Способ концентрирования бактериальных суспензий

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу концентрирования бактериальных суспензий. Цель изобретения - повышение степени концентрирования . В культуральную жидкость, полученную после культивирования бактерий , добавляют поликатионит до концентрации 0,01-0,05%, перемешивают в течение 1-3 мин и вводят коллоидный раствор магнетита до концентрации 0,1-0,5%. Суспензию помещают в неоднородное поле с напряженностью 0,5-1,0 Т/м и отдел яют сгущенную суспензию декантацией. В качестве поликатионита используют хитозан, поли-п-винилбензилтриметиламмоний хлорид) или полиэтиленимин. По сравнению с известным способом позволяет вдвое увеличить степень концентрирования. 1 з.п. ф-лы. - 2 табл. (/) С со со со

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

„„Я 1.) „„1333707 (SIC 4 С 12 и 1/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

К А BTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3907882/28-13 (22) 07.06.85 (46) 30.08.87. Бюл. № 32 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов (72) 1О.В.Медведев, В.Г.Попов, А.Н.Русских, M.М.Скворцова, В.В.Слепой-Савчук и А.Я.Тесленко (53) 577.15 (088.8) (56) Патент CIIIA 3989596, кл. 195-56, опублик. 1976.

Weeks M.G., Hunro P.À., Spedding P. L. Biotechnology and Bioengenering 1983, V.25, № 3, р.687-711.

Авторское свидетельство СССР

¹ 999601, кл. С 12 N 1/02, 1981. (54) СПОСОБ КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ СУСПЕНЗИЙ (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу концентрирования бактериальных суспензий. Цель изобретения — повьппение степени концентрирования. В культуральную жидкость, полученную после культивирования бактерий, добавляют поликатионит до концентрации 0,01-0,05%, перемешивают в течение 1-3 мин и вводят коллоидный раствор магнетита до концентрации

0,1-0,5%. Суспензию помещают в неоднородное поле с напряженностью

0,5-1,0 Т/м и отделяют сгущенную суспензию декантацией. В качестве поликатионита используют хитозан, с поли-и-винилбензилтриметиламмоний хлорид) или полиэтиленимин. По сравнению с известным способом пОзволяет вдвое увеличить степень концентрирования. 1 з.п. ф-лы.

2 табл.

1 1333707 2 (табл.1) °

Таблица 1!

Концентрация реагентов, Эффективность концентрирования мас, Х. от последовательности введения компонент,% т

Йагнетит Хитоз ан-маг- Иагнетит — хитозан

Хитозан нетит

0,01

0,10

0,06

0,01

78

0,025

0,01

Изобретение относится к микробио-Логической промышленности, а именно к способу концентрирования бактериальных суспензий.

Цель изобретения — повышение степени концентрирования.

Способ осуществляют следующим образом.

В культуральную жидкость, полу- lg ченную в результате культивирования бактерий на питательной среде, добавляют флакулянт до его концентрации в культуральной жидкости от

0,01 до 0,05%. В качестве флокулянта 15 используют водорастворимые поликатиониты: хитозан„ полиэтиленимин, поли(п-винилбенэилтриметиламмоний хлоРид) ° Через 1-3 мин после добавления поликатионита на стадии флокулообра- 20 зования вводят коллоидный раствор магнетита до его концентрации в культуральной жидкости от 0,1 до 0,5%.

Указанные концентрации реагентов являются оптимальными, так как при

H p и м е р 1. К культуральной жидкости бактерий Escherichiа со1i

N-17 с концентрацией клеток 40х

«10 кл/мл при интенсивном перемешивании добавляют 0,2%-ный раствор хитозана до его концентрации в культуральной жидкости 0,01Х.

Через 3 мин в смесь добавляют

2Х-ный раствор магнетита до его концентрации 0,1%. Суспензию помещают в неоднородное магнитное поле с напряженностью 0,5-Т/м и через 15 мин сконцентрированную клеточную суспенэию отделяют декантацией. Выход меньших концентрациях не наблюдается достаточный эффект концентрирования, а большие концентрации не приводят к его дальнейшему увеличению.

