Штамм бактерий еsснеriснiа coli вкпм nb-4065 для идентификации r-фактора
Изобретение относится к области микробиологии. Целью изобретения является создание штамма для эпидемиологического надзора за R-плазмидами у энтеробактерий. Цель достигается с помощью трансформации штамма плазмидои pKMR 334, выделенной из клинического штамма Shigella sonnei. Использование штамма позволяет расширить имеющийся арсенал тест-плазмид для определения групп несовместимости R-фактора, у энтеробактерий.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК (19) (11) (51)4 С 12 N 15/00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО.ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ
К АВТОРСКОМУ С8ИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4142440/28-13 (22) 29.10.86 (46) 23.11.88. Бюл.9 43 (71) Кубанский государственный медицинский институт им. Красной Армии (72) С.А.Бабичев и А.И.Коротяев (53) 575.224.2:577.2/48(088.8) (56) Zeitschrif.t fair Allgemeine
Mikrobiologie, 1983, ч.23, Р б,р,393401. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI
ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ R-ФАКТОРА (57) Изобретение относится к области микробиологии. Целью изобретения является создание штамма для эпидемиологического надзора за R-плазмидами у энтеробактерий. Цель достигается с помощью трансформации штамма плазмидой pKMR 334 выделенной из клинического штамма Shigella sonnei. Использование штамма позволяет расширить имеющийся арсенал тест-плазмид для определения групп несовместимости R-фактора у энтеробактерий.
1439123
Изобретение относится к микробиологии и может быть исцользовано в це лях наблюдения эа распространенностью
R-плазмид группы 1 пс Z у патогенных энтеробактерий, явившихся возбудителями вспышек и спорадических случаев острых кишечных заболеваний, а также для изучения биологии и совершенство» вания классификации вновь выявляемых 10
R-факторов °
Целью изобретения является созда ние штамма для эпидемиологического
) надзора за R-плазмидами у патогенных энтеробактерий. t5
Цель изобретения достигается с по
1 мощью плазмиды рКМК 334, выделенной из штамма Shigella sonnei, полученного от больного дизентерией, и для безопасности работы введенная в ста -20 дартный лабораторный штамм Е.coli
KI2 C600 Rif". Штамм Е.coli KIZ C600;L
Rif (pKMR334) депонирован в Центральном музее промьппленных микроорганизмов иститута ВНИИгенетика и.может 25 быть использован для изучения групп несовместимости вновь обнаруживаемых
R-факторов ° Это позволит осуществлять эпидемиологический надзор за плазмидами 1 пс Е, изучать биологию и гене 30 тику R-плазмид и совершенствовать их классификацию.
Характеристика штамма.
Морфологические признаки. Клетки
Е.coli K12 C 600 Rif (pKMR 334) име"35 ют вид прямых грамотрицательных палочек величиной 1,4-3,0 0,30,5 мкм,, слабо подвижны, перитрихи, спор и капсул не образуют.
Культуральные признаки. На мясо-. пептонном агаре E. cali KIZC600 Rif (pKMR334) дает слегка выпуклые колонии, полупрозрачные, диаметром 1 3 мм, на среде Эндо - круглые неокрашенные колонии, на кровяном arape круг"- 45 лые гладкие колонии без зоны гемолиэа, на минимальном агаре с добавлением лейцина„ треонина, тиамина - круг лые гладкие полупрозрачные колонии размером 1-3 мм (штамм-ауксоторф по 50 лейцину, треонину, тиамину). На мясопептонном бульоне Е.coli K12 С600
Rif (pKNR 334) образует равномерное помутнение и осадок. физиологические признаки. Е. coli
К12 C600 Rif (pKNR 334) не образует оксидазу, глюкозу расщепляет с обpазованием кислоты и газа, не расщепляет лактозу, ферментирует мальтозу, маннит, арабинозу, маннозу, сорбит, кси» лозу, не ферментирует сахарозу, дуль- цит, инозит. Дает положительную реакцию с метиловым красным, не образует ацетилметилкарбинол в анаэробных условиях, восстанавливает нитраты в нитриты, не усваивает цитрат в качестве единственного источника углерода, не обладает уреазной активностью.
Генетические особенности. Штамм
E.coli K12 С600 Rif (pKMR 334) имеет хромосомную устойчивость к рифампицину (200 мкг/мл). Плазмида детермини рует устойчивость штамма к тетрациклину (100 мкг/мл), стрептомицину (200 мкг/мл) и сульфаниламидам (3000 мкг/мл).
