Способ определения фенобарбитала в биологических жидкостях
Изобретение относится к биохимии . Цель изобретения - повышение чувствительности способа. В пробирку с плазмой крови вносят фенобарбитал , добавляют ацетатньй 0уфер и хлороформ . После центрифугирования отделенную органическую фазу вьтаривают. Осадок растворяют в хлороформе и наносят на пластинку. Хроматографйческое разделение фенобарбитала дят восходящим способом на пластин ках с закрепленным слоем силикагёля, Разделение проводят при двойном хроматографировании в системе хлороформ - диэтиловый эфир. После высушивания проявляют хроматограмьа 1 насыщенным раствором нитрата закисной ртути. Денситометрически проводят количественную оценку хроматограмм. S (Л С С5 .
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН д 11 4 О 01 Б 33/48
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21 ) 3744097/28-14 (22) 28.05.84 (46) 15.06..88. Бюл. У 22 (71) Институт клинической и экспериментальной неврологии (72) Ф.Г.Ветрогон, В.M,Îêóäæàsà, З.И.Антадзе и Л.И.Сиоридзе (53) 612.015 (088.8) (56) I.Christiansen. Determination
of Hydroxymetabolites of Phenobarbitone and Phenytoin. — Хп: Clinical
Pharmacology of Antiepileptic Drugs °
N.I.Berlin, 1975, р.131-134. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕНОБАРБИТАЛА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ (57) Изобретение относится к биохимии. Пель изобретения — повыщенне
„„SU„„1402943 А 1 чувствительности способа. В пробир" ку с плазмой крови вносят фенобарбитал, добавляют ацетатный руфер и хлороформ. После центрифугирования отделенную органическую фазу выпаривают.
Осадок растворяют в хлороформе и наносят на пластинку. Хроматографическое разделение фенобарбитала проводят восходящим способом на пластин ках с закрепленным слоем силикагйля.
Разделение проводят при двойном хроматографировании в системе хлороформ — диэтиловый эфир. После высушивания проявляют хроматограммы насыщенным раствором нитрата закнсной ртути. Денситометрически проводят количественную оценку хроматограмм.
140? 943 ес е (a-Ь)
bd bd
ВН16111И За=,àç "851/34
Тираж 847 Подписное
Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Изобретение относится к медицине и может быть-использовано для выявленйя фенобарбитала н биологических жидкостях.
Белью изобретения является повьш(ение чувствительности способа.
Пример. Берут две центрифужные пробирки. В первую пробирку помещают 0,2 мл плазмы крови или спинно- 10 мозговой жидкости, во вторую — 0,2 мл раствора с заданным количеством фенббарбитала. Такое же количество фенббарбитала вносят в пробирку с плазмс1й крови. В дальнейшем обработку со- !5 д ржимого обеих пробирок проводят .одинаково. Добавляют 0,1 мп ацетатнога буфера (рН 4,5) и 2,5 мл хлороформа1. Пробирки взбалтывают в течение
1 мин, затем центрифугируют 5 мин ° 20
Отделенную органическую фазу помещают на фарфоровую чашку и выпариваO. ют на водяной бане при 55 С. Оставшййся осадок растворяют в 0,2 мл хлороформа и наносят на пластинку в ко- 25 лихачестве 0,02 мл. Хроматографическое ра эделение фенобарбитала осуществляеМся восходящим способом на пластинка х с закрепленным слоем силикагеля.
Разделение проводят при двойном хроматографировании в системе хлороформ дйэтиловый эфир (3:1) при длине
100 мм. Повторное хроматографирование проводят через 20 мин после первого р зделения, предварительно высушив
35 п астинку при комнатной температуре.
Полученные хроматограммы после высушивания проявляют насыценным раствс1ром нитрата закисной ртути, который о разует с фенобарбиталом окрашенное 40 соединение, проявляющееся на пластинках в виде пятен с различной интенсивностью окраски (от светлых до темно-серых) на белом фоне. Количественную оценку хроматограмм проводят ден- А5 сйтометрически.
Измеряют площади пиков заданного количества фенобарбитала (Ь) и крови или спинномоэговой жидкости с заданнь1м количеством фенобарбитала (а).
Разница между этими пиками дает площадь пика биолитиче-кой жидкости
Ф т.е, с = а — b (мм . Зная количество фенобарбитала в заданной пробе крови, находят содержание фенобарбитала в опытной пробе крови путем составления пропорции
Ь-е=с:m, где е — количество фенобарбитала в заданной пробе, мкг;
m " "количество фенобарбитала в опытной пробе биологической жидкости, мкг.
Отсюда е.с ш — « °
Ь
Если обозначить количество биологической жидкости, взятой для обработки, через d, то количество фенобарбитала на 1 мл равно
Если заданное количество фенобарбитала (е) равно 50 мкг, площадь пика спинномозговой жидкости + 50 мкг фенобарбитала, введенного в пробу (a) 3735 мм, площадь пика пробы, со2 держащий 50 мкг фенобарбитала (Ь)
3680 мм, количество взятой для ана" лиза спинномоэговой жидкости (d)
0,2 мл, содержание фенобарбитала в спинномозговой жидкости составляет
Х = 3,73 мкг/мл.
Чувствительность метода по известному способу составляет 40-45 мкг, а по предлагаемому — 1,2 мкг.
Формула изобретения
Способ определения фенобарбитала в биологических жидкостях путем экстрагирования пробы органическим растворителем, центрифугирования,вы-, паривания органической фазы, раство- . рения остатка в. органическом растворителе, тонкослойной хроматографии и денситометрирования, о, т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, разделение проводят с помощью тонкослойной хроматографии с применением внутреннего стандарта и с использова" нием системы растворителей хлоро- форм — диэтиловый эфир.