Способ выявления концевых пластинок и нервных терминалей скелетной мышцы

 

Изобретение относится к гистологии . Цель изобретения - более четкое окрашивание концевых пластинок. Гистологические препараты высушивают и инкубируют в среде с индоксилацетатом, этанолом, красителем прочным синим РР и фосфатным буфером. После промывания препараты фиксируют, инкубируют в среде с хлоралгидратом и пиридином и импрегнируют. Затем переносят в среду с гидрохиноном и сульфатом натрия. После этого фиксируют в растворе тиосульфата натрия, обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам. Ш (Л О) 00

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19> (11) А1 (51)4 С 01 N )/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

К АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3778547/28-14 (22) 05,06.84 (46) 15.05.87.Бюл. Ф 18 (71) Казанский государственный медицинский институт им.С.В.Курашова (72) Н.П.Резвяков и А.П.Киясов (53) 616-089 (088.8) (56) ("*orio А. etaI Reinneriation-П.

Sprouting, synapse Еormation and

repression. — Neuroscience, 1983, v ° 8э w.3ý р 403 416 °

Фросин В.Н., Никольский Е,Е., Воронин В.А. О полиаксональной иннервации фазных мышечных волокон лягушки, — Физиол. ж.„ 1978, т.64, Ф б, с.741. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ КОНЦЕВЫХ ПЛАСТИНОК И НЕРВНЫХ ТЕРИИНАЛЕЙ СКЕЛЕТНОЙ

МЫ) )ЦЫ (57) Изобретение относится к гистологии. Цель изобретения — более четкое окрашивание концевых пластинок, Гистологические препараты высушивают и инкубируют в среде с индоксилацетатом, этанолом, красителем прочным синим PP и фосфатным буфером. После промывания препараты фиксируют, инкубируют в среде с хлоралгидратом и пиридином и импрегнируют. Затеи переносят в среду с гидрохиноном и сульфатом натрия. После этого фиксируют в растворе тиосульфата натрия, обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам.

1310678

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано при физиологических и морфологических исследованиях скелетных мышц человека и животных при 5 изучении иннервации и реиннервации их, при определении моно- и полисинаптичности мышечных волокон, полиаксойальности концевых пластинок в процессе развития и регенерации скелетной мьппцы.

Целью изобретения является более четкое окрашивание концевых пластинок путем включения в инкубационную среду индоксилацетата и использования в качестве красителя прочного синего PP.

Пример 1. Криостатные срезы скелетной мышцы крысы, наклеенные на предметные стекла, высушивают на воздухе при комнатной темнературе и инкубируют в среде. состава; индоксилацетат 10 мг„ этанол 2 мл; краситель прочный синий PP 100 мг, фосфатный буфер остальное при рН 5,6, при 37 С в течение 1 — 2 мин с послеа дующим промыванием в дистиллированной воде 1 мин, фиксированием в течение 15 мин в среде: формалин 20 мл, хлорид натрия 4,25 r, вода дистиллированная .180 мл. После промывки в дистиллированной воде, инкубирования в течение 30 мин при 37 С в среде состава: хлоралгидрат IO г, пиридин

1 г, вода дистиллированная 100 мл, импрегнируют в течение 30 мин в растворе: нитрат серебра 6 г, вода дистиллированная 30 мл, карбонат кальция 50 мг, добавляют при помешивании

30 мг сульфата меди, промывают в дис40 тиллированной воде 5 с, далее переносят в среду: гидрохинон I г, сульфит натрия 5 r вода дистиллированная

100 мл, разлитую в два стаканчика, в первый на 5 с, во второй — на 4 мин, 45 и промывают в двух порциях дистиллированной воды по 0,5 мин, фиксируют в 5Х-ном тиосульфате натрия, после чего промывают в воде, обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле и

50 заключают в бальзам.

