Устройство для индентификации микроорганизмов

 

Изобретение относится к медицинской технике и предназначаемо для микробиологии Цель изобретения - стабилизация влажности при культивации микроорганизмов о Устройство состоит из контейнера 1, в котором установлена рабочая панель 2„ В рабочей панели 2 имеются ячейки 4 Дно ячеек выполнено в виде конусов. В контейнере 1 выполнены продольные канавки. Вдоль оси канавок расположены верпшны конусов. В ячейках 4 стенка контейнера 1 выполнена ступенчатой, что приводит к образованию зазора между крышкой 3 и рабочей панелью 2, Устройство изготавливают из полимерного материала. 3 ил. СО ГО о ю to со ФЦ8.1

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„ЯО„;,132О223

А1 (50 $ С 12 М 1/00

I3 j

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3799234/28-14 (22) 08.10.84 (46).30.06.87. Вюл. N- 24 (71) Горьковский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии (72) К.Я. Соколова, M.È. Рябова, И.В. Соловьева и А.А. Флоринский (53) 615.478 (088.8) (56) Патент Франции 2157050, кл. С 12 М i/00, 1973. (54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ . МИКРООРГАНИЗМОВ (57) Изобретение относится к медицинской технике и предназначено для микробиологии. Цель изобретения — стабилизация влажности при культивации микроорганизмов. Устройство состоит из контейнера 1, в котором установлена рабочая панель 2. В рабочей панели 2 имеются ячейки 4. Дно ячеек выполнено в виде конусов. В контейнере 1 выполнены продольные канавки.

Вдоль оси канавок расположены вершины конусов. В ячейках 4 стенка контейнера 1 выполнена ступенчатой, что приводит к образованию зазора между крышкой 3 и рабочей панелью 2. Уст- ройство изготавливают из полимерного материала. 3 ил.

132022

Изобретение относится к микробиологии и предназначено для идентификации микроорганизмов.

Целью изобретения является стабилизация влажности при культивации микроорганизмов.

На фиг. 1 показано устройство, общий вид; на фиг, 2 - рабочая панель; на фиг, 3 - основание.

Устройство состоит из контейнера 1О

1» в котором установлена рабочая панель 2, и крьппки 3. В рабочей панели

2 имеются ячейки 4 для дифференциально-диагностических сред. Дно ячеек выполнено в виде конусов 5. В контей- 15 иере 1 выполнены продольные канавки

6, вдоль оси которых расположены вершины конусов 5. Для поддержания оптимальной влажности в ячейках 4 стенка 7 контейнера 1 выполнена ступенча- 2О той, что приводит к образованию зазора между крышкой 3 и рабочей панелью 2.

Устройство изготавливают иэ полимерного материала путем вакуум-формо- 2 вания. Для изготовления носителя суб.:страта (рабочих панелей 2 с ячейками

l4 и основания) используют жесткую светотехническую поливинилхлоридную пленку белого цвета II группы, S = ЗО 0,55 мм. Для изготовления крьппки 3 используют прозрачную винипластовую каландрированную пленку марки КПС, 8 0,5-0,7 мм. Субстраты наносят в центры ячеек 4 в виде точки при помощи дозатора пипеточного П1-0,02. Рабочую панель 2 с ячейками 4 помещают в основание контейнера и закрывают крьппкой 3 ° после чего устройство упаковывают герметично в полиэтилен. 40

- Устройство используют следующим образом.

Составные части устройства моют и стернлизуют ультрафиолетом. Ячейки 4 рабочей части панели 2 заполняют различными дифференциально-диагностическими средами в жидком виде, а затем высушивают. Число ячеек 4 соответствует количеству тестов, обес- печивающих полную дифференциацию бак- 50 терий семейства кишечных. Для дифференциации предлагается испольэовать следующие тесты: цитрат натрия, малонат натрия, цитрат натрия с глюкозой, лизин„ аргинин, орнитин, фенилаланин, 55 индол, ацетилметилкарбонил, уреаза„ сероводород, глюкоза, р --галактозидаза, лактоэа, маннит, сахароза, инозит, сорбит, арабиноза, мальтоза.

Растворы дифференциально-диагностических сред готовят на оснсве фосфатных буферов. В качестве основного компонента используют дифференцирующий субстрат; изменение рН среды обнаруживают при помощи индикатора.

Например, для обнаружения óðåазы используют в качестве субстрата мочевину, индикатора - бромкреэоловый красный. Соответствующим агентом, определяющим сероводород, является тиосульфат натрия при наличии соли железа. Для обнаружения декарбоксилаз лизина, орнитина и дигидролаэы аргинина используют лизин, орнитин, аргинин и индикатор бромтимоловой синий.

