Способ дифференциальной диагностики туберкулеза и хронических неспецифических заболеваний легких

 

Изобретение относится к области медицины, в частности изиатрии. Целью изобретения является повышение точности способа и достижение возможности диагностики у детей и подростков. Для этого у больного с неясной патологией легких берут кровь из локтевой вены, выделяют из крови лейкоциты, подсчитывают их количество и проводят реакцию НСТ-теста путем добавления к 2 млн лейкоцитов 0,2% нитросиний тетразолий, инкубации их при 37°С в течение 1 ч, после чего клетки разрушают HCL и образовавшийся формазан осаждают центрифугированием. Осадок формазана затем растворяют в диметилсульфоксиде и определяют оптическую плотность пробы при длине волны 492 нм (контрольная проба). Опытная проба отличается от контрольной тем, что перед постановкой реакции НСТ-теста лейкоциты инкубируют с туберкулином (ППД-Л) при соотношении 2 млн. клеток: 5000 ТЕ в 1 мл при 37°С. Затем рассчитывают отношение оптической плотности опытной пробы к оптической плотности контрольной и при значении его, равном 0,9 и меньше, диагностируют туберкулез, а при отношении, равном 1,1 и больше,- неспецифические заболевания легких. Использование туберкулина и объективная количественная оценка реакции НСТ-теста с помощью спектрофотометра повышают точность способа 97% (против 80% в прототиве), появляется возможность более точной дифференциальной диагностики у детей и подростков при сохранении безопастности метода для больного.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ.

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

Ъ (51) 4 G 01 N 33/48

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

Ц (:";л109Ц 1

i „,; () ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

° К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4111063/28-14 (22) 13.06.86 (46) 30.05.89. Бюл. 9 20 (71) Московский научно-исследовательский институт туберкулеза (72) В.Н.Олянишин и М.П.Грачева (53) 616.07(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N- 1168257, кл. А 61 К 39/00, 1983. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА И ХРОНИЧЕСКИХ НЕ-

С1IЕЦИФИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЛЕГКИХ (57) Изобретенче относится к области медицины, в частности изиатрии. Целью изобретения является повышение точности способа и достижение возможности диагностики у детей и подростков.

Для этого у больного с неясной пато-, логией легких берут кровь из локтевой вены, выделяют из крови лейкоциты, . подсчитывают их количество и проводят реакцию НСТ вЂ тес путем добавления к 2 млн, лейкоцитов 0,2% нитросиний тетразолий, инкубации их при

37 С в течение часа, после чего клетки разрушают HCf, и образовавшийся

Изобретение относится к медицине, в частности фтизиатрии, и может быть использовано в целях дифференциальной диагностики туберкулеза и хрони-ческих неспецифических заболеваний легких у детей и подростков.

Целью изобретения является повышение точности дифференциальной диагностики и возможности применения диагностики у детей и подростков.

„„SU„„Í83365 А1

2 формазан осаждают центрифугированием. Осадок формазана затем растворяют в диметилсульфоксиде и определяют оптическую плотность пробы при длине волны 492 нм (контрольная проба). Опытная проба отличается от контрольной тем, что перед постановкой реакции НСТ-теста лейкоциты инкубируют с туберкулином (IHIP-Л) при соотношении 2 млн. клеток: 5000 TE в 1мл при 37 С. Затем рассчитывают отношение оптической плотности опытной пробы к оптической плотности контрольной и при значении его, равном 0,9 и меньше, диагностируют туберкулез, а при отношении, равном 1,1 и больше, — Я неспецифические заболевания легких.

Использование туберкулина и объективная количественная оценка реакции ,НСТ-теста с помощью спектрофотометра повышают точность способа 97% (против 80% в прототипе), появляется возможность более точной дифференциальной диагностики у детей и подрост- р ков при сохранении безопасности метода для больного.

Способ осуществляют следующим образом.

