Способ определения гепарин-кофакторной активности антитромбина ш в плазме крови,содержащей гепарин

 

Изобретение относится к гематологии. Цель изобретения - повышение точности. В пробирку вносят гепарин, раствор тромбина и дефибринированную плазму пациента. Соотношение объема плазмы к общему объему смеси равно 1:11, а содержание гепарина 3,0-3,6 ед/мл смеси. Смесь инкубируют. В смесь добавляют раствор эуглобулиновой фракции донорской плазмы крови и регистрируют время образования сгустка. Образцы зуглобулиновой фракции стабилизированы этилендиаминтетраацетатом, их можно хранить в течение 7-10 дней.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„Я0„„1461462 А 1 (5D 4 А 61 К 35 16

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АBTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Получение раствора эуглобулиновой фракции: в пробирку наливали 8 мл дистиллированной воды, 0,18 мл l %-ного раствора уксусной кислоты и 0,5 мл контрольной обедненной тромбоцитами плазмы. Полученную смесь инкубировали 30 мин при +4 С, затем центрифугировали 5 мин при

1500 об/мин. Надосадочную жидкость удаляли, осадок растворяли в смеси 0,1 мл 1%-ного раствора этилендиаминтетрауксусной кислоты и 0,4 мл буфера Михаэлиса рН 7,8. Образцы эуглобулиновой фракции можно готовить заблаговременно и хранить их 7 — 10 сут.

Для этого полученный осадок эуглобулиновой фракции хранится при (— 20) С, а непосредственно перед использованием его размораживают и растворяют в указанной смеси.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ll0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4230480/28-14 (22) 15.04.87 (46) 28.02.89. Бюл. № 8 (71) Алтайский государственный медицинский институт им. Ленинского комсомола (72) К. М. Бишевский и А. Д. Цалихин (53) 615.361.018.51/55 (088.8) (56) Hiemburger, Karges. 1 aboratoriumsbl3tter. 1978, 2866, р. 65 — 70.

Изобретение относится к медицине, в частности к гемокоагулогии, и может быть использовано при лабораторной диагностике нарушений свертывания крови.

Целью изобретения является повышение точности.

Способ осуществляют следующим образом.

Получение дефибринированной обедненной тромбоцитами плазмы исследуемого: из локтевой вены в пробирку забирали кровь с

3,8%-ным раствором лимоннокислого натрия (9:1). Кровь центрифугировали при

1500 об/мин 7 мин. Снимали богатую тромбицитами плазму и вновь центрифугировали при 4000 об/мин 20 мин. Надосадочный слой снимали, полученную обедненную тромббцитами плазму прогревали при 56

6 мин, затем центрифугировали при

4000 об/мин 20 мин. Надосадочный слой— обедненную тромбоцитами дефибринированную плазму снимали для проведения исследования. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕПАРИН-КОФАКТОРНОЙ АКТИВНОСТИ АНТИТРОМБИНА 111 В ПЛАЗМЕ КРОВИ, СОДЕРЖАЩЕИ ГЕПАРИН (57) Изобретение относится к гематологии.

Цель изобретения — повышение точности. В пробирку вносят гепарин, раствор тромбина и дефибринированную плазму пациента. Соотношение объема плазмы к общему объему смеси равно 1:11, а содержание гепарина

3,0 — 3,6 ед/мл смеси. Смесь инкубируют. В смесь добавляют раствор эуглобулиновой фракции донорской плазмы крови и регистрируют время образования сгустка. Образцы эуглобулиновой фракции стабилизированы этилендиаминтетраацетатом, их можно хранить в течение 7 — 10 дней.

Получение контрольной обедненной тромбоцитами плазмы: образцы обедненных тромбацитами плазм, полученных от 10 здоровых доноров, смешивали в равных объемах.

1461462

Составитель Г. Будякова

Редактор Н. Горват Техред И. Верес Корректор Л. Пилипенко Заказ 508/5 Тираж 644 Г1одписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат «Патент», г. Ужгород, ул. Гагарина, 101

Построение калибровочной кривой прово или по соотношению скорости образовани сгустка в смеси с контрольной плазмо" и разведения этой плазмы. В качестве контрольной использовали обедненную тромбацитами донорскую плазму, принимая ее ак1гивность за 1ООЯ, разведение в 2 раза—

50 ), в 4 — 25оА, и в 8 раз — 2 5о

Ход определения. В отдельную пробирку в осили 0,1 мл раствора гепарина конц нтрацией 10 — 12 ед/мл, 0,2 рабочего раств ра тромбина с активностью 4 — 5 с и 0,03 мл д фибринированной, обедненной тромбоцит ми плазмы исследуемого. Полученную р агирующую смесь, в которой соотношен е объема исследуемой плазмы к общему о ъему смеси равно 1:11, а содержание гепар на 3,0 — 3,6 ед/мл смеси инкубировали при

3 С 3 мин, затем добавляли 0,2 мл раствор эуглобулиновой фракции и тотчас включ ли секундомер. Регистрировали время обр зования сгустка. По калибровочной кривой определяли гепарин-кофакторную активность AT III в плазме крови (Я).

Воспроизводимость способа о=+ 6,3oо, известного способа а= +11,6Я.

Формула изобретения

Способ определения гепарин-кофакторной активности антитромбина III в плазме крови, содержащей гепарин, путем получения обедненной тромбоцитами плазмы, инкубации ее с тромбином с добавлением избытка гепарина и вещества, индуцирующего образование сгустка, и регистрации времени образования сгустка, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, 15 плазму дополнительно дефибринируют, гепарин добавляют в концентрации 3,0 — 3,6 ед. на

1 мл смеси при соотношении объемов плазмы и смеси, равном 1:11, а в качестве вещества, индуцирующего образование сгустка, применяют эуглобулиновую фракцию донорской плазмы крови, стабилизированную этиленди а м и нтетр а а цетатом.