Способ количественного определения м @ ( @ ) в биологической жидкости

 

Изобретение относится к области клинической биохимии и может быть использовано в медицине при количественном определении , парамагнитных металлов в биологических жидкостях, например в слюне человека . Цель изобретения - повышение точности . Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. 0,4 мл слюны помещают в пресс-форму, замораживают в жидком азоте и анализируют на ЭПР-спектрометре. Предварительно строят калибровочную кривую путем растворения различной концентрации МпС124Н2О в дистиллированной воде и с добавлением 0,2 мл этого раствора к 0,2 мл раствора человеческого альбумина. Приготовленные растворы замораживают также в пресс-форме в жидком азоте и анализируют в идентичных условиях на ЭПР- спектрометре. Условия записи: уровень мощности СВЧ-излучения 10 дБ; Э; развертка 1600 Э; скорость развертки магнитного поля 100 Э/мин; ВЧ-модуляция магнитного поля 5 Э; постоянная времени 0,3 с. В спектре ЭПР полученных образцов при температуре 77 К выявляется четкая сверхтонкая структура из 6 линий, характерная для Мп(1). Форма спектра ЭПР при фиксации Mn(II) на человеческий альбумин идентична форме спектра ЭПР слюны при 77 К. Для подсчета концентрации Mn(II) в биологическом объекте методом двойного интегрирования производят количественную оценку интенсивности сигнала Mn(II). По калибровочной кривой определяют концентрацию Mn(II) в биологической жидкости, в частности в слюне. .S а

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4 G 01 N 24/10

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Сл л

Qs сС

< 4

4й

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3981168/28-25 (22) 27.11.85 (46) 15.07.87. Бюл. № 26 (71) Иркутский государственный медицинский институт (72) P. Г. Сайфутдинов (53) 538.69.083.2 (088.8) (56) Halls D. I. Applications of graphite

furance at atomic absorption spectrometry

in clinical analysis.— Annal. Proc., 1981, v. 18, № 8, р. 344.

Cohn M. А study of Manganeus complexes

by Paramagnetic Resonance absorption.Nature, 1954, ч. 173, № 4414, р. 090. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ Мп (II) В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ (57) Изобретение относится к области клинической биохимии и может быть использовано в медицине при количественном определении парамагнитных металлов в биологических жидкостях, например в слюне человека. Цель изобретения — повышение точности. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. 0,4 мл слюны помещают в пресс-форму, замораживают в жидком.ЯО„„, 1323934 А1 азоте и анализируют на ЭПР-спектрометре.

Предварительно строят калибровочную кривую путем растворения различной концентрации МпС44Н20 в дистиллированной воде и с добавлением 0,2 мл этого раствора к

0,2 мл раствора человеческого альбумина.

Приготовленные растворы замораживают также в пресс-форме в жидком азоте и анализируют в идентичных условиях на ЭПРспектрометре. Условия записи: уровень мощности СВЧ-излучения 10 дБ; Но — — 3500 Э; развертка 1600 Э; скорость развертки магнитного поля 100 Э/мин; ВЧ-модуляция магнитного поля 5 Э; постоянная времени

0,3 с. В спектре ЭПР полученных образцов при температуре 77 К выявляется четкая сверхтонкая структура из 6 линий, характерная для Мп(11). Форма спектра ЭПР при фиксации Mn(II) на человеческий альбумин идентична форме спектра ЭПР слюны при

77 К. Для подсчета концентрации Mn(ll) в биологическом объекте методом двойного интегрирования производят количественную оценку интенсивности сигнала Mn (I I) . По калибровочной кривой определяют концентрацию Mn (II) в биологической жидкости, в частности в слюне.

1323934

Изобретение относится к клинической биохимии и может быть использовано в медицине при количественном определении парамагнитных металлов в биологических жидкостях, например в слюне человека.

Цель изобретения — повышение точности.

Приготовление водного раствора Мп (11) в растворе человеческого альбумина и замораживание смеси в жидком азоте позволяют приблизить условия исследования Мп (11) в смеси по предлагаемому способу к нативным условиям нахождения Mn(II) в биологической жидкости и к условиям исследования, что повышает точность и объективность исследования.

Способ количественного определения

Мп(11) в слюне методом ЭПР осуществляют следующим образом.

Приготавливают раствор Мп(11) в концентрации 7, р, 10 — 1,10+10 M путем растворения МпС!24Н20 в дистиллированной воде и раствор человеческого альбумина (300 мг альбумина в 10 мл дистиллированной воды). Так как количество альбумина, необходимое для полного связывания Мп(11) в растворе не известно, приготавливают различной концентрации (15 — 200 мг в !О мл дистиллированной воды) растворы альбумина и добавляют в них одно и то же количество (одинаковой концентрации 10 М) раствора Mn(11). Проводят запись спектра электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). Установили, что концентрация альбумина 75 мг на 10 мл дистиллированной воды достаточна для полного связывания

Mn(II) в этом растворе (от указанной концентрации кривая выходит на плато) . Это же подтверждается н литературными данными. Известно, что количество альбумина в крови человека колеблется в пределах

30 — 50 г/л. Таким образом, концентрация альбумина 300 мг на 10 мл дистиллированной воды вполне достаточна для полного связывания Mn(II) в этом растворе.

Для подсчета концентрации Мп (II) в биологическом объекте количественную оценку получают, проводя двойное интегрирование спектра ЭПР. По калибровочной кривой г определяют концентрацию Mn(11) в биологической жидкости, например в слюне.

Калибровочную кривую строят путем двойного интегрирования площади сигнала

ЭПР модельных растворов Mn(11).

Условия записи спектров ЭПР: уровень мощности излучения СВЧ (сверхвысокой частоты) 10 дБ; внешнее магнитное поле

Но=3500 Э; развертка 1600 Э; скорость развертки !00 Э/мин; высокочастотная моду10 ляция магнитного поля 5 Э; постоянная времени 0,3 с.

Согласно предлагаемому способу определили концентрацию Mn (II) у 17 пациентов.

Концентрация Мп (11) в слюне M+-m=

=5,15!-0,87)(IO 5 М. Колебания Мп (11) в слюне составляют 12,24X10 — 0 90Х

yI0 М.

Пример. Донор Ч-на, 30 лет. Взяли 0 мл слкзны в пробирку. 0,4 мл слюны поместили в пресс-форму и заморозили в жидком азоте.

Образец выдавили из пресс-формы, поместили в кварцевый сосуд Дьюара, последний установили в резонаторе ЭПР-спектрометра

«Рубин» и провели запись спектра ЭПР.

Концентрация Mn (II), рассчитанная по предлагаемому способу с использованием калиб25 ровочной кривой, составила 9,43;к,10 М (по способу-прототипу концентрация Мп (11) составля"т 4,0я, !О М).

Предлагаемый способ по сравнению со способом-прототипом позволяет повысить точность и объективность определения в 30—

50 раз.

Формула изобретения

Способ количественного определения

Мп (11) в биологической жидкости путем регистрации спектров электронного парамагнитного резонанса замороженного в жидком азоте исследуемого образца и контрольного водного раствора известной концентрации Mn (I I) с последующей оценкой его содержания в исследуемом образце по калибровочной кривой, отличающийся тем, 40 что, с целью повышения точности, контрольный водный раствор Mn(II) известной концентрации готовят в растворе человеческого сывороточного альбумина с последующим его замораживанием в жидком азоте.

Составитель С. Рыков

Редактор А. Лежнина Техред И. Верес Корректор В. Бутяга

Заказ 2959/48 Тираж 77б Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий !!3035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4