Способ получения пероральной композиции для профилактики кокцидиоза у домашней птицы

 

Изобретение относится к области биотехнологии, а точнее к созданию вакцинных препаратов для профилактики болезней сельскохозяйственных животных. Предлагается способ получения пероральной иммуногенной композиции для профилактики кокцидиоза у домашней птицы. Согласно изобретению используют в качестве наполнителя альгинат натрия, 11%-ный раствор которого смешивают с суспензией спорулированных цист кокцидий EIMERIA TENELLA, содержащей 120000 цист в 1 мл, до конечной концентрации 6000 цист в 1 мл. Затем указанную смесь выливают по каплям в водный раствор дигидрата хлорида кальция, получаемые при этом бисеринки выдерживают в указанном растворе 15 мин, после чего их вынимают, промывают проточной водой и сушат до остаточной влажности 15...16%. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (51) 4 А 61 К 39/012 ь t ° м ..ail

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Я ПАТЕНТУ ринок, ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 3874750/30-!3 (86) РСТ/GB 84/00268 (03.08.84) (22) 01,04.85 (31) 83266 /33 (32) 04. 08. 83 (33) GB (46) 07.12,89. Бюл, ¹ 45 (71) Юнилевер Н,В ° (NL) (72) Поль Джеймс Дэвис и Петер Харрис (0В) (53) 616.993.192 ° 1 (088.8) (56) Патент Великобритании ¹ 2008404, кл. А 61 К 47/00, А 61 К 39/68, 06.06. 79, (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕРОРАЛЬНОЙ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ КОКЦИДИОЗА

У ДОМА))НВ,1 ПТИЦЫ (57) Изобретение относится к области биотехнологии, а точнее к созданию

Изобретение относится к биотехнологии, а точнее к созда)п ю вакцинных препаратов дпя профилактики болвзней сельскохозяйственных животных.

Целью изобретения является повышение иммуногенности композиции .

Пример 1. В качестве гелевой основы используют альгинат натрия (! 1anucol LB ), характеризующийся высоким соотношением киспотных остатков маннурановой, гулуроновой кислот и низким молекулярным весом i "Manucol торговое название фирмы Kelko/Alh International), 95 мл водного раствора, содержащего

11 мас.X;1ап1сol 1.,В смешивают с 5 мп водной суспензии жизнеспособных спорулиро ванных ооци ст кокцидий (Eime ri a

2 вакцинных препаратов для профилактики болезней сельскохозяйственных животных. Предлагается способ получения пероральной иммуногенной композиции для профилактики кокцидиоза у домашней птицы, Согласно изобретению используют в качестве наполнителя апьгинат натрия, 11%-ный раствор которого смешивают с суспензией спорулированных цист кокцидий Eimeria tenella, содержащей

120 000 цист в 1 мл, до конечной концентрации 6000 цист в I мл. Затем указанную смесь выливают по каплям в водный раствор ди гидр ата хлорида кальция, получаемые при этом бисеринки выдерживают в указанном растворе 15 мин, Ж после чего их вынимают, промывают проточной водой и сушат до остаточной влажности 15-16Х, 1 табл.

te ne 11 а), содержащей прибли зител ьно

600 000 ооцист.Эту смесь выливают по каплям с высоты 76,2 мм в 5Х-ный водный раствор дигидрата хлорида капьция. Получают бисеринки свернувшегося геля диаметром 5 мм и весом 40 мг.

В течение 2 мин получают 2 500 бисеI

Бисеринки оставляют в свертывающей ванне на 15 мин, отделяют от свертывающего агента и затем вымачивают в течение ночи под током водопроводной воды для удаления избытка хлорида кальция, Затем бисер сушат на адсорбирующей бумаге при температуре окружающей среды по конечной влажности 15-167, 1528329

Пример 2; В качестве гелевого материапа применяют апьгинат натрия, а в качестве увлажнителя — глицин, 45 мл водного раствора, содержащего 11 мас,X Manucol ЬВ (альгината натрия), смешивают с 5 мп суспенэии ооцист кокцидий (как в примере 1) и 50 мл глицерина, Из полученной смеси получают бисер аналогично примеру 1, за исключением того, что избыток хлорида кальция удаляют из желатинизированного бисера путем вымачивания в течение ночи в смеси вода/глице-15 рин 50/50, конечная влажность сухого бисера 15-16 мас,7..

Жизнеспособность ооцист кокцидий в альгинатном бисере, полученном в соответствии с примерами 1 и 2, определяют следующим образом.

После хранения в обеэвоженном, состоянии в течение нескольких дней пробу альгинатного бисера смешивают с 500 г обычного корма для домашней птицы таким образом, что каждый 500граммовый образец содержит приблизительно 2500 бисеринок, Каждый образец корма дают двум 30-дневным циплятам по потребности в течение двух дней. При сохранной жизнеспособности ооцист у всех птиц наблюдают клинические симптомы кокцидиоза с кровью в помете на пятый и шестой день после приема корма, содержащего ооцисты.