Для определения ферментации углеводов (глюкозы, лактозы, маннита, сахароэы, арабинозы, мальтозы, иноэита, сорбита) используют соответствующие субстраты в присутствии индикатора фенолового красного. Субстратами для определения дезаминаэы являются такие аминокислоты, как фенилаланин и триптофан, а хромогенным р-галактоэидаэным субстратом является

0-нитрофенил-я-галактопираноэнд и твиде

Пример. Готовят смесь реагентов, состоящую иэ 120 г углевода и

0,85 r фенолового красного, которую растворяют при нагревании в ". л фос-, фатного буфера рН 8,0, Приготовленный раствор раскапывают дозатором пипеточным по 0,02 мм в одну из ячеек 4 рабочей панели 2. Подобным же образом раскапывают и остальные растворы дифференциально-диагнос."ических

I сред. Так заполняют все 20 ячеек 4 рабочей панели 2 ° После чего панели 2 высушивают в сушильном шкафу в течение 4 ч с дальнейшей стерилизацией ультрафиолетом в течение

1 ч, Затеи панель 2 с ячейками 4 помещают в контейнер, закрывают крышкой 3, эапаивают в полиэтилен и хранят. По мере надобности их используют для идентификации микроорганизмов.

Для этого готовят суспензию микроор- ганизма с агаровой среды. Используют только свежие культуры (18-24 ч).

Культуры старше 30 ч могут дать ложно-отрицательные результаты.

Суспензия микроорганизмов должна иметь точно видимую мутность и равна, по крайней мере, стандарту мутности

500 млн/мл микробных тел для свежевыделенных культур. У музейных культур могут быть обнаружены более низкие

3 13202 уровни энзиматической активности, чем у свежих клинических, поэтому готовится более плотный инокулят, приблизительно равный стандарту мутности

1 млрд/мл микробных клетОк. Суспензию готовят в 4 мл стерильного физиологического раствора рН 6,0+0,5.

Инокуляция и инкубирование.

Вскрывают упаковку. Регистрируют номер пробы и другую требуемую информацию. Открывают крышку 3 контейнера и располагают его на столе. Вынимают рабочую панель 2 и заливают воду в канавки 6 основания контейнера 1. Вставляют панель 2 с ячейками 4 в основание контейнера 1. Раскапывают пипеткой по 0,15 мп суспензии микроорганизма внутрь каждой реакционной ячейки 4, кроме теста на сероводород, 0 где вносят только одну каплю суспен-. зии (0,05 мл), Заливают .ячейку 4 с тестом на сероводород 0,1 мл растопленного и достаточно охлажденного (до 40 С) полужидкого arapa. Для соэ-25 дания анаэробных условий покрывают сверху стерильным вазелиновым маслом . ячейки с тестами: лизин, аргинин, орнитин,и сероводород (О, 1мл — 2-3 капли) .

Закрывают крышку 3 контейнера. Инку- 30 бируют 1824 ч при t 371 1 С. После окончания инкубации открывают крышку 3 контейнера и в ячейку 4 с тестом на фенилаланиндезаминазу добавляют

1 каплю 103-ного УеС1, в ячейку с 35

23 4 тестом на ацетилметилкарбинол — 1 каплю 67-ного <4-нафтола и затем 1 каплю

40Х-ного КОН, в ячейку с тестом на индолаобразование — 1 каплю реактива

Эрлиха.

Чтение реакции.

Читают все реакции немедленно как положительные или отрицательные согласно с цветовыми изменениями, исклю-. чая тест на ацетилметилкарбинол.

Позволяют окраситься тесту на ацетилметилкарбинол примерно в течение

10 мин, затем читают реакцию.

Устройство позволяет достаточно точно идентифицировать бактерии семейства кишечных до вида, обладает большой скоростью ответа, удобно в постановке, экономично, всегда готово к употреблению и не требует затрат бактериологической посуцы.

Формула изобретения

Устройство для идентификации микроорганизмов, выполненное в виде контейнера с крышкой и рабочей панели с ячейками, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью стабилизации влажности при культивации микроорганизмов, в контейнере выполнены продольные канавки, а дно ячеек рабочей панели выполнено в виде конусов, вершины которых расположены вдоль оси ,канавок, а крышка установлена с зазором относительно рабочей панели.

1320223

Составитель С. Клыпкин

Редактор И. Рыбченко Техред И.Попович

Корректор JI- Пилипенко

Заказ 2612j22 Тираж 499

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делаи изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-пслиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4