У больного с патологией легких неясного генеза в пробирку с O,l мл гепарина и 0,9 мл "среды 199" берут

3 мл крови из локтевой вены. Затем добавляют 1 мл 10%-ного раствора желатина и помещают в термостат при

37 С на 30-40 мин для осаждения эритпоцитов, 3

14833

Плазму отсасыв;вот и центрифугируют

10 мин при 1000 об/мин, к осадку добавляют 5 мл "среды 199", ресусгензируют и подсчитывают количество вы5 деленных лейкоцитов в камере Горяева.

В центрифужные пробирки разливают клеточную суспензио таким образом, б чтобы в каждой пробирке было по 2х10 лейкоцитов, Для проведения спонтанной реакции восстановления НСТ пробирки с клеточной взвесыо центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют

0,2 мл 0,2Х НСТ. Клетки ннкубируют при 37 С 1 ч. После инкубации про-. бирки вновь центрифугируют 1-2 мин при 1000 об/мин, к осадку добавляют 20

0,2 мл 1 н. HCf после чего их тщательно встряхивают и еще раз центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а для растворения осадка добавляют 0,2 мл диметилсульфоксида. После 25 полного растворения осадка объем жидкости доводят фосфатно-солевым буфером до 3 мл.

Для проведения индуцированного теста вначале осуществляют 1-часовую 30 экспозицию лейкоцитов с туберкулином (ППД-Л) при соотношении нейтрофилов с туберкулином 5000 ТЕ в 1 мл при

37 С.

Оптическую плотность формазана в образцах определяют на спектрофотометре при.длине волны 492 нм против

2,8 мл фосфатного буфера с 0,2 мл диметилсульфоксида, После инкубации с туберкулином клетки обрабатываются как описано выше.

Рассчитывают отношение оптической плотности опытной и контрольной проб и при отношении 0,9 и менее диагностируют туберкулез, а при 1,1 и более — хроническое неспецифическое заболевание легких, Пример l. Больной В., 12 лет, поступил для уточнения диагноза, 3аболевание выявлено методом флюорографии ° Контакт с туберкулезным больным отрицает. Вакцинация БЩК в родильном доме, поствакцинальный рубчик 5 мм.

Туберкулиновые пробы с 2 ТЕ положительные в течение последних двух лет.

11ри поступлении жалоб нет. В легких . притупление перкуторного звука с обеих сторон, хрипов нет, На рентгеноГрамме грудной клетки обнаруживают65

4 ся инфильтративные изменения в верхних отделах легких с обеих сторон.

Общий анализ крови: лейкоциты

4600, эозинофилы .1, нейтрофилы 51, лимфоциты 38, моноциты 10, п/я 4, re моглобин 66, эритроциты 4, ц.п. 0,8, СОЭ 5 мм, НСТ-тест-спонтанная реакция 301 ЕД, индуцированная реакция

ыа туберкулин 210 ЕД, отношение опти" ческой плотности опытной и контрольной проб равно 0,7. В результате полученных данных и на основании НСТтеста заподозрен инфильтративный туберкулез легких. Тест-терапия и динамическое наблюдение за рентгенограммами грудной клетки подтвердили клинический диагноз.

Пример 2„Больной С., 14 лет, поступил в институт для уточнения диагноза, Контакт с туберкулезным больным отрицает. Вакцинация БЦЖ в родильном доме, ревакцинация в первом классе имеет два поствакцинальных рубчика. Туберкулиновые пробы положительные с 2 ТЕ. Заболевание выявхепо 25/1-84 года, когда обнаружены изменения в легких и внутригрудных лимфатических узлах с обеих сторон.

При поступлении жалобы на кашель с мокротой, одышка при физической нагрузке. В легких при аускультации жесткое дыхание и сухие хрипы с обеих сторон. На рентгенограмме грудной клетки обнаруживаются усиление легочного рисунка и расширение корней легких с обеих сторон. Общий анализ крови: лейкоциты 6300, нейтрофилы 52, лимфоциты 36, моноциты 11, п/я 3, гемоглобин 78, эритроциты 5 0 ц.п.

