Способ определения идентичности культур водорослей, используемых для характеристики загрязнений водной среды

 

Изобретение относится к способам оценки биологического тестового материала , в частности культур микроводорослей , и может быть применено в водной токсикологии, микробиологической промьшленности для получения возможности сравнения идентичности двух -и более культур микроводорослей. Це лью является повышение надежно.сти определения идентичности тестовых культур микроводорослей. Указанная цель достигается соблюдением следующих приемов в работе: проводят инкубацию культуры микроводорослей в сосудах с плоским дном, при этом инокулят берут в такой концентрации, чтобы клетки покрывали дно сосуда монослоем, сосуды располагают линейно в ряд вплотную друг к другу с большими стенками, инкубацию культуры проводят при сохранении монослоя клеток, после чего определяют содержание в инокуляте числа способных к делению клеток (а), что является критерием для для определения идентичности культур ЛК ,, где п - , среднее число удвоений за время культивирования , Л К - минимальная разность модальных значений характеристичес- V V UN4 + 4N3-2ANi кои величины К, К где AN,; AN -, прирост численности клеток за время культивирования в любой тройке смежных значений .по всему ряду измерений, jsN - прирост в среднем сосуде каждой такой триады. 1 з.п. ф-лы. 4 ил. микроводорослей, а с в (Л с

СОЮЗ СО8ЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (1И

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4021179/31-13 (22) 27. 12, 85 (46) 15.07.88. Бюл. Р 26 (7 1) МГУ им. М.В. Ломоносова (72) К.С. Бурдин и А,Д. Сизов (53) 543.3 (088.8) (56) Перт С.Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М.:

Мир, с. 32-34.

The inter1aboratory precision

test. An eight laboratory evaluation

of the precisional algal assay procedure bottle test. — Eds. С.М.Weiss, R.W.Helms. — Nat. Eutroph. Res.

Progr. Environmental Protection

Agency, 1971, р. 45-70. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИДЕНТИЧНОСТИ

КУЛЬТУР ВОДОРОСЛЕЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ

ХАРАКТЕРИСТИКИ ЗАГРЯЗНЕНИЙ ВОДНОЙ

СРЕДЫ (57) Изобретение относится к способам оценки биологического тестового материала, в частности культур микроводорослей, и может быть применено в водной токсикологии, микробиологической промышленности для получения возможности сравнения идентичности двух .и более культур микроводорослей. Целью является повышение надежности (gO 4 С 12 Q 1/02, 1/06 определения идентичности тестовых культур микроводорослей. Указанная цель достигается соблюдением следующих приемов в работе: проводят инкубацию культуры микроводорослей в сосудах с плоским дном, при зтом инокулят берут в такой концентрации, чтобы клетки покрывали дно сосуда монослоем, сосуды располагают линейно в ряд вплотную друг к другу с большими стенками, инкубацию культуры проводят при сохранении монослоя клеток, после чего определяют содержание в инокуляте числа способных к делению клеток (а), что является критерием для для определения идентичности культур

ЬК микроводорослей a = 11 Гд среднее число удвоений за время культивирования, 6 К вЂ” минимальная разность. модальных значений характеристичес-i ьИ,+aNç-2aN кои величины К, K ф где b N bN hN —, пРиРост численности клеток за время культивирования в любой тройке смежных значений по всему ряду измерений, в Н вЂ” прирост в среднем сосуде каждой такой триады. 1 з.п. ф-лы. 4 ил.

140 96б0

Изобретение относится к способам

Оценки биологического тестового ма-териала, в частности культур микровоорослей, и может быть применено в одной токсикологии, микробиологической промышленности, для получения о зможно с ти срав нения иден тично с ти двух и более культур микроводорослей.

Цель изобретения — повышение наежности определения идентичности ультур микроводорослей.

Способ определения идентичности ультур водорослей, используемых для арактеристики загрязнений водной реды, осуществляется следующим обазом.

Проводят инкубацию культуры микроодорослей путем помещения их в сосуы с плоским дном, содержащие питательную среду, инокулят берут в такой концентрации, чтобы клетки покрывали дно сосуда монослоем. Сосуды распола,гают в плоскости общей для всех ис1 следуемых образцов, линейно, в ряд, вплотную друг к другу с общей границей максимальной длины между смежны ми колбами в плоскости дна, после чего объект инкубируют в условиях, зависящих от вида объекта, но без пере мешивания суспензии, определяют при,рост числа клеток, число способных к делению клеток и по последнему судят об идентичности тестового материала. .Число клеток способных к делению, оп1 ределяют по формуле: 35 ! ьК а=--2" где а — число способных к делению клеток п - среднее число генераций за время культивирования; ь К вЂ” минимальная разность модальных значений характери< тичес- 45 ! ьИ +ь%-2ьN кой величины К = гдеь 11< ь 1,; ьлз численности клеток за время культивирования в любой трой5Q ке смежных значений по всему ряду измерений; bN — прирост в средней колбе каждой такой триады.

Суть способа сводится к определе55 нию числа приступивших к делению «ле< ток в заданный интервал времени пос.ле пере< ева. Необходимым условием для такого определения является. различие в числе удвоений клеток в смежных колколбах, близкое к целому числу, что достигается лишь в предлагаемых по данному способу условиях культивирования.

