Способ получения носителя иммуноглобулинов для обнаружения возбудителя чумы

СОЮЗ COBETCHHX

СОЯМ ЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСП ". ЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

1 10 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ! g !;, " I ° «P»

1 !

И АВТОРСКОМУ СВИДЕ П=ПЬСТВУ!! (46) 15.06.92. Бюл. Р 22 (21) 4041357/14 (22) 61. 1 1 . 85 (71) Ростовский-на-Дону государственЪ ный научно-исследовательскии противочумный институт (72) А.Н.Наркевич, Е.В.Безуглова, . А.П.Кочеткова и В.А.Козлова (53) 576.8.093(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 1227006, кл. G 01 Я 33/531, 1985. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НОСИТЕЛЯ"ИИИУ. НОГЛОБУЛИНОВ ЛПЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ВОЗБУДИ

ТЕЛИ ЧУМЫ (57) Изобретение относится к медицин-, ской микробиологии, точнее к серологическим методам лабораторной диагностики чумы. Цель изобретения †yn, SU, 44 578 А1 (51) 5 0 01 N 33 531 мощение снособа получения носителя иммуноглобулинов и повыаение качества целевого продукта за счет ускорения обнаружения возбудителя чумы.

Для этого в дистиллированной воде растворяют поливинилпирролидон, диоксан, акролеии, перемешивают, добавляют гидразин и конго красное в 4Я воды по отноюению ко всей реакционной смеси. Смесй перемеаивают ч для завершения роста полимерньас частиц, доводят рй до 11,Ь добавлением раствора едкого натра я перемешивают еще 1 ч. Полимерную дисперсию с частицами 9 3 мкм осавдают цеитрифугированием и отмйвают дистиллированной водой.

1443578

И:-.Обретение Относится к медицин кой м11кробе1ояогии, я именно к сероло гЕЕч1 с к1н! методам лабораторной ДиагНОСТНК1! С!У11Ь1

И.1пестен способ получений носителя е111му11оглобули11он На основе зритро11е1топ баря!!я, Пелью 1!зобре !Ее1!11я является упрощение епособя получее!ия носитЕля иммуноглобулинов и повышение качества целевого продукта за счет ускорепия

Обнару.;кения Возбудителя чумь1.

П р и м e p 1, В б9,6% дистиллироняе111О11 воды растворяют 1% поливинилнирролипоня, 4% диоксана и 21% якролеиня. К раСтпору при перемешива-. н1И доба!;,г нют 0,2% гидразина и 0,2%

1;ОЛГО КРЯСНОГО Б l% ПОДЫ ПО ОТ!!ОШЕНИЮ ,О всей реях!!11онной смеси. Смесь пере-О е1е..1!1111я1п1 ч для завершения роста по11нмерн1:1х частиц, зятем доводят рН до 11,0 Добе1влением 0,2N раствора едкого 11ятря и перемешивают еще 1 ч. по11имр11у1о дисперси1о с диаметром чяс.- 2 гетц 5 мкм Осяждя1ат центрифугированием

«1 О li l-1Ы11ЯЮТ ДИСТИЛЛИРОБЯН НОЙ ВОДОЙ о

П р н м е p Z, Б 71,75% дистилли" ро1!анной 1!Оды растворяют 1% поливинил-, .

Д11рролидое1я, 4% диоксана, 19% акролеи

11я, 1(расте1ору для полимеризации добяпллют 0,15% гидразина и О, 1% конго красного в 4% воды. Далее поли- меризяцпю проводят при рй 10,5. Диа1 метр частиц препарата 3 мкм. и р е1 м е р 3. Смесь 74, 1% дистил11ирОБяннОЙ воды, 0,5% ПОливинилпир-ролмдое!я, 4% Двоксяня и 17% аКролеица нолимеризуют, кяк в примере 1.

Диаметр частиц препарата 2,5 мкм. 4

H p и м е р 4. Приготовление диагпостикумя..Смесь 100 мг суспензии полимера и 0,25-1 О мг иммуноглобулина в 3 мл забуференного физиологе ческого раствора хлористого натрия с рН 7,0. выдерживают при периодическом перемешивянии 18 ч при 4 C. Отмытый физио логическим ряствором хлористого натрия препарат сусеЕендируют в 8 мл этого раствора с 0,1% бычьего сывороточного альбумина и используют для постановки реакции.

Пример 5. Методика постановки реакции. В лунки полистироловых Плас-, тиее разливают по 0,5 мл раствора

1%-е!Ой 11орияльной! кроличьей сыворотки>> и физиологическом растворе хлОристО го натрия. В первую лунку добавляют

0,5 мл 11сследуемого материала в физиологическом растворе и путем последовательного переноса 0,5 мл смеси из лунки в лунку готовят последовательные разведения. Контрольные лунки не содержат антигена. В каждую лунку добавляют по 1 капле сенсибилиэированной суспенэии .полимера, пластинку осторожно встряхивают, оставляют иа

1,5-2 ч, после чего производят учет реакции. При положительной реакции образуется агглютинат, равномерно выстилающий дно лунки. При отрицательном результате и в контроле пре- парят собирается на дне лунки в виде компактного осадка или колечка красного цвета.

Предлагаемый способ Ероще, чем способ-.-.рстотип: полимеэизация проте.— кает в одн стадию, носитель пслучается окрашенным, имеет готовые реяк" ционные ге;упны и не нужпается в дополнительной химе1ческой Обработке.

Полученный на основе этого носитеЛя диагностикум позволяет обнаруживать в объемных сероло1ических 1 еакциях возбудитель чумы за 1,""2 что в 3-4 раза быстрее, чем с помощы6 диагностикума, Приготовленного по способу-прототипу.

По чувствительности диагностикум, полученный на основе предпагаемого носителя, не уступает диагностик.му, описанному в прототипе и эритроцитафному чумному.диагностикуму, Диагности1сум, 11,.1лученный опиаывае" мым спосооом, был проверен на специ» фичность с 15 штаммами Y.pseudоtuber со1ов1s, II - Е.со1i, 6 - V.cholerae, 10 - 7.йа, 4 " V.eltor, 5 " Aегоmoпав, I - В.mallei, Х вЂ” В.11веМоша1

lei, 5 - Pseudomonas, 16 " Fr.eula"

rensis, 3 - В.antracoides, 4 - Sh.

dysenteriae, 5 - 8taph.aureus, 5—

Commamonas.

С указанными микроорганизмами в концентрации 10.м.к./мП реакции были отрицательны. г

Ф о р м у л а и s o á .ð е ò å ÿ è é

Способ получения носителя иммуно" глобулииов для обяаружения возбудителя чумь1, включающий полимеризацию мономера в водном растворе, о т л и " ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа и повышения качества целевого продукта sa счет ускова.Составитель Г.Крюкова

Техред M.Õîäàíè÷ Корректор И.Максимиаинеп

Редактор Л.Волкова

Тирам 754 Подписное

ВНИИПИ Госъдарственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раувская наб., д. 4/5

Заказ 2810

Производственно-полиграфическое предприятие, r; Ужгород, ул. Проектная, 4 з 1443578 4 ния обнаружения возбудителя при поли- 0,5-1,0Х поливинилпирролидона, 4Х меризации используют 17.-213-ный вод- диоксана и О,1:-0,2Х красителя конго, ный раствор акролеина, при этом его красного, а затем не менее 1 ч при . инкУбиРУют сначала не менее 1 ч с рН 10,5-1 1,0..

0,15-0,2Х гидразина в присутствии