ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3451505/23-04 (86) PCT/JP 81/00260 (30.09.81) (22) 08.06.82 (31) 140509/80 (32) 09.10.80 (33) JP (46) 15.09.86. Бюл. В 34 (71) Грелан Фармасьютикал Ко, Лтд (л) (72) Козуо Кигасава, Иинехару Хийраги, Кикуо Вакисака, Кейко Итикава, Кикуо Наказато и Тайдзи Окада (JP) (53) 547.854.4.07(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

1((1117298, кл. С 07 D 239/54, 1976. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ М-ФТАЛИДИЛ-5-ФТОРУРАЦИЛА общей формулы I где R(и R разные и выбраны из группы, состоящей иэ атома водорода и фталидиловой группы, о т л и ч а ю(511 4 С 07 D 239/54, 405/04, 307/88, . А 61 К 31/505, 31- 434 вЂ” вЂ”вЂ” шийся тем, что производное

5-фторурацила обшей формулы II где R< вЂ” водород, ацетил;

R вЂ” водород, бензоил, причем (( если R, вЂ” ацетил, то R

I водород, если R вЂ” бензоил, то R вЂ” водород, вводят во взаимодействие с 3-бромфталидилом или 3-хлорфталидилом в полярном органическом растворителе, таком как диметилформамид диметилацетамид или диметилсульфоксид, в присутствии щелочного конденсирующего агента, выбранного из группы: гидрид натрия, карбонат натрия или карбонат калия,и если в качестве исходного используют соединения формулы II, где К, вЂ” ацетил; К - водород

I или R, вЂ” водород1 R< вЂ” бензоил, то полученный продукт йодвергают гидро" лизу при кипячении в кислом полярном органическом растворителе.

Изобретение относится к способу получения производных И-фталидил-5-фторурацила вЂ” новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медимуюне.

Цель изобретения вЂ” способ получения новых производных И-фталидил-5-фторурацила, обладаюпр х более высокой противоопухолевой активностью и низкой токсичностью.

Пример 1. И,-фталидил-5-фторурацил (А}.

К раствору в 10 мл диметилформамида (ДИФА} 1,30 - 5-фторурацила добавляют 0,80 г гидрида натрия (содержание 60%) при перемешивании ;r охлаждении. Затем по каплям в смесь вводят раствор 4,69 г 3-бромфталида в

5 мл ДИФА. После завершения этой стадии смесь перемешивают 15 мин при охлаждении льдом, а затем вЂ” 3 ч при комнатной температуре, после чего добавляют IOO мл воды и продукт экстр""гируют хлороформом. Слс и хлороформа промывают водой, сушат над безводным сульфатом натрия, затем растворитель отгоняют. Остаток дважцы промывают

50 мл и -гексана и в него добавляют

20 мл хлороформа. Образовавшиеся кристаллы отфильтровывают, получают

0,26 г (10%) бесцветных кристаллов

N -фталиднл-5-фторурацила. После

t перекристаллизации из смеси метанол "этилацетат получают бесцветные иглы., имеющие т.mr. 292-296 С (разложение).

Найдено, %. "С 55,09", Н 2,89,;

И 10,55.

С ) Hr FN Gy

Вычислено, %: С 54 97;, Н 2,69;

N 10 68.

При хроматографировании в тонком слое киэельгеля 60 Fg 4 в системе зтилацетат: хлороформ;, гексан-3:3:1

R = 0,19.

ИК-спектр, см (КВг): 1790, 1700 и

1660 (С=о и С=С).

ЯИР"спектр. 8 (CDC1, +с1,, -ВЫСК)

:7,43 вЂ” 8,17 (6Н, и, Аг-Н и А -СН), П р и и е р 2. И -фталидил-5-фторурацил (Б). (1) ° В раствор 3„44 г 1-ацетнл-5-фторурацила в 8 мл ДИФА при перемешивании н охлаждении добавляют 80 .г гидрида натрия (60% содержание). 3атем в смесь по каплям добавляют раствор 4,69 r 3-бромфталида в 7 мл ДЕФА

После завершения этой операции смесь перемешивают 3,5 ч прн комнатно" тем--.

258325 2 пературе, добавляют 100 мп воды и продукт экстрагируют хлороформом.

Слой хлороформа отделяют и промывают водой, сушат над безводным сульфатом натрия, растворитель отгоняют. Остаток дважды промывают н--гексаном по

25 мл, получают неочищенный И,-ацетил-И -фтапидил-5-фторурацил. В этот продукт добавляют 50 мп 0,5 N раство10 ра соляной кислоты и 50 мл этанола, а затем смесь дефлегмнруют 15 мин.

