Способ определения содержания прекалликреина в плазме крови
Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к способам определения содержания прекалликреина в плазме крови. Цель изобретения - повышение чувствительности способа определения за счет специфического связывания свободного ингибитора калликреина - α<SB POS="POST">2</SB> - макроглобулина. Для этого в известном способе перед активацией каолином в плазму добавляют метиламин в конечной концентрации 1-1,2%, выдерживают 1,5-2 ч при комнатной температуре. 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК,.БО (g1! 4 С 01 N 33/48
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕ ПНИЯ
H Д BTOPCHGMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ НОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР.1 (21) 4023697/28-14 (22) 14. 02.86 (46) 15,09.89, Бюл, 1 34 (71) 1-й Ленинградский медицинский институт им. акад, И.П.Павлова (72) Г,N.Боголюбова, С.С.Михайлов, А.А.Санковский и И,Г.Щербак (53) 612.015(088,8) (56) Веремеенко К.Н,, Волохонская Л.И., Кизим А,И. и др. Методы определения прскалгикреин-калликреиновой системы в крови человека. Методические рекомендации, Киев, 1978.
Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к способам определения в плазме крови компонентов протеолитических систем, и может быть использовано в клинико-диагностических лабораториях.
Цель изобретения — повышение чувствительности способа, Способ осуществляют следующим образом.
В полиэтиленовую пробирку вносят
0,4 мл плазмы и монометиламина в конечной концентрации 1,2% и оставляют на 1 ч при комнатной температуре, затем эту пробирку помещают в водяную баню при 25 С и вносят 0,4 мл суспензии 1%-ного раствора каолина, После 1-минутного контакта плазмы с каолином отбирают по 0,2 мп смеси в пробирки, содержащие 0,4 мл 0,05 М мединалового буфера, рН 7,6. Добавля? (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ
ПРЕКАПЛИКРЕИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ (57) Изобретение относится к медицинской бирхимии, а именно к способу определения содержания прекалликреина в плазме крови. Цель изобретения — повышение чувствительности способа определения за счет специфичеСкого связывания свободного ингибитора калликреина — 1 -макроглобулина, Для этого в известном способе перед активацией каолином в плазму добавляют метиламин в конечной концентрации 1-1,2%, выдерживают 1,52 ч при комнатной температуре, 1 табл.
1 ют О, 2 мл 1%-ного раствора протаминсульфата и инкубируют пробы 15 мин при 37 С, после чего реакцию останавливают, добавляют 0,8 мл 20%-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ). В контрольные пробы протаминсульфат вносят после ТХУ. После осаждения не расщепившегося протаминсульфата ТХУ пробы центрифугируют 20 мин при
8000 об/мин.
В прозрачном центрифугате определяют содержание аргинина по реакции
Сакагучи в модификации Храмова и соавторов. Для этого к 1 мл центрифугата добавляют 1 мл арствора энтеросептола, 1 мл 2,5%-ного раствора
NaOH и 1 мл NaBrO, После добавления очередного реактива пробы тщательно перемешивают или встряхивают. Интенсивность окраски определяют на ФЭКе чающий активацию плазмы каолином, инкубацию активной плазмы с протаминсульфатом, остановку реакции трихлоруксусной кислотой и определение содержания калликреина по аргинину, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа за счет специфического связывания свободного ингибитора калликреина — -макроглобулина, перед активацией каолином в плазму добавляют метиламин в конечной концентрации
1-1,27., выдерживают ),5-2 ч при комнатной температуре и определяют содержание прекалликреина. !
P V <1000 Р.! 6 1000
А= - — — -----— 2. — 6,1 Р, аЧ N 15лО 1 я!74 2
Содержание ПК, мкмоль аргин. /.
/мин л, при использовании
Р п/п прототипа предложенного способа
Составитель Н.Литвиненко
Редактор И, Келемеш Техред И. Вере с
Корректор С,Черни
Заказ 5535/47 Тираж 789 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
1!3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðîä, ул. Гагарина,!О!
3 1508150 (светофильтр В 5, кювета 10 мм), сравнивая опытную пробу с контрольной.
Количетсво аргинина в пробах служит мерой определения активированно5 го прекалликреина, Активность прекалликреина выражают в микромолях аргинина, отщеплен ного от протаминсульфата 1 л плазмы крови за 1 мин по формуле где Р— количество аргинина в пробе, мкг; !5
V„ — обьем инкубированной смеси, мл; обьем плазмы в пробе, мл; время инкубации;
М вЂ” молекулярная масса аргинина; 20
1000 — пересчет на 1 мл плазмы, При расчете уровня прекалликреина учитывают разность между содержанием аргинина в плазме, активированной в течение 1 мин каолином, и неактиви-.25 рованной плазме.
Полученные данные приведены в таблице.
Предложенный способ может быть использован для определения истинного значения преюалликреина при любых заболеваниях, сопровождающихся изменением прекалликреин-калликреиновой системы. ф о р м у л а и з о б р е т е н и н
Способ определения содержания прекалликреина в плазме крови, вклю1
3
5
7
9
1l
12
Среднее
128,9
112,9
110,2
109,3
122,1
ll4,8
107,2
103,8
112,6
115,2
103,2
124,6
114+8
204,3
198,3
202,0
215,1
216
184,5
200, 5
204, 0
192,4
202, 5
220, 6
204+8
