Способ определения фагоцитарной активности крови рыб

 

Изобретение относится к способам контроля реакции иммунитета рыб с использованием микроорганизмов. Цель изобретения - повьппение точности определения активности фагоцитоза лейкоцитов . Для этого из хвостовой вены рыбы берут 0,25 мл крови и смешивают ее в пробирке с 0,25 мл 2%-ного раствора лимонно-кислого натрия. Затем туда же добавляют 0,25 мп двухмиллиардной взвеси Aeromonas hydrophila. Проводят инкубацию смеси при 29-31 С 25-30 мин. Фагоцитарную активность определяют по количеству микробов, фагоцитированных 25-ю лейкоцитами. 2 табл. 00 00 to ю ю Oti

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН . 111 4 G 01 N 33/48

ОГ1ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3609798/28-14 (22).20.04,83 (46) 23.08.87. Бюл. 9 31 (71) Полярный научно-исследовательский институт морского рыбного хозяйства и океанографии им. Н. М. Книповича (72) Л. С. Рыжикова и Л. В. Пономарева ,(53) 612.112,3(088,8) (56) Голодец Г. Г. Лабораторный практикум по физиологии рыб ° М,: Пище. промиздат, 1955, с. 20-22. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАГОЦИТАРНОЙ

АКТИВНОСТИ КРОВИ РЫБ

„.,80„„1332226.., „A1 (57) Изобретение относится к способам контроля реакции иммунитета рыб с использованием микроорганизмов. Цель изобретения — повышение точности определения активности фагоцитоза лейкоцитов. Для этого из хвостовой вены рыбы берут 0,25 мл крови и смешивают ее в пробирке с 0,25 мл 2Х-ного раствора лимонно-кислого натрия. Затем туда же добавляют 0,25 мл двухмиллиардной взвеси Aегоmonas hydrophila.

Проводят инкубацию смеси при 29-31 С

25-30 мин. Фагоцитарную активность определяют по количеству микробов, . фагоцитированных 25-ю лейкоцитами.

2 табл.

1332226

Изобретение относится к способам контроля реакции иммунитета рыб с использованием микроорганизмов.

Целью изобретения является повышение точности определения активности фагоцитоза".

Поставленная цель достигается тем, что, согласно способу определения активности фагоцитоза лейкоцитов )0 рыб, включающему добавление к стабилизированной крови рыб взвеси микробов, инкубацию полученной смеси с последующим подсчетом количества микробов, захваченных лейкоцитами, 15 используют взвесь Aегоmonas hydrophila инкубацию проводят при 29-31 С, а активность определяют по количеству микробов, фагоцитированных 25-ю лейкоцитами. 20

Пример„Из хвостовой гены . рыбы берут 0,25 мл крови и смешивают ее в пробирке с 0,25 мл 27.-ного раствора лимонно-кислого натрия. Затем .туда же добавляют 0,25 мл двухмилли- 25 ардной взвеси Aегоmonas hydrophila.

Пробирку со смесью помещают на 25

30 мин в водяную баню с температурой

30, После прогревания для остановки фагоцитоза добавляют 1 каплю 1Х- 30 ной осьмиевой кислоты, смесь центрифугируют, затем осторожно пипеткой отсасывают надосадочную жидкость.

Каплю верхнего слоя образовавшегося осадка, состоящего из лейкоцитов, на- 35 носят на предметное стекло, делают мазки. Мазок высушивают на воздухе, фиксируют смесью Никифорова, окрашивают по способу Романовского. Окрашенный мазок микроскопируют, подсчи- 40 тывая при этом количество микробов, фагоцитированных 25-ю лейкоцитами, находящимися в различных полях зрения.

Для упрощения и ускорения подсче — 45 та используют балльную систему оценки силы фагоцитоза, представленную в табл. 1.

В зависимости от количества баллов 5 делают вывод о состоянии рыбы: 10-15 баллов — слабоположительная реакция, характерная для ослабленной особи;

16-25 баллов — положительная реакция, свойственная здоровым особям; более

25 баллов — резко положительная реакция, свойственная здоровым особям.

Для данного примера: в 6-ти лейкоцитах нет фагоцитированных микробов, в 8-ми — 1,2 фагоцитированных микроба, в 10-ти — 4-6 фагоцитированных микробов, в 1-ом — 9 фагоцитированных микробов.

По табл. 1 выводят цифровой показатель фагоцитоза в баллах: 0 х 6 = — 0; 1 х 8 = 8; 2 х 10 = 20; 1 х 3 =

3.

Общее количество баллов 31. Вывод: резко положительная реакция.

В табл. 2 представлены данные определения фагоцитарной активности крови рыб, Формула и з обретения

Способ определения фагоцитарной активности крови рыб, включающий доТаблица 1

Оценка фагоцитоза, баллы

Количество фагоцити— рованных микробов в одном лейкоците

1-3

8-10 не более

+ — количество лейкоцитов.

Таблица 2

M+m

Способ определения фагоцитоза

Предлагаемый (t = 29 С) 18,8 + 2,51 о (t = 30 С) 19,8 + 2,31 (t = 31 С) 19,3 + 2,46

17,7 + 3,92

Известный бавление к пробе крови взвеси микробов, инкубацию полученной смеси с последующим подсчетом количества микробов, захваченных лейкоцитами, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, используют взвесь Aегоmonas hydrophila, а инкубацию проводят при 29-31 С.