Штамм Е.coli K12 C600 Rif (pKNR 334) используют в.качестве донора в коньюгационном скрещивании.
В качестве реципиента используют штамм Е.coli K12 I53 met pro Nal
Устойчивость к тетрациклину, стрептомицину и сульфаниламидам у трансконь» югантов соответствует таковой у донор ного штамма. Частота переноса
pKMR 334 в бесплазмидный штамм сос-4 тавляет 1,5 10 при 20-часовой конь» югации. При. 5-минутной коньюгации передачи плазмиды в бесплазмидный штамм не происходит.
Пример 1. IIz:açìèäíóþ ДНК из штамма Е.coli K12 С600 Rif " (pKMR 334) выделяют по методу Birnboim, Doly.
Молекулярный,вес определяют по элект» рофоретической подвижности ДНК плазмиды pKNR 334 в О,SX-ном агарозном геле в трис-боратном буфере (рН 8,3) в сравнении с подвижностью молекул
ДНК известного молекулярного веса.
Молекулярный вес pKMR 334 составляет
62 Мегадальтона. Трансформацию клеток стандартного штамма Е.coli K12 802
met ДНК рКМК 334 проводят по методу
Cosloy, Охам. Антибиотикорезистентность трансформантов соответствует таковой у исходного штамма E ñîli
К12 С600 Rif" (pKMR 334). После трансформации свойства плазмиды не изменяются.
Изучают основные молекулярно-биоло- гические и генетические свойства плазмиды pKNR 334. Она не наделяет клетку-хозяина колициногенными, гемолитическими свойствами, не кодирует синтез антигенов колонизации, не способна ингибировать Р-опосредованную
Формула изобретения
Штамм бактерий Escherichia coli
BKIIM Р В-4065 для идентификации Rфактора.
Составитель Т.Забойкина
Техред М,Дидык Корректор А.Обручар
Редактор Н.Гунько
Тираж 520 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Заказ 6041/25
Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4
3 14391 конъюгацию (Fin ), не кодирует R-Мсистем, не наделяет клетку чувствительностью к донорспецифическим фагам
MS2p2, f1, fd, gp, I Ке, I fI, PR4.
Для определения 1 пс-групповой принадлежности штамм Е.coli K12
С600 Rif (pKMR 334) используют в конъюгационных скрещиваниях с представителями различных групп несов- 10 местимости. Оказалось, что pKMR 334 несовместима с р1Е545 (1 пс Е). Учитывая этот факт, а также то, что плазмида pKMR 334 выделена из S.sonnei и отличается этим от других из- 15 вестных плазмид группы 1 пс Z и отличается от них молекулярным весом, можно считать плазмиду pKMR 334 новым представителем группы несовместимости Z. 20
Пример 2. Выделяют штамм дизентерийной бактерии с типичными свойствами, устойчивыми к канамицину и хлорамфениколу. Эту устойчивость определяют конъюгативной R-плазмидой.
Для эпидемиологического анализа выясняют, в каких районах циркулирует тот же самый штамм возбудителя. В качестве эпидемиологической метки выбирают присутствующую в штамме R- 30 плазмиду. Чтобы решить поставленную эпидемиологическим анализом задачу, нужно определить 1пс-принадлежность этой плазмиды, так как именно это свойство является важнейшей характе- . 35 ристикой плазмиды. Проверить ее совместимость с имеющейся в коллекции прототипных плазмид pIE545 как пред23
4 ставителем группы I nc Z не пред» ставляется возможным из-за того, что и pIE545 и исследуемая плазмида устойчивы к канамицину. Невозможно создать селективные условия для от бора клонов при проверке стабильнос ти сосуществования обеих плазмид в одном штамме. Используется штамм с плазмидой pKMR 334 как представитель группы 1 пс Z в качестве реципиента в конъюгационном скрещивании, в который передается исследуемая плазмида.
Отбор трансконъюгантов ведут на среде с канамицином (маркер донорной плаз миды) и рифамицином (маркер хромосомный реципиента). После проверки фено типа трансконъюгантов оказалось, что клетки устойчивы как к канамицину (маркер исследуемой плазмиды), так и к тетрациклину и стрептомицину (маркер резидентной плазмиды). Стабильное их сосуществование сохраняет ся на протяжении последующих генераций. Это позволяет сделать вывод, что они совместимы и исследуемая плазмида не относится к группе 1 пс Z Такой вывод, в свою очередь, позволил исключить сразу несколько районов из числа возможных источников инфекции и вовремя скорректировать дальнейшую расшифровку вспышки.