Далее растворитель отгоняют, в оста" ток добавляют воду, а образующиеся бесцветные кристаллы собирают фильт15 рацией. После проьывки водой и сушки продукт нагревают в 15 мл хлороформа и вЫцерлжвают прн дефлегмировании в течение 3 мин ° После фильтрации в го рячем состоянии получают 2,65 г (50%)

2Î бесцветных кристаллов (Б). После перекристаллизации из метанола получают бесцветнь1е иглы, имеющие т.пл.234ч3 70 С

Найдено, %: C 55,21; Н 2,96;

И 10,42.

С„НГИ,О, .

Вычислено, %: С 54,97; Н 2,69;

И 10,68.

При хроматографировании в тонком у слое кизельгеля 60 Fag< в системе этилацетат: хлороформ: гексан 3:3:1

B g =- 0,14.

ИК-спектр, см" (КВг): 1780, 71725 и 1675 (С=О и С=С) .

ЯИР-спектр: P (CDC1 > + d6 вЂ” DNCK}r

7,38 вЂ” 8,05 (и, 6Н, Аг-Н и Аг-СН). (2). Смесь 0,65 г 5-фторурацила, 1, 17 г 3-бромфталида„ 1,00 r карбоната калан и 40 мл ДИФ перемешивают при ,,О 100-110 С в течение 1,5 ч. Затем раО створитель отгоняют Hpp пониженном давлении. В остаток добавляют воду и продукт экстрагируют этилацетатом.

Слой этилацетата промывают водой и сушат над безводным сульфатом натрия, растворитель отгоняют. Остаток перекристаллизовывают из метанола, получают 0,29 (22%) бесцветных игл, имеющих т.пл. 234-237 С. Этот продукт полностью идентичен соединению (Б), полученному в(1), что устанавливают при помощи ИК-спектра и тонкослойной хроматографии.

П р и и .е р 3. И -фталидил-5-фторурацил (А).

К раствору 4,68 г И -бензоил-5"

-фторурацила в 5 мл ДЕФА при перемешнвании и охлаждении льдом добавляют

1258

0,80 г гидрида натрия (содержание

60 ). Затем в смесь по каплям вводят раствор 4,67 г 3-бромфталида в 10 мл

ДМФА. Смесь перемешивают при охлаждении льдом в течение 15 мин, а затем вЂ” еще 1 ч при комнатной температуре ° . Полученную реакционную смесь вливают s 200 мл воды и продукт экстрагируют хлороформом. Органический слой промывают водой и сушат над 10 безводным сульфатом натрия. Далее растворитель отгоняют и остаток промывают петролейным эфиром. Остаток перекристаллизовывают из этилацетата, получают 3,63 г (50 ) бесцветного 5 порошка с т.пл. 207-210 С. Маточный раствор подвергают обработке на хроматографической колонке на силикагеле, в результате получают 0,67 r (9X) кристаллов. Общий выход N -бензоил- 20

-К -фталифил-5-фторурацила 4,30 г (S9X).

ИК-спектр, см (KBr) 1780, 17509

1710, 1680 и 1660 (С=О и С=С), ЯМР"спектр: 8 (С0С1 ) : 6,85 (1Н, 25 дв СН1 6-Н), 7,43 вЂ” 8,26 (10Н, м, Ar-H u Ar-ÑÍ) °

Затем смесь 3,0 г упомянутог0 соединения, 450 мл этанола и 25 мл ук,сусной кислоты нагревают до темпера- 30 туры дефлегмирования и выдерживают при этой температуре 35 ч. Выпавший при охлаждении продукт отфильтровывают промывают простым эфиром, полу- . чают 0,69 г N, -фталидил 5-фторурацила35 (А) . Кроме того, 0,48 г того же сое" . динения получают из маточного раствора. Общий выход составляет 1,07 г (54X). После перекристаллизации иэ смеси метанол вЂ” этилацетат, получают 40 бесцветные иглы с т.пл. 292-296ОС (разложение). Этот продукт идентичен продукту (А), полученному в примере

1, по ИК- и ЯМР-спектрам и реэульта там тонкослойной хроматографии. 45

Пример 4. N,-фталидил-5-фторурацкп (А).

