, 4-тетрагидро-в-карболин-3-карбоновой кислоты в фосфатном буфере добавляют paBHfN объем исследуемого раствора, содержащего перекись водорода. Флуоресценцию измеряют после определенного времени инкубирования пробы при 37 С на флуориметре. По калибровочному графику определяют содержание перекиси водорода.
1 (21) 4382139/28-26 (22) 23.02,88 (46) 30 ° 12,89. Бюл. II 48 (7 I ) Ленинградский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (72) А.T.Aëåêñeåâ, А.З.Абышев и П.B.,Öûnnåíêoí (53) 54 !.062 (088.8) (56) На(ел Т .1. et .al . Syntesis of
3,6-disu) stituted p-karbolines which
posses Ьепко11ы.pine antogonist or
arsonist activity, ))etегоcycles, 1986, ч. 24, ))" 10, р. 2845-2855.
Европейский патент E) ))" 156261, кл. С 07 D 215/54, 1985. (54) ФЛУОРЕСДЕНТ1Ы)1 )1НД)(КАТОР ПЕРЕ1ЯСИ ВОДОРОДА
)(зобретение относится к аналитической химии, а именно к флуоресцентным индикаторам перекиси водорода, и может быть использовано в химии, биохимии, биотехнологии, медицине, пищевой промышленности, сельском и лесном хозяйстве для флуоресцентного определения перекисных соединений, Пример 1. К раствору с концентрацией I-метил-l,2,3,4-тетрагидро-/ -карболин-3-карбоновой кислоты (МТК) О, 2 мг/мл в 0,14 M фосфатном буфере (рН 6,3) добавляют равный объем исследуемого водного раствора, содержащего перекись водорода. Флуоресценцию измеряют на 30-й минуте
О инкубирования пробы при 37 С на флуориметре "Модель — 3000" (PerkinElmer, Англия): объем кварцевой кюветы I мл,,ширина щели 2,5 нм, длины волны возбуждения к эмиссии - 350 и
430 нм соответственно, По калибровочному графику определяют содержание перекиси водорода.
Пример 2 ° К раствору с концентрацией I ôåíèë-1,2,3,4-тетрагидро- 3-карболин-3-карбоновой кислоты ©
l (ФТК) О, 2 мг/мл в О, 14 М фосфатном М буфере (рН 6;3), содержащему 2 мкг/мл К) перекиси водорода, добавляют равный, Я) объем исследуемого раствора, содер- ) ) жащего пероксидазу хрена. Флуоре сцен- Д цию измеряют на 90-й минуте инкубироо вания пробы при 37 С на длинах волн возбуждения и эмиссии 350 и 410 нм соответственно, По калибровочному прафику определяют содержание пероксида3 эы хрена, Для синтеза предлагаемых соединений требуется всего четыре ингредиента, тогда как для синтеза соединенияпрототипа используют 12 ингредиентов, 1532867
Формула и з о б р е т е н и я ты
СООН
NH где R — СН э ° Са 15 в Качетстве флуоресцентного индикатора перекиси водорода, Составитель М,Бондаренко
Т е хр ед M. яндык Корректор А,Обручар
Редактор Л.Веселовская
Заказ 8093/50 Тираж 789 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 причем синтез осуществляют в одну стадию1тогда как для синтеза соединенияпрототипа проводят четыре технологических стадии.
Ф
Преимуществом использования предлагаемых соединений в качестве флуо.ресцентного индикатора является больший стоксов сдвиг, характеризуемый
1 разностью длин волн эмиссии и возбуждения. Увеличение стоксова сдвига важ- . но в отношении уменьшения фонового свечения при индикации. Из примера 1 видно, что при определении концентрации11 0 длины волн возбуждения и эмиссии равны
350 и 430 нм соотвественно, вследст) вие чего стоксов сдвиг составляет
430-350=80 нм, что превышает таковой параметр прототипа (равный 50 нм).
С помощью КГК возможно проводить анализ перекиси водорода без применения пероксидаэ (см. пример 1), При определении пероксидаэиой активности с ФТК определяемая минималь- 25 ная концентрация пероксидазы около
1 мкг/мп, тогда как в анализе с ис" пользованием прототипа используют
40 мкл раствора пероксидаэы с концентрацией 1 мг/мл, что в пересчете на одну пробу составляет 40 мкг/мл. Это свидетельствует о более высокой чувствительности определения пероксидазы с использованием ФТК.
Предлагаемый индикатор может длительно храниться как в сухом виде, так и в водно-спиртовом растворе без разложения °
Применение производных 1, 2, 3, 4-тетрагидро-р-карболин-3-карбоновой кисло

