Способ приготовления гистологических препаратов для люминисцентного выявления @ -хроматина в интерфазных ядрах

 

Срезы ткани депарафинируют, доводят до воды через этанол нисходящей концентрации, инкубируют в 0,3%-ном растворе трипсина при 34 С 30-45 мин, промывают в воде, погружают в 2%-ный раствор уксусной кислоты, а затем в красящую смесь состава: 0,005%-ный раствор квинакрина гидрохлорида на 2%-ной уксусной кислоте - 96 этанол - глицерин (4,5-5) : :(1-1,5) : (3,5-4,5) на 2-4 мин, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, просветляют и заключают в полистирол. Свойства препарата не изменяются в течение 8 мес хранения в темноте при 20-22 С. Дифференциальная светимость Y-хроматина не ухудшается. U (Л со СГ5 СЛ 6о ю

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЩИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) SU On (50 4 G 01 N 1/30

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ (72) С.В.Жеро, В.И.Савич и С.С.Киреева (53) 615..475(088.8)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

Н А BT0PCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3667824/28-14 (22) 29.11.83 (46) 30. 11.87. Бюл. № 44 (71) Днепропетровский медицинский ийститут и Институт проблем онкологии и .Р.Е.Кавецкого (56) Stain Technology, 1973, v. 42, 2, р. 252-254. (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ Л!ОМИНЕСЦЕНТНОГО ВЫЯВЛЕНИЯ Y-ХРОМАТИНА В ИНТЕРФАЗНЫХ ЯДРАХ (57) Срезы ткани депарафинируют, доводят до воды через этанол нисходящей концентрации, инкубируют в

О

0,3%-ном растворе трипсина при 34 С

30-45 мин, промывают в воде, погружают в 2%-ный раствор уксусной кислоты, а затем в красящую смесь состава:

0,005%-ный раствор квинакрина гидрохлорида на 2%-ной уксусной кислоте

96 этанол — глицерин (4,5-5)

:(1-1,5) : (3,5-4,5) на 2-4 мин, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, просветляют и заключают в полистирол. Свойства препарата не изменяются в течение 8 мес хранения в темноте при 20-22 С. Дифферен(О циальная светимость Y õðîìàòèíà не ухудшается.

1355896

Формула из обретения

Чиркова

Ъ чук Корректор О, Кравцова

Заказ 5787/38 Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, >К-35, Раушская наб., д. 4/5

Ф

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к медицине, в частности к цитологии, Цель изобретения — удлинение сроков хранения препарата путем окраши5 вания его в красящей смеси, дополнительно содержащей глицерин и спирт.

Пример 1. Образец ткани индивидуума мужского пола фиксируют в жидкости Карнуа, после проводки 10 через целлоидин-парафин и заливки в парафиновые блоки изготавливают гистологические срезы толщиной

5-7 мкм и монтируют их на. предметные стеМла. Срезы депарафинируют по из- 15 вестной методике в двух сменах ксилола по 5 мин в каждой, доводят до воды через растворы этанола нисходящей концентрации (96, 80, 70, ь

40 ), инкубируют в 0,3%-ном растворе 20 трипсина в термостате при 34 С 3045 мин, промывают в дистиллированной воде, на 30 с погружают в 2%-ный раствор уксусной кислоты и окрашивают в течение 2 мин в красящей смеси 25 следующего состава: 0 0005%-ный раствор квинакрина дигидрохлорида на о

2%-ной уксусной кислоте — 96 этанол — глицерин в-соотношении 5:1:4, затем срезы обезвоживают в растворах З0 этанола восходящей концентрации о о (70 — 2 мин, 96 — 2 мин, абсолютный этанол — 2 мин), просветляют в двух порциях ксилола по 3 мин и заключают в полистирол. После полимеризации заключающей среды препараты готовы для исследования под микроскопом в режиме люминесценции при длине волны возбуждающего света 300-400 нм.

Пример 2. Образец ткани фик- 40 сируют в жидкости Карнуа, после проводки через целлоидин-парафин и заливки в парафиновые блоки изготавливают гистологические срезы толщиной

5-7 мкм и монтируют их на предметные 45 стекла. Срезы депарафинируют по известной методике в двух сменах ксилола по 5 мин в каждой, доводят до воды через растворы этанола нисходящей концентрации (96, 80, 70, 40 ), инкуСоставитель Э

Редактор А. Огар Техред А.Крав бируют в 0,3%-ном растворе трипсина о в термостате при 34 С 30-45 мин, промывают в дистиллированной воде, на

30 с погружают в 2%-ный раствор уксусной кислоты и окрашивают в течение

4 мин в смеси состава: 0 0005% †н раствор квинакрина дигидрохлорида на

cf

2%-ной уксусной кислоте — 96 этанол— глицерин в соотношении 4,5:1,5:4.

Затем срезы обезвоживают в растворах этанола восходящей концентрации, просветляют в ксилоле и заключают в полистирол.

Результаты, полученные в примерах

1 и 2, аналогичны. Y-хроматин выявляется в виде крупного блока квинакринположительного материала, имеющего изумрудно-зеленую флюоресценцию на желто-зеленом или коричнево-зеленом фоне ядра. При использовании предлагаемого способа свойства препарата не изменились в течение 8 мес хранео ния в темноте при 20-22 С, дифференциальная светимость Y-хроматина не ухудшилась, Препараты, изготовленные по из- . вестному способу, после хранения в течение 4-5 сут становятся непригодными для исследования.

Способ приготовления гистологических препаратов для люминесцентного выявления Y-хроматина в интерфазных ядрах путем изготовления целлоидинпарафиновых срезов и их окраски в

0,0005%-ном растворе квинакрина дигидрохлорида на 2%-ной уксусной кислоте, отличающийся. тем, что, с целью удлинения сроков храпения препарата, к раствору красителя добавляют этанол и глицерин в соотношении краситель — этанол — глицерин (4,5-5) : (1-1,5) : (3,5-4,5), производят окрашивание в течение 2-4 мин, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, просветляют в ксилоле и заключают в полистирол.