Способ определения малонового диальдегида в биологическом материале

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано при исследовании процесса перекисного окисления липидов. Цель изобретения - повышение точности способа - достигается за счет предотвращения образования дополнительных окрашенных соединений в реакции с тиобарбитуровой кислотой. Исследуемую пробу фиксируют 70-90%-ным этиловым спиртом, затем обрабатывают тиобарбитуровой кислотой при концентрации этилового спирта 70- 90%, нагревают и спектрофотометрически определяют содержание малонового диальдегида по оптической плотности при 560 нм. Способ существенно повышает селективность и точность определения малонового диальдегида и исключает применение агрессивных кислот - соляной и трихлоруксусной. (Л с

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU„„>469460 А1 (51)4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

2 ванного образца (образцы ткани предварительно poJlxHbl быть прогомогенизированы в этаноле и отцентрифугирова ны) прибавляют 2 мп насыщенного раствора тиобарбитуровой кислоты (ТБК) (около 0,5X) и нагревают 30 мин при

85 С. При этом конечная концентрация этанола составляет 25-32X.. Полученные образцы охлаждают, центрифугируют или фильтруют для удаления денатурированного белка и определяют оптическую плотность при 532 нм относительно слепого образца или дистиллированной воды. Концентрацию малонового диальдегида (1ЩА) рассчитывают по коэффициенту малярной экстинкции окрашенного триметинового комплекса, равному 156000 N cM

Пример 1. В суспензию мембран .саркоплазматического ретикулума

° r ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ fE(HT СССР (21) 42351 38/28-14 (22) 24.04.87 (46) 30.03.89. Бюл. и 12 (71) МГУ им.И. В.Ломоносова (72) А.И.Дупин и А.А.Болдырев (53) 612.015(088.8) (56) Владимиров 10.А., Арчаков А.И.

Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. N. Наука, 1972, с. 242. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИАЛОНОВОГО

ДИАЛЬДЕПЩА В БИОЛОГИЧЕСКОМ NATEРИАЛЕ (57) Изобретение относится к биохимии и может быть использовано при исследовании процесса перекисного окис1

Изобретение относится к биохимии и медицине и может быть использовано . для количественного определения вторичного продукта перекисного окисления полиненасыщенных жирнокислотных остатков липидов биологических образцов: тканевых препаратов, изолированных клеточных мембран, вЂ” как в интактном состоянии,таки при изучении окисляемости липидов в процессе индукции модельного перекисного окисления (ПОЛ) .

Цель изобретения вЂ” повышение точ( ности способа за счет предотвращения образования дополнительных окрашенных соединений.

Способ осуществляется следующим образом.

Биологический материал фиксируется этанолом в конечной концентрации

70-902 по объему. К 1 мл зафиксироления липидов. Цель изобретения вЂ” повышение точности способа вЂ” достигается за счет предотвращения образо-. вания дополнительных окрашенных соединений в реакции стиобарбитуровой кислотой. Исследуемую пробу фиксируют

70-90Х-ным этиловым спиртом, затем обрабатывают тиобарбитуровой кислотой при конпентрапии этилового спирта 70907., нагревают и спектрофотометрически определяют содержание малонового диальдегида по оптической плотности при 560 нм. Способ существенно повышает селективность и точность определения малонового диальдегида и исключает применение агрессивных а

Ж кислот вЂ” соляной и трихлоруксусной.

1469460

Формула и з о б р е т е н и я

Способ определения малонового диальдегида в биологическом материале путем фиксации биопробы, обработки ее тиобарбитуровой кислотой при

HarpeBBHHH, центрифугирования и после дующего колориметрирования супернатанта, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет предотвращения образования дополнительных окрашенных соединений, фиксацию пробы проводят

70-90%-ныл этиловым спиртом, а обработку тиобарбитуровой кислотой осуществляют в присутствии 25-32Хного этилового спирта.

