Способ определения содержания воды в образцах гемоглобина
Изобретение относится к биохимии и может быть использовано применено в медицинской промышленности. Цель изобретения - упрощение процесса определения содержания воды в образцах гемоглобина. Навеску гемоглобина растворяют, измеряют спектрометрическую концентрацию белка в полученном растворе и по разности массовой и спектрофотометрической концентраций, отнесенной к массовой концентрации, оценивают содержание воды в исходном образце гемоглобина.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
А М
C(X) = ——
Е1 !О
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
flO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHRM
ПРИ ГКНТ СССР
1 l (21) 4152385/31-13 (22) 26.11.86 (46) 15.10.89. Бюл. 11 - 38 (71) Научно-исследовательский институт ядерной физики при Томском политехническом институте им. С.М.Кирова (72) Е.M.×óïðèêoBà (53) 543,21(088.8) (56) Kuntz J.D. Kauzmann W. Hydratation of proteins and po1ypeptides.
Adv. Protein. Chem., v, 28, р. 239245, 1974.
Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. М.: Высшая школа, 1980.
Изобретение может найти применение в медицинской промьппленности и при научных исследованиях.
Цель изобретения — упрощение процесса.
Способ заключается в том, что раствор белка спектрофотометрируют на требуемой длине волны, затем по формуле или калибровочному графику рассчитывают истинную концентрацию белка в растворе (например, в процентах).
Из веса образца и объема раствора рассчитывают его процентную концентрацию,.которая превышает концентрацию, определенную с помощью спектрофотометра, на вес входящей в состав кристаллов белка воды. Разность концентраций, отнесенная к концентрации по весу, представляет собой количество (г) воды, приходящееся на 1 r гемоглобина. (5l)4 G 01 N 33/48, 21/81, 25/58
2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАН1И
ВОДЫ В ОБРАЗЦАХ ГЕМОГЛОБИНА (57) Изобретение относится к биохимии и может быть применено в медицинской промьппленности. Цель изобретения — упрощение процесса определения содержания воды в образцах гемоглобина. Навеску гемоглобина растворяют, измеряют спектрофотометрическую концентрацию белка в полученном растворе и по разности массовой и спектрофотометрической концентраций, отнесенной к массовой концентрации, оценивают содержание воды в исходном образце гемоглобина.
Предложенный способ характеризуется следующей последовательностью операций:
1) взятие навески белкового препарата;
2) растворение навески в измеренном объеме жидкости;
3) расчет концентрации (7) полученного раствора;
4) измерение поглощения исследуемого раствора на длине волны, соответствующей пику поглощения;
5) расчет истинной концентрации белка по формуле где А,— поглощение исследуемого раствора;
Š— молярный коэффициент поглощения раствора;
151510
О 123-0 0915
-О 256 г Н О/г белка, 0,123 L
C 6(С (2) Формула изобретения
0 2227 61 795 -0,09157.
14,8-1 10
Составитель А.Карякин
Техред П.Олнйньпс
Редактор А ° Маковская
Корректор C.IIlåêìàð
Заказ 6271/43 Тираж 789 Подписное
ШИП1ПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственнс-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101
1 — длина пути света в растворе;
М - вес моля белка;
6) расчет влажности исходного препарата белка по формуле где С вЂ” концентрация раствора по весу, 10
С вЂ” концентрация раствора по спектрофотометрическим данным.
Проиллюстрируем способ на примере кристаллического образца человеческого гемоглобина (Met НЬ) ° 12,3 мг НЬ растворяют в 10 мМ буферного раствора 0,05 И трпс-НС1, рll 6,3. Концентрация полученного раствора составляет (из весовых данных) 0,123Х, 20
Кислый Ией НЬ имеет пик поглощения при Л=630 нм с Е,.„, 3,7 на 1 гем (мономер). Величина йоглощения исследуемого раствора составляет:
А 0,226; 0,222; 0,220; 0,223;
A=0,2227.
Подставляя r. формулу (l ) значения
A=0,22?7, пй=61,795 r, 1=1 см, Е
=14,8 на тетрамер, получим 30
4
Содержание воды определяют по формуле (2) Влажность того же образца, измеренная другими методами, составляет.
1) с реактивом Фишера — 0,280 г Н О/r белка;
2) гравиметрически - 0,228 r Н О/r белка.
Предлагаемый способ является более простым по сравнению с известным, поскольку не требует приготовления дополнительных растворов и занимает значительно меньше времени.
Способ определения содержания апды в образцах гемоглобина, включающий взятие навески и оценку результатов, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, взятую навеску растворяют, измеряют спектрофотометрическую концентрацию белка, а оценивают содержание воды по разности массовой и спектрофотометричес-. кой концентраций белка по отношению к массовой концентрации.
