Способ определения тиамина в биологических жидкостях

 

Изобретение относится к медицине , в частности к способам определения тиамина в биологических жидкостях . Целью изобретения является повышение чувствительности и точности способа, а также его упрощение. Сущность способа состоит в том, что инкубирование проводят в течение 15- 20 мин, водный слой отделяют центрифугированием при 1000 об/мин, в контроль добавляют феррицианид, предварительно инактивированный ,, а экстракцию изобутанолом проводят при соотношении раствор - изобутанол 1:0,7.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5и 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ. И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4101629/28-14 (22) 06.06.86 (46) 28.02.89. Бюл. № 8 (71) Всесоюзный онкологический научный центр ANH СССР (72) Е.В.Ольшевская и Э.Г.Горожанская (53) 616.015(088.8) (56) Лабораторное дело. 1962,¹ 1, с. 26-31. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИАИИНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ (57) Изобретение относится к медициИзобретение относится к медицине, а именно к биохимии, в частности к способам определения тиамина в биологических жидкостях и тканях.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет удаления не прореагировавшего феррицианида перекисью водорода, а также добавлением в контроль феррицианида, предварительно инактивированного добавлением перекиси водорода.

Пример 1 ° Определение тиамина в крови.

В две пробирки вносят по 0,5 мл крови, добавляют 3 мл 0,25 НС1 и кипятят 15 мин на водяной бане,. затем. добавляют по каплям 207 На СОз до рН 5,2. В одну пробирку добавляют

1 мл дистиллированной воды (для анализа на свободный тиамин), а во вторую пробирку 1 мл 17.-ной суспензии

SU» 1462195 А1 не, в частности к способам определения тиамина в биологических жидкостях. Целью изобретения является повышение чувствительности и точности способа, а также его упрощение ° Сущность способа состоит в том, что инкубирование проводят в течение 1520 мин, водный слой отделяют центрифугированием при 1000 об/мин, в контроль добавляют феррицианид, предварительно инактивированный Н О, а экстракцию изобутанолом проводят при соотношении раствор — изобутанол

1:0,7. препарата кислой фосфатазы и инкубио руют 15 мин при 37 С с последующим кипячением в течение 10 мин,. на водяной бане (для анализа на общий тиамин). В обе пробы добавляют по 0,5 мл

20%-ной ТХУ, кипятят 3 мин и центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, надосадочную жидкость встряхивают с 5мл изобутилового спирта и эмульсию центрифугируют при 1000 об/мин в течение

1 мин. Для определения тиамина флоу.. риметрическим способом отбирают водную фазу и обрабатывают окислительной смесью для превращения тиамина в тиохром. С этой целью из каждой пробы 1,5 мл водного слоя, полученного после центрифугирования, .вносят в пробирку, содержащую 2 мл окислителя (1 часть 307 NaOH и 1часть

1%-ного феррицианида калия), перемешивают, а затем добавляют 2 капли

37-ной перекиси водорода для разруз 1462195 ,. шения непрореагировавшего феррициани- (43 — 40) х 10 мкг

: :да. В качестве контроля в каждом 90 — 30 случае используют 1,5 мл водного

= 0,5 мкг слоя, который смешивают с 2 .мл окислительной смеси, предварительно ин6 концентрация свободного тиамина в активированной путем добавления в и о анной путем добавления в KposH составляет 0,5 мкг . Расчеты содержания общего тиамина проиэворода. Опытные и контрольные пробы дит по аналогичн и фоРмУ, Р этом

5 M H$06yTèëaÂo о длЯ пРиводимого ПРHMePa а PaBHHeòñß

85, б — равняется 40 ед. по шкале

" 1000 об/мин. Отбирают 2 мп изобута1 (85 — 40) х 10 мкг . кола и флуориметрируют при длине С

90 — 30

; волны возбуждения 310 нм и длине, волцы испускания 420 нм. 18 = 7,5 мкг ..

Расчеты содержания тиамнна в кро- Общая концентрация тиамина составви производят по следующей формуле: ляет 7,5 мкг ..

Формула изобретения

Для конкретных значений, приведенных в скобках, расчет имеет следующий Видна

Редактор Н.Горват

Составитель Л.Сабурова

Техред N.Ходанич Корректор С.Патрушева

Заказ 667/41

Тираж 788

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-.35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 (а — б) х С а - б (t . где С - концентрация :тиамина в крови в мкг .; а - показания опытной пробы (43 ед. по шкале прибора); б - показания .контрольной пробы (40 ед. по шкале прибора);

С - концентрация тиамина в стан дартной пробе (10 мкг ); а - показания стандартной про-. ( бы (90 ед. по шкале прибора); б - показания контроля к стан( дарту (30 ед. по шкале прибора).

Способ определения тиамина в биологических жидкостях путем добавления к исследуемой пробе соляной кислоты, кипячения, нейтрализации, обработки кислой фосфатазой, инкубации, осаждения ТХУ, добавления изобутанола к надосадочной жидкости, феррицианида в качестве окислителя, экстракции изобутанолом с последующим флуориметрированием в сравнении с контрольной пробой, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, проводят повторную экстракцию изобу3 танолом, при этом предварительно непрореагировавший феррицианид удаляют обработкой смеси перекисью водорода, а в контрольную пробу допол" нительно добавляют феррицианид, ин активированный перекисью водорода.