Последовательность введения реагентов является существенным признаком способа, так как при введении в культуральную жидкость с.начала магнетита, затем поликатионита степень концентрирования резко снижается

Сгущенную суспензию отцеляют сепарированием в неоднородном магнитном поле с напряженностью 0,5-1,0 Т/м.

Изобретение поясняется следующими примерами.

Влияние последовательности введения хитозана и магнетита на эффектиВность концентрирования бактериальных клеток Е.coli штамм M-17 во внешнем магнитном поле напряженностью 0,51,0 Т/м (время концентрирования

15 мин) показано в табл.1. клеток 90%, концентрация суспензии

36.10" кл/мл. При концентрировании е бактерий с использованием только хитозана выход клеток 85% при концентрации суспензии 15.10» кл/мл.

Пример 2. Способ осуществляют согласно примеру 1, но в качестве поликатионита используют полиэтиленимин. Выходы клеток 90% при концентрации суспензии 30.10 о кл/мл. Без добавление магнетита выхсд клеток

85% при концентрации суспензии

12.)0" кл/мл.

1ЗЗ3707

Пример 3. Способ осуществляют согласно примеру 1, но концентрация хитозана в культуральной жидкости составляет 0,05Х, а магнетита

0,57.. Выход клеток 98Х при концентрации суспензии 35.10 0 кл/мл. Без добавления магнетита выход клеток 80Х при концентрации суспензии 20

«) 040 кл/мл. 10

Пример 4. К 1000 мл культуральной жидкости Васi11us thuring1ensis var.dendro1imus, содержащей свободные бактериальные споры, токсические включения и остатки питательной среды, при перемешивании приливают 50 мл 1Х-ного раствора поли— (п-винилбензилтриметиламмоний хлорида) до концентрации его в культуТаблица 2

Способ концентрирования

Титр спор

Концентрация, мас.X

Степень

Потери жизнеспособконцентрировафлокулянта магнети в надосадочно" ния ности спор,X та, жидкости, млрд/мл

Сепарирование

2,86

0 21

3,9

0,08 5,3 флокуляция

0,1

2,86

5,4

Магнитное сепарирование

0,05 0,2 2,86

0,003 3,7

0,06

2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что, в качестве поликатионита используют хитозан или полиэтиленимин, или поли(п-винилбензилтриметиламмоний хлорид) в конценбб трации от 0,01 до 0,05)X.

ВНИИПИ Заказ 3925/23 Тираж 499 Подписное

Произв.-полигр. пр-тне, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет вдвое увеличить степень концентрирования бактериальных суспензий, сократив при этом расход полимеров.,Формула изобретения

1.Способ концентрирования бактериальных суспензий, предусматривающий введение в культуральную жидкость поликатионитов с последующим отделением концентрированной суспензии, отличающийся тем, что, с целью повьппения степени конральной жидкости, равной 0,057. Через 1 мин при помешивании вносят

200 мл коллоидного раствора магнетита, содержащего 17 магнетита до конечной концентрации магнетита в культуральной жидкости 0,2Х. Полученную суспензию помещают в неоднородное магнитное поле и через 15 мин отделяют сконцентрированную пасту от надосадочной жидкости методом декантации.

В табл.2 представлены результаты использования предлагаемого метода для концентрирования КЖ В.thuringiensis var. dendrolimus в сравнении с методом флокуляции и сепарирования, являющегося регламентным методом получения биоинсектицидов. центрирования, через 1-3 мин после введения поликатионита вводят коллоидный раствор магнетита до концентрации магнетита в культуральной жидкости от О,1 до 0,5Х, при этом отделение концентрированной суспензии ведут в неоднородном магнитном поле с напряженностью 0 5-1,0 Т/м.