4 (1). В 250 мл диметилформамида (ДИФА) растворяют. 19,5 r 5-фторурацила и 25,87 г 3-хлорфталида и затем 50 добавляют к полученному раствору при перемешивании небольшими порциями

10,35 г карбоната калия (К СОэ). После добавления последней порции карбоната калия смесь перемешивают 3,5 ч. 55

Смесь оставляют на ночь; после чего нейтрализуют ее разбавленным раствором соляной кислоты при перемешивании

325 4 и охлаждении льдом. Выпадающий твердый осадок отфильтровывают, промывают последовательно водой и метанолом и высушивают в вакууме. В результате получают 34,14 г (выход 86,9X) целевого соединения в виде белых кристаллов. После перекристаллизации из смеси метанола и этилацетата получают бесцветные иглы с т.пл. 292-296 С (с разложением). ИК-, ЯМР-спектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта полностью идентичны аналогичным характеристикам соединения (А), полученного но примеру 1. (2). В 35 мл диметияацетамида (ДМА) растворяют 2,6 r 5-фторурацила и 3,37 г 3-хлорфталида. К полученному раствору при перемешивании при комнатной температуре добавляют небольшими порциями 1,06 г карбоната натрия. После добавления последней порции карбоната натрия реакционную смесь перемешивают 3,5 ч и затем выливают ее в воду. Выпадающий осадок отфильтровывают и прозывают его последовательно водой и этанолом. Получают 4,01 г (выход 76,5 ) бесцветного кристаллического продукта. После перекристаллизации его из смеси метанола и этилацетата получают бесцветные игольчатые кристаллы, имеющие т.пл.

292-296 С (с разложением). ИК-, ЯМРспектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта полностью идентичны аналогичным характеристикам соединения (А), полученного по примеру 1. (3). Процесс проводят аналогично примеру 7(2), с той разницей, что вместо 35 мл ДМА используют 30 мл диметилсульфоксида (UNCO). Реакционную смесь обрабатывают по примеру 4 (2), в результате получают 3,81 r (выход

72,7 ) бесцветного кристаллического продукта. После перекристаллизации его из смеси метанола и этилацетата получают бесцветные игольчатые кристаллы, имеющие т.пл. 292-296 С (с разложением). ИК-, ЯМР-спектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта полностью идентичны аналогичным характеристикам соединения (А), полученного по примеру 1. (4). 2,6 г 5-фторурацила суспендируют в 20 мл ДМФА, добавляют к суспенэии 15 мин при перемешивании и

5 1258 охлаждении ее льдом 0,96 г 50 -ного гидрида натрия, а затем по каплямвЂ” раствор 3,37 г 3-хлорфталида в 10 мл

ДМФ. После окончания добавления указанного раствора смесь перемешивают

15 мин, охлаждая ее льдом, а затем перемешивание продолжают еще 3 ч при комнатной температуре. После окончания реакции смесь выливают в воду со льдом и перемешивают. Выпадающий оса- 10 док после отделения промывают водой и высушивают в вакууме. В результате получают 4,5 г (выход 85,9 ) бесцветного кристаллического продукта. После перекристаллизации его из смеси метанола и этилацетата получают бесцветные игольчатые кристаллы, имеющие

-т.пл. 292-296 С (с разложением). ИК-, ЯМР-спектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта полностью идентичны аналогичным характеристикам соединения (А), полученного по примеру 1. (5). Растворяют в 30 мл ДМСО

2,6 г 5-фторурацила и 4,26 г 3-бромфталчда и добавляют к полученному раствору при комнатной температуре

2,76 г карбоната калия. Далее процесс проводят аналогична примеру 7(f)

После окончания реакции реакционную смесь обрабатывают также по примеру

7(1). Получают 3 54 г (67,6 ) бесцветного кристаллического продукта.

После перекристаллиэации его из смеси метанола и этилацетата получают

35 бесцветные иголвчатые кристаллы, имеющие т.пл. 292-296 С (с разложением), ИК-, ЯМР-спектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта идентичны аналогичным характеристикам соединения (А), полученного по примеру (6). Повторяют процесс, описанный в примере 4(2), с той разницей, что вместо 3 37 r 3-хлорфталида исЭ

45 пользуют 4,26 г 3-бромфталида. После окончания реакции смесь обрабатывают по примеру 4{2). Получают 3,61 r (выход 68,9 ) бесцветного кристалли:ческого продукта. После перекристал50 лизации его из смеси метанола и этилацетата получают бесцветные игольчатые кристаллы, имеющие т.пл ° 292296 С (с разложением), ИК-, ЯМРспектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта иден- 55 тичны аналогичным характеристикам соединения (А), полученного по примеру I°.

