Способ идентификации нуцеллярных и гибридных растений цитрусовых
Изобретение относится к сельскому хозяйству , а именно к селекции цитрусовых. Цель изобретения - ускорение процесса идентификации и повышение точности. Берут образцы листьев 2-3-месячных проростков, экстрагируют из них белки, проводят электрофорез и получают электрофореграммы листьев. Анализу подвер|-ают электрофореграммы изоферментов аспартатаминотрансферазы при анализе сеянцев, полученных в результате скрещивания грейпфрут х трифолиата и гексокиназы для сеянцев мандарин X апельсин. Нуцеллярные сеянцы имеют только аллель материнского растения, гибридные сеянцы-аллели обоих родителей, при этом электрофореграммы гексокиназы и аспартатаминотрансферазы не различаются у плодоносящих побегов и 2-3-месячных сеянцев.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
„„SU„„1376989 А1 д11 4 А 01 Н 1/04, А 01 Q 7 00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3929761/30-15 (22) 18.07.85 (46) 29.02.88. Бюл. № 8 (71) Институт обшей генетики АН СССР и Всесоюзное научно-производственное объединение по чаю и субтропическим культурам (72) Б. И. Капанадзе и В. А. Шевченко (53) 631.521 (088.8) (56) Amer 1. Bot. 1978, 65, (8), р. 869 — 881. (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ НУЦЕЛЛЯРНЫХ И ГИБРИДНЪ|Х РАСТЕНИЙ ЦИТРУСОВЫХ (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к селекции цитрусовых.
Цель изобретения — ускорение процесса идентификации и повышение точности. Берут образцы листьев 2-3-месячных проростков, экстрагируют из них белки, проводят электрофорез и получают электрофореграммы листьев. Анализу подвер ают электрофореграммы изоферментов аспартатаминотрансферазы при анализе сеянцев, полученных в результате скрещивания грейпфрут х трифолиата и гексокиназы для сеянцев мандарин х апельсин. Нуцеллярные сеянцы имеют только аллель материнского растения, гибридные сеянцы-аллели обоих родителей, при этом электрофореграммы гексокиназы и аспартатаминотрансферазы не различаются у плодоносящих побегов и 2-3-месячных сеянцев.
1376989
Формула изобретения
Составитель Е. Шкрадюк
Редактор Н. Киштулинец Техред И. Верес Корректор В. Бутяга
Заказ 506/2 Тираж 661 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
П3035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4
Изобретение относится к селекции цитрусовых и может быть использовано в сельском хозяйстве.
В цитрусоводстве широко используются межвидовые гибриды, например мандарин х хапельсин,,грейпфрут х трифолиата, грейпфрут х лимон и др., применение которых в промышленных посадках позволяет избежать инбредного вырождения. Кроме того, такие гибриды, как правило, сочетают соединенные свойства принимающих учстие в гибридизации исходных форм. Идентификация на ранних стадиях развития гибридных форм среди сеянцев, полученных от скрещивания, и выбраковка нуцеллярных сеянцев, имеющих место в большом количестве при таких скрещиваниях, является важной практической задачей.
Цель изобретения — ускорение процесса индентификации и повышение ее точности.
Пример. У исследуемых образцов берется лист весом около 50 мг. Образец помещают в ступку, добавляют песок, заливают жидким азотом, добавляют 0,2 — 0,25 мл
0,05 М трис-НС! (рН 8,3) буфера, растирают пестиком, центрифугируют в течение 20 мин при 15000 об/мин в рефрижераторной центрифуге, сливают надосадочную жидкость, содержащую белки данной ткани, и проводят электрофорез в блоке 7,5о-ного полиакриламидного геля (рН 8,3) в трис-боратной системе при напряжении 300 В в течение
1 ч 30 мин. После окончания электрофореза гель извлекают из электрофоретической камеры и помещают в кювету для окраски. В случае излучения образцов гибридов мандарин х апельсин гели заливают красящей смесью, содержащей 90 мг декстрозы, 20 мг NgC1, 25 мг АТФ, 25 мг НАДФ, 20 мг НСТ, 3 мг ФМС, 80 ед (0,035 мл) глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы, 10 мл 0,5
M трис-HCl буфера (рН 8,0), 90 мл воды, выявляющей полосы активности фермента гексокиназы, а в случае анализа гибридов грейпфрут х трифолиата — красящей смесью, содержащей 160 мг аспартата, 40 мг а-кетоглутаровой кислоты, 60 мг прочной синей РР соли, 50 мл O,j М трис-НС! буфе2 ра (рН 8,8), выявляющей полосы активности фермента аспартатаминотрансферазы.
Изученные сорта в пределах вида не отличались друг от друга по электрофореграммам проанализировано 8 сортов мандарина, 6 сортов апельсина, 4 сорта грейпфрута и 1 трифолиата. Имеются аллельные отличия в спектрах изоферментов между различными видами, что и позволяет однозначно идентифицировать гибриды между видами.
Нуцеллярные сеянцы имеют только аллель материнского растения, гибридные сеянцы — аллели обоих родителей, при этом электрофореграммы гексокиназы и аспартатаминотрансферазы не различаются у плодоносящих деревьев и 2-3-месячных сеянцев.
Для установления достоверности идентификации гибридных и нуцеллярных сеянцев с помощью изоферментов были взяты в анализ 148 плодоносящих деревьев, среди
2р которых 70 по морфологическим и вкусовым показателям были идентифицированы как гибридные, а 58 — как нуцеллярные.
Результаты, полученные с использованием метода электрофореза, полностью совпали с результатами идентификации деревьев по морфологическим и вкусовым показателям.
Способ идентификации нуцеллярных и гибридных растений цитрусовых, включающий взятие образцов листьев, экстракцию из них белков, их электрофорез, получение электрофореграмм и их анализ на присутствие характерных полос-маркеров отцовского компонента для гибридных растений и по присутствию электрофоретических вариантов материнских растений для нуцеллярных растений, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса идентификации и повышения ее точности, получают электрофореграммы листьев 2-3-месячных проростков, а
40 анализу подвергают электрофореграммы изоферментов аспартатаминотрансферазы при анализе сеянцев, полученных в результате скрещивания грейпфрут х трифолиата и гексокиназы для сеянцев мандарин х апельсин.