0,8, СОЭ 15 мм. НСТ-тест-спонтанная 1 реакция 242 ЕД, индуцированная реакция на туберкупин 310 ЕД. Отношение оптической плотности опытной и контрольной проб равно 1,3. На основании анамнеза, клинико-рентгенологической картины и данных НСТ-теста был заподозрен хронический бронхит. Неспецифическая тест-терапия и клинико-рентгенологические данные в динамике под" твердили диагноз хронического бронхита.

Пример 3 ° Больная К., 7 лет, поступила в детско-подростковое отделение 1ЛИ1Т N3 РСФСР для уточнения диагноза. Заболевание выявлено при профосмотре. Контакт с туберкулезным больным не установлен. При поступлении жалобы на слабость, снижение аппеФормула изобретения

Способ дифференциальной диагностики туберкулеза и хронических неспецифических заболеваний легких пуЗд тем постановки реакции НСТ-теста, . отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа и возможности применения диагностики у детей и подростков, постановку реакции НСТ-теста проводят с туберкули-". ном, затем добавляют в пробу диметилсульфоксид, измеряют оптическую плотность полученного раствора, рассчитывают отношение опытной пробы к конт4р рольной и при его показателе 0,9 и менее диагностируют туберкулез, а при 1,1 и более — хроническое неспецифическое заболевание легких.

Составитель А.Яхъяев

Редактор Н.Горват Техред N,Дидык Корректор А.ббручар

Заказ 2822/42 . Тираж 789 Подписное

ЬЬ

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

5,14833 тита и потливость. В легких хрипов нет, На рентгенограмме грудной клетки

-корень правого легкого незначительно расширен, наружный контур его

5 слегка волнистый. Умеренно сужен просвет правого верхнедолевого бронха.

Реакция Манту с 2 ТЕ 20 мм. НСТ-тест: спонтанная реакция (контроль)

220 ед.опт.пл., индуцированная реак- 10 ция на туберкулин (опыт) — 198 ед. опт.пл.

Отношение оптической плотности опытной и контрольной проб равно 0,9..

Клинический диагноз: туберкулез внутригрудных лимфатических узлов справа 15 в фазе инфильтрации, БК(-).

После назначения противотуберкулезной терапии: стрептомицин 20 мг/кг, изониаэид 15 мг/кг, ПАСК 200 мг/кг на фоне витамино-десенсибилизирующей терапии отмечена положительная клиникорентгенологическая динамика.

Пример 4. Больной Г., 10 лет, поступил в детско-подростковое отделение МНИИТ МЗ РСФСР для уточнения 25 диагноза. Заболевание выявлено по обращаемости в августе 1985 года. При поступлении жалобы на сухой кашель и одьппку. В легких хрипов нет. На рентгенограмме легких с обеих сторон перибронхиальные и периваскулярные уплотнения, преимущественно в прикорневой зоне, расширение корней легких, усиление легочного рисунка эа счет интерстициальных изменений, уплотнение медиастинальной и междолевой плевры.

Функция внешнего дыхания: нарушение легочной вентиляции III ст., рестриктивный тип III ст. Реакция

Манту с 2 ТŠ— 5 мм. НСТ-тест: спонтанная реакция (контроль) 60 ед.опт.пл. индуцированная реакция на туберкулин

65 6 (опыт) 66 ед.опт.пл. Отношение оптической плотности опытной и контрольной проб равно 1,1. Клинический диагноз: идиопатический фиброзирующий альвеолит.

Применение предложенного способа дифференциальной диагностики с помощью НСТ-теста с оценкой спонтанной и индуцированной реакцией на туберкулин позволяет с большей точностью исключить или подтвердить туберкулезную этиологию неясной патологии легких у детей.

Точность способа повьппается на 17 и достигает 977.. Исключается субъек" тивиэм при оценке результатов анализа благодаря объективной количественной оценке результатов анализа с помощью спектрофотометра, метод становится доступным для выполнения без специалиста-цитолога, что расширяет сферу его применения.