Способ получения иммобилизованной уреазы
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении иммобилизованной уреазы. Цель изобретения - увеличение стабильности иммобилизованной уреазы при хранении. Способ заключается в том, что к иммобилизованной на окисленном угле СКНд уреазы из Staphylo- COCCUS saprophyticus добавляют 4-5- кратный по отношению к белку фермента избыток капсикозида или мелонгозида. Гликозиды, адсорбированные на угле, стабилизируют фермент, который не теряет активности при хранении в течение 5 мес. 1 табл. с (Л
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
М АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4095356/28-13 (22) 22.07.86 (46) 15.02.88, Бюл. Ф 6 (7 1) физико-химический институт им. А.В. Богатского и Институт экологической генетики АН МССР (72) Т.И.Давиденко, Е.В. Севастьянова, П.К. Кинтя и С.А. Швец (53) 577 15(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
У 1090715, кл. С 12 N 11/14, 1982.
Давиденко Т.И. и др. Адсорбция уреаэы на углях. Доклады АН УССР.Сер.
Б. 1985, с. 65. ию <в 7 730 (51)4 С 12 N 11/14 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННОЙ УРЕАЗЫ (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении иммобилизованной уреазы.
Цель изобретения — увеличение стабильности иммобилизованной уреазы при хранении. Способ заключается в том, что к иммобилиэованной на окисленном угле СКН0 уреазы из Staphylococcus saprophyticus добавляют 4-5кратный по отношению к белку фермента избыток капсикоэида или мелонгозида. Гликозиды, адсорбированные на угле, стабилизируют фермент, который не теряет активности при хранении в течение 5 мес. 1 табл.
1373730
Изобретение относится к биотехнологии, касается иммобилизации уреазы и может быть использовано при определенин мочевины.
Цель изобретения — увеличение стабильности иммобилизованной уреазы при хранении.
Способ заключается в том, что к иммобилизованной на углях СКН, уреа- 10 эе из Staphylococcus saprophyticus добавляют стероидные гликоэиды— капсикозид или мелангозид в 4-5-кратном по отношению к белку фермента весовом избытке. На нативную уреазу гликоэиды не оказывают стабилизирующего действия, тогда как у иммобилиэованной уреазы в их присутствии увеличивается стабильность при хранении.
Вероятно, адсорбированные на углях гликоэиды изменяют микроокружение уреазы, что приводит к стабилизации фермента. При хранении полученного по предлагаемому способу препарата уреазы в течение 87-153 дней не про- 25 исходит потери активности, тогда как в отсутствие гликозидов активность ферментов полностью исчезает, Способ иллюстрируется следующими примерами. 30
Пример 1. Способ иммобилизации уреазы на углях СКН, осуществляется следующим образом. Смесь уреазы в буфере (0,06 М Na-фосфатном рН 0 С перемешивают на шут35 теле с углем СКН,. Затем многократной промывкой полученного препарата удаляют неадсорбировавшуюся уреазу.
К 100 мл иммобилиэонанной на углях
СКНо уреазе H Staphylococcus sapto 40
phyticus (активность 60 ед/г) добавляют 5 мг. капсикозида (соотношение белок уреазы:капсикозид 1:5, см.таблицу Р 1) в 2 мл 0,06 М Иа-фосфатного буфера, рН 6,8 и 300 мг азида натрия.
Плотно закрытые колбы помещают в холодильник (3-4 С). Через 87 и 153 сут в отобранных пробах определяют уреазную активность и сопоставляют ее с исходной активностью. Уреаэную активность определяют при 37 С, инкубируя в течение 30 мин при встряхивании
20 мг иммобилизованной уреаэы с 0,5 мл
37-ного раствора мочевины в 0,5 мл
0,06 М фосфатного буфера, рН 6,8.
3а единицу активности принимают такое количество белка фермента, которое катализирует образование 1 мкмоль аммиака sa 1 мин при 37 С. Через
87 сут хранепия сохраняется 1147. исходной активности, а через 153 сут—
1507., т.е. наблюдается повышение активности исходной уреазы.
Пример 2. Порядок выполнения операций аналогичен примеру 1.
Только в качестве гликозида используется мелонгозид (таблица В 1). Через 87 и 153 сут хранения сохранялось
1003 исходной активности.
Пример ы 3 и 4. Порядок выполнения операций аналогичен примеру
1. Только соотношение белок уреазы: гликозид 1:4 (таблица У 2).
Пример ы 5-8 ° Порядок выполнения операций аналогичен примеру 1 °
Только соотношение белок уреазы:гликозид 1:3, 1:6 (таблица N - 3 и 11 4).
Примеры иллюстрируют нецелесообразность осуществления способа при данном соотношении.
Пример ы 9-12. Порядок вы-! полнения операций аналогичен примеру 1. Только активность иммобилизованной на углях СКНО уреаэы 40 ед/г носителя, соотношение белок уреазы: гликозид 1:5, 1:4 (таблица У 5 и
Н - 6) .
Пример ы 13-16. Порядок выполнения операций аналогичен примеру 1. Только активность иммобилиэованной на углях СКН уреазы 40 ед/г носителя, соотношение белок уреазы: гликозид 1:3, 1:6 (таблица 11 7 и 8).
Примеры иллюстрируют нецелесообразность осуществления способа при данном соотношении.
Пример ы 17 20. Порядок выполнения операций аналогичен примеру 1. Только активность иммобилизованной на углях СКНО уреаэы 30 и
70 ед/г носителя (таблица N - 9 и 10).
Примеры иллюстрируют нецелесообразность осуществления способа при данной активности иммобилизованного пре парата.
Результаты сведены в таблицу.
Таким образом, предлагаемый способ получения иммобилизованной на углях
СКН, уреаэы позволяет получить препарат, сохраняющий при хранении в течение 153 сут 100Х. исходной активности при использовании мелонгозида и увеличить активность до 1507 при использовании капсикозида, тогда как в известном способе за такой срок хранения активность уреаэы снижается до нулевых значений. Увеличение сроков
1373730
Активность уреаэы при хранении, Ж от исходного
Хранение, сут
Соотношение белок уреаэы: гликоНомер по порядку
Контроль Капсикозид Мелонгоэид эид
100
114
100
1 5
100
150
1:4
153
100
110
100
90
140
153
100
100
100
1:3
19
153
36
100
1:6
21
153
100
110
100
1:5
100
136
153
100
110
100
1:4
85
140
153
100
100
100
1:3
24
153
46
100
1:6
24
153
100
100
100
1:5
62
50
153
56
87
1:5
10
31
153
Составитель В. Муромец
Редактор M.Íåäoëóæåíêo Техред Л.Олийнык Корректор Л. Пилипенко
Заказ 536/20 Тирах 520 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 хранения позволяет эффективно испольэовать препарат уреазы в биотехнологии.
Формула изобретения
Способ получения иммобилиэованной уреазы, заключающийся в связывании уреазы, выделенной из Staphylo1
Активность иммобилизованной на углях СКН уреазы
coccus saprophyticus,ñ окисленным углем СКН,, отличающийся тем, что, с целью увеличения стабильности целевого продукта при хранении, после связывания уреазы с углем к полученному препарату добавляют капсикозид или мелонгозид в 4-5-кратном избытке по отношению к количеству белка уреаэы по массе.