Составитель Н. Гуляева

Техред И.Дидык Корректор Л. Патай

Редактор К. Крупкина

Заказ 1355/52 Тираж 788 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР

11303 5, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Проиэводстненно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина,101 скелетных мышц кролика или лягушки (1 мг/мл по белку) вносят FeS0< и аскорбат в конечных концентрациях

10 и 200 мкИ соответственно. Через

1, 3, 6, 10, 20 и 30 мин по 0,1 мл

5 образца вносят в пробирки с 90 -ным этанолом или 30 .-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ) 1 мл. Затем добавляют по 2 мл 0,5 -ного водного раствора 1р

ТБК и нагревают 30 мин при 85 С °

Охлажденные пробы центрифугируют

5 мин при 3-5 тыс.g и колориметрируют относительно пробы, взятой в нулевой момент времени. Осуществление !5 определения ИДА н тем и другим спосо бом дает практически одинаковые величины прироста этого продукта ПОЛ, од» нако проведение цветной реакции в присутствии ТХУ приводит к образованию интенсивно окрашенного ТБКвЂ” производного сахарозы (Л « =445 нм), присутствующей в стандартной среде хранения мембранных препаратов. В то же время укаэанный пик отсутству- 25 ет, если в качестве фиксирующего агента использовали этанол (определение проводили в присутствии 32 ного этанола).

Пример 2. Аскорбат-зависи- 39 мое ПОЛ мембран ретикулума проводили, как в примере 1, за исключением того, что концентрация этанола при фиксации составляла 70% в средевЂ”

25 ., а вместо раствора ТХУ использовали дистиллированную воду. Корректное определение ИДА в водной среде возможно лишь в отсутствии ионов железа несмотря на то, что в обоих случаях не наблюдается взаи- щ модействия ТБК с сахарозой, вносимой в инкубационную среду вместе с фрагментами мембран.

Пример 3. Аскорбат вЂ” зависимое ПОЛ осуществляли, как в примере 1. На 30 мин после индукции ПОЛ аликвоты суспензии мембран добавляли к водно-этанольной смеси с разным количеством спирта. После этого осуществляли анализ ИДА. Оптимальная конечная концентрация этанола, необходимая для осуществления исследуемой цветной реакции, составляет 2530 по объему, при фиксации 70-90 .

Таким образом, предложенный спо соб определения малонового диальдегида в биологическом материале обеспечивает по сравнению с известныя существенное повышение селективности и точности определения ИДА при полном сохранении чувствительности метода-прототипа. В качестве фиксирующего агента и компонента реакционной смеси используется нетоксичный и доступный реактив вЂ” этанол, полностью исключается применение агрессивных кислот вЂ” соляной н трихлоруксусной.

Изобретение относится к методам определения вольтарена в биолоа ических жидкостях

Способ диагностики демодикоза // 1469291

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии

Способ определения эффективности гемосорбции // 1468488

Изобретение относится к медицине, в частности к методам экстракорпоральной детоксикации организма, и может быть использовано для оценки лечебного действия гемосорбции

Способ оценки повреждения сосудов атеросклерозом // 1467429

Изобретение относится к медицине и позволяет повысить точность L оценки степени атеросклероза

Способ определения поверхностного давления биологических мембран // 1465768

Изобретение относится к области молекулйрной биологии и может быть использовано для изучения поверхностного давления (Пд,) различных клеточных мембран и регистрации изменений в них

Способ определения сорбционной активности ткани // 1465767

Изобретение относится к медицине , в частности к методам изучения функциональной сорбционной активности тканей в цитофизиологии, патоморфологии, трансплантологии и т.п

Способ определения гликозилированных белков крови // 1465766

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для проведения биохимических анализов в клинике и эксперименте

Способ определения качественного и количественного состава солевого раствора внеклеточного типа при замораживании // 1465765

Способ лечения больного с острой почечной недостаточностью // 1464083

Способ прогнозирования осложненного течения острого гастроэнтероколита у детей // 1464082

Изобретение относится к области медицины, в частности к гастроэнтерологии

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750