Экперимент показывает, что большое количество ооцист кокцидий остается в жизнеспособной форме, несмотря на обработку, которой их подвергают, и

40 они могли удовлетворительно существовать в кишке, несмотря на то, что заделаны в твердой альгинатной гельматрице, Пример 6, Эксперимент прово45 дят с целью подтверждения того, что очень незначительное количество вирулентных спорулированных ооцист, обавленных в композиции согласно предлагаемому способу к корму для домашней птицы, могут выжить и выз50 вать регулируемую субклиническую инфекцию при введении восприимчывым птицам, Хммунитет, создаваемый при такой обработке в течение 27 дней, проводят путем введения 50 000 ооцист,55

Берут две группы по 12 птиц каждая, Первая группа получает ооцистсодержащую диету, начиная с однодневного возраста, а вторая группа получает обычную не содержащую ооцист, диету °

Птицы содержатся за проволокой, так что количество принятых за день ооцист" можно регулировать, Помещение, в котором содержат птиц, предварительно тщательно обрабатывают с целью обеспечения отсутствия оставшихся ооци ст °

Ооцисты получают путем инфицирования четырехнедельных бройлерных цыплят Cobb оральной дозой 50 000 ооцист каждому цыпленку. Лх помет собирают на шестой, седьмой и восьмой день после инфицирования, смешивают приблизительно с двойным объемом 2,57.-ного водного раствора бихромата калия и затем гомогенизируют с целью получения однородной суспензии. Суспензию процеживают через нейлоновое сито, и ооцисты отделяют от фильтрата методом солевой флотации следующим образом, Сначала ооцисты седиментируют центрифугированием со скоростью

1 000 g в течение 15 мин, и осадок повторно суспендируют в насыщенном водном растоворе хлорида натрия, Полученную суспензию центрифугируют со скоростью 500 g в течение 10 мин и оставшуюся суспензию ооцист разбавляют 10 объемами дистиллированной воды, В результате центрифугирования со скоростью 1 000 g в течение 15 мин из ооцисты обраэовываются гранулы.

Повторяют всю процедуру солевой флотации и в заключение полученные гранулы ооцист помещают в 2,57-ный воднвй раствор бихромата калия, Экстрагированные ооцисты подвергают споруляции при непрерывной аэрации суспензий в течение 4 дней при 28 С.

Э ти ооци сты хр аня т при 4 С в буферо ном фосфатном растворе в качестве суспенэии штамма, Биссер получают по способу, описанному в примере 1, за исключением того, что общее количество спорулированных ооцист кокцидий 30 000. 240 бисеринок добавляют к 3 кг куриного корма и дают однодневным цыплятам в течение 3 недель, Количество ооцист, выделявшихся с экскрементами каждой группой, контролируют.

Установлено, что ооцисты выживают в корме в течение периода эксперимента. Существенный иммунитет начинает развиваться вскоре после достижения цыппитами двухнедельного возраста, 29 6

Формул а изобретения

Пример Альгинат — Иаполнитель

Маписol ЬМ,

10 -ная коммер.ческая белая пшеничная мука

1О -ная,коммерческая белая

0,25 пшеничная мука

1 10 -ный каолин

0,25 10 -ный каолин

Составитель С ° Светлышев

Техред M.Дидык

Корректор В.Кабаций

Редактор М,Бланар

Заказ 7520/58 Тираж 643 Подписное

ВИИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101

5 15283 так как отмечается резкое повышение выделения ооцист, которое к 21 дню снижается, Обцисты, вызывающие иммунитет, не оказывают никакого патогенного действия ° В течение всего периода иммунизации не наблюдают в помете кровь и, кроме того, средняя прибавка веса контрольной группы и, группы, у которой создают иммунитет, фактически одинаковая до дня контрольного заражения с целью проверки иммунитета.

Контрольное заражение 50 000 ооцист на 27-й дель вызывает серьезные забо15 левания у контрольной группы, что можно судить по содержанию крови в помете и обильному выделению ооцист. Иммунизированная группа явно не подвергается действию инфекции, но смер- 20 тность не наблюдается в обеих группах, II р и м е р ы 4-7. Применение наполнителей для получения альгинатного бисера.

Бисер получают по методике, описанной в примере 1, с применением раствора, указанного в таблице °

По примерам 2-7 после свертывания и сушки, как в примере 1, получают прочный биссер.

Manucol ЬМ представляет собой альгинат с высоким соотношением кислотиых останков маннурановой: гулуроновой кислот и высоким молекулярным весом, При применении наполнителя предпочтителен высокомолекулярный альгинат, чтобы обеспечить получение геля требуемой прочности.

Способ получения пероральной композиции для профилактики кокцидиоза у домашней птицы, включакщий смешивание суспенэии спорулированных цист кокцидий с наполнителем, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения иммуногенности композиции, в качестве наполнителя используют альги-. нат натрия, 11 -ный раствор которого смешивают с суспензией спорулированных цист кокцидий Eimeria tenella, содрржащей 120 000 цист в 1 мл, до конечной концентрации 6000 цист в

1 мл, после чего указанную смесь выливают по каплям с высоты 76,2 мм в

5 -ный водный раствор дигидрата хлорида, кальция, получаемые при этом бисеринки выдерживают в указанном растворе 15 мин, после чего их вынимают, промывают проточной водой и сушат до остаточной влажности 15- 16K .