Пример 1. Определяют иден" тичность тестового материала — культуры клеток одноклеточной зеленой водоросли Platymonas viridis инкубируемой и пересеваемой в течение

3-l недель с помощью автоматического счетчика клеток. Инокулят водорослей

7-дневного возраста в концентрации

5000 кл/мл из колбы объемом 2,5 л при непрерывном перемешивании содержимого колбы разливают в 100 культивиционных сосудов (с площадью дна каждого б,25 см ) порциями по 20 мл.

Для защиты от пыли во время культивирования сосуды сверху закрывают светопрозрачными крышками. Используют светопрозрачные пластмассовые сосуды прямоугольного сечения с плоским дном и плоскими боковыми стенками, которые располагают в ряд, вплотную друг к другу по плоской поверхности люминостата с общей границей максимальной длины в плоскости дна для каждой пары соседних сосудов (фиг. 1). Затем проводят культивирование беэ перемешивания суспенэии клеток в течение 24 ч при непрерывном освещении 3000 люкс.

Осветители располагают над сосудами сверху. По окончании культивирования измеряют концентрацию клеток в каждом из сосудов и для каждого иэ них рассчитывают относительный прирост Л Х =

N-N« — — ° 100% где N — исходная кони о о центрация клеток в инокуляте, N— концентрация клеток через 24 ч от начала культивирования. Затем, по всему ряду измерений прироста последовательно выделяют тройки значений таким образом, чтобы прирост в каждой средней колбе такой триады имел экстремальное значение, или был бы равен приросту в одной из соседних, но отличался от прироста в другой. Для каждой триады рассчитывают абсолютное значение характеристической величины

4И<+sN -2ь|<1 )

К ю Л. где дЫ - ьМ

2 1

6 Б прирост В дВух краиних и средней колбе каждой триады соответственt но (см. фиг. 2) . После этого строят гистрограмму полимодального распреде1409660 ления характеристической величины К, откуда определяю наименьшую разность между модальными значениями К, равную в данном примере 67 (фиг. 3) и приn-<

5 равнивают ее произведению 2 а.

Среднее число генераций (удвоений) эа время культивирования п для данной культуры за 24 ч берут из литературных данных или определяют эксперимен- 10 тально. В условиях данного примера

n = 3. Следовательно, число способных к делению за 24 ч клеток в инокуляте ьК 6 составляет а = — — = — — = 1 5 . Итак

2h-I 23-I t ° l5 исследованный тестовый материал идентичен такому, у которого число спо-собных к делению клеток = 1,57.

Пример 2 ° Проводят культивирование так, как в примере 1, за Zp исключением того, что расстояние между центрами соседних колб в плоскости дна увеличено по 5 см. В результате гистограмма распределения значений характеристической величины К имеет одномодальный характер (в отличие от полимодального в примере 1).

Определить разность модальных значений К, число способных к делению клеток и идентичность тестового материала невозможно (фиг, 4).

Пример 3. Проводят культивирование, как в примере 1, за исключе.нием того, что с целью разрушения монослоя клеток в плоскости дна всех

35 колб культивирование выполняют с перемешиванием клеточной суспензии с помощью качалки при 90 качаниях в минуту. В результате гистограмма распределения значений К одномодальна (фиг. 4), поэтому определить разность модальных значений К, а значит число способных к делению клеток и характеризовать идентичность инокулята нельзя.

Таким образом, приведенные результаты свидетельствуют о том, что существует возможность определения из множества живых клеток числа клеток способных к делению в заданный интер50 вал времени непосредственно в процессе культивирования (первичный технический эффект), что позволяет определять с помощью этого критерия, идентичность тестового материала.

Формула изобретения

1. Способ определения идентичности культур водорослей, используемых. для характеристики загрязнения водной среды, путем инкубации и пересева культур в течение 3-7 недель и последующего отбора инокулята иэ культуры семидневного возраста, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения-: надежности определения идентичности культур микроводорослей, инокулят вносят в прямоугольные сосуды с плоским дном в концентрации, обеспечивающей расположение клеток на дне сосуда моно слоем, сосуды устанавливают линейно в ряд так, что их большие стенки соприкасаются, после чего определяют прирост клеток, среднее число генераций за время культивирования и рассчитывают число способных к делению клеток, а в качестве критерия идентичности культур используют найденное значение числа способных к делению клеток, при этом идентичными считают культуры с одинаковыми значениями числа способных к делению кле

1ток е

2. Способ по и. 1, о т л и ч аю шийся тем, что число способных к делению клеток находят по формуле где а — число способных к делению клеток; и — среднее число генераций за время культивирования;

Ь К вЂ” минимальная разность модальных значений характеристической величины К, где К = ! Ь М,+ЬБ «26 (1 а ьВ ЬМ

2 э Ф у1

bN — прирост численности

3 клеток за время культивирования в любой тройке смежных значений по всему ряду измерений.

1409660 ) И ) К м ) к ) м ), ч В ч ъ „Ь, „ч ч . ч ч ч ч 1 чч

1 1

Ъ 1.„ч 111

Ъс 1.

11

1 иРР 4(о а 7 Г"4 д Г й" Ф Г"СМ п

У" а< Р а Р а 1Ц 2". д / g".

РмжгнЫ„h

Составитель О. Корженко

Техред Л.Олийнык Корректор Л. Пилипенко

Редактор М. Товтин

Заказ 3446/26 Тираж 520 Подписно е

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.q д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4