325 б

Пример 5. И -фталидил-5фторурацил (Б), (1). Процесс проводят по примеру

2(1), с той разницей, что вместо

4,69 r 3-бромфталида используют 3,37 г

3-хлорфталида. После окончания реакции реакционную смесь обрабатывают смесью 0,05 н. HCl и этанола, а дальнейшую обработку проводят, как в примере 2(1). В результате полу" чают 3,27 r (выход 62,4 ) бесцветного кристаллического продукта. После перекристаллизации его из метанола получают бесцветные игольчатые кристаллы, имеющие т.пл. 234-237 С. ИК-, ЯМР-спектры и данные тонкослойной хроматографии полученного продукта полностью идентичны аналогичным характеристикам соединения (Б), полученного по примеру 2(1).

{2) Растворяют в 27 мл ДМСО 3,44 г

М,-ацетил-5-фторурацила и 3,37 r 3-клорфталнда. После добавления к полученному раствору 2,76 г карбоната калия небольшими порциями реакционную смесь перемепиюают 6 ч при комнатной температуре. После окончания реакции реакционную смесь выливают в воду и проводят экстракцию хлороформом. Хлороформенный экстракт промывают водой и высушивают над безводным сульфатом натрия, после чего растворитель отгоняют. К остатку добавляют 50 мп

C,05 н. НС1 и 50 мл этанола, а дальнейшую обработку проводят, как в примере 2{1). В результате получают

3, 18 r (выход 60,7 ) бесцветного кристаллического продукта. После перекристаллизации его из метанола получают бесцветные игольчатые крисо таллы, имеющие т.пл. 234-237 С. По

ИК-, ЯИР-спектрам и данныи тонкослойной хроматографии полученный продукт полностью идентичен соединению (Б), полученному по примеру 2(1).

Проведены биологические испытания соединений.

Противоопухолевая активность. (1). P-388 (fx10 клеток) имплан6 тируют в брюшную полость самки-мыши

BDF< (достигшей возраста 6 нед.). .Испытываемый материал суспендируют или растворяют в 0,3 .-ном водном растворе КМЦ и применяют стоматическим способом один раз в день в течение 9 дн. через день после имплантации. Противоопухолевую активность оценивают отношением количества дней жизни обранию к твердым опухолям.

Таблица 1

Противоопухопевая актиэность против Р-388, Иет-А и ИН-13ч

Обработка мыши (контрольной мыши), Х

Соединение, мг/кг

Ка рцинома ио I >so J оо ) ьо j гь

136 104

115

Р"388

Тегафур

И-Фт ел идил5-фт ор г рацил (соединение А) 129 116

М 3 "Фталидил5-фторурацил (соединение Б) 102

120 1Оч

100

ИН-13ч Тегафур

Соединение А

Тегафур .Соединение А

Соединение Б

Гибель

Иет-А

7 1258 ботанной мыши к аналогичному показателю для контрольной мыши. В каждой группе содержится пять мьппей. (2). Иет-А (5х10 клеток) и ИН13ч (31x10 клеток) имплантируют под6

5 кожным способом н область брюшной полости мьппи Babb и C3H/Hå соо. в =-.ственно. Испытываемый мат=риал, суспенднрованньй или растворенный B

0,3й-ном водном растворе К Щ,, приме- „О няют стоматическим способом дьажды в день в течение 20 дн. спустя 1 дн по Имплантации; вес опухоли определяют на 21-й день после имплантации.

* Наблюдалось снижение scca мыши.

Острая токсичность.

Образуют группу иэ десяти самок мьппи 1СР, достигших возраста 6-7 нед.

Каждый испытываемый материал применяют стоматическим способом. Фиксируют смертность спустя 3 нед и с помощью этих результатов рассчитывают

10ц -значение ° Получены следующие результаты.

325 8

Противоо ухол активность оценивают отношением веса опухоли обработанной мьппн к нему опухоли контрольной мыши. Используют 5-6 мышей в каждой группе. С целью сравнения осуществляют ту же процедуру, что была описана для И-(2-тетрагидрофура ннл)-фторурапила (тегафур).

Полученные результаты приведены в табл.

Описываемые соединения обладают исключительной активностью по отношеЫ) П -значения (мг/кг): тегафур

1650; соединение А 2500 или более; соединение УБ 2500