Пример 2. Криостатные срезы скелетной мьппцы морской свинки, наклеенные на предметные стекла, высушивают на воздухе при комнатной тем55 пературе и инкубируют в среде состава: индоксилацетат 40 мг, этанол

3 мл, прочный синий PP 70 мг, фосфатный буфер остальное при рН 5,6, при о

37 С в течение 0 5 — 1 мин с последующим промыванием в дистиллированной воде 1 мин, фиксированием в течение 15 мин в среде: формалин 20 мл, хлорид натрия 4,25 г, вода дистиллированная 180 мл. Промывают в дистиллированной воде, инкубируют в тече. о ние 30 мин при 37 С в среде состава: хлоралгидрат 10 г, пиридин 1 г, вода дистиллированная 100 мл, импрегнируют в течение 20 мин в растворе: нитрат серебра 6 r вода дистиллированная 30 мл, карбонат кальция 50 мг, добавляют при помешивании 30 мг сульфата меди и промывают в дистиллированной воде 5 с, далее переносят в среду: гидрохинон 1 r сульфит натрия 5r вода дистиллированная 100 мл, разлитую в два стаканчика, в первый на 5 с, во второй — на 4 мин, и промывают в двух порциях дистиллированной воды по 0,5 мин, фиксируют в

57.-ном тиосульфате натрия, после чего промывают в воде, обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам.

Пример 3. Криостатные срезы скелетной мьппцы крысы, наклеенные на предметные стекла, высушивают на воздухе при комнатной температуре и инкубируют в среде состава: индоксилацетат 15 мг, этанол 4 мл, проч— ный синий PP 140 мг, фосфатный буфер остальное при рН 5,6, при 37 С в течение 2-3 мин с последующим промыванием в дистиллированной воде

1 мин, фиксированием в течение

15 мин в среде: формалин 20 мл, хлорид натрия 4,25r, вода дистиллированная 180 мл. Промывают в дистиллированной воде, инкубируют в течение 30 мин при 37 С в среде состава: хлоралгидрат 10 г, пиридин 1 г, вода дистиллированная 100 мл, импрегнируют в течение 40 мин в растворе: нитрат серебра 6 г, вода дистиллированная 30 мл, карбонат кйльция

50 мг, добавляют при помешивании

30 мг сульфата меди и промывают в дистиллированной воде 5 с, далее переносят в среду: гидрохинон 1 г, сульфит натрия 5r вода дистиллированная 100 мл, разлитую в два стаканчика, в первый на 5 с, во втоpoli — на 4 мин, и промывают в двух порциях дистиллированной воды по

0,5 мин, фиксируют в 57 — ном тиосуль10678 4 нол и краситель с последующей импрегнацией срезов нитратом серебра и определением концевых пластинок и нервных терминалей по почернению структуры, отличающий с я тем, что, с целью более четкого окрашивания концевых пластинок, инкубационная среда дополнительно содержит индоксилацетат, а в качестве красите<О ля — прочный синий РР, при следующих соотношениях компонентов, мас,X:

13 фате натрия, после чего промывают в воде, обезвоживают в спиртах,просветляют в ксилоле и заключают в бальзам.

Как видно из приведенных примеров, предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет выявить концевые пластинки за более короткий период времени за счет исключения ряда этапов. Для получения одного гистологического препарата с выявленными концевыми пластинками и их нервными терминалями известным способом затрачивается 4 ч, а предлагаемым способом 2 ч !О мин.

70 — 140

Составитель М.Позняк

Техред А. Кравчук

Редактор К.Волощук

Корректор А.Тяско

Заказ 1882/38 Тираж 777 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб °, д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.улсгород, ул.Проектная, 4

Формула изобретения

Способ выявления концевых пластинок и нервных терминалей скелетной мышцы путем приготовления гистологического препарата, инкубации в среде, содержащей фосфатный буфер, этаИндок силацетат 1Π— 40

Этанол 2-4

Прочный синий PP

Фосфатный буфер

5э0-7å0 Остальное при этом инкубацию проводят в течение 0,5 — 3 мин, а импрегнацию сереб ром осуществляют в течение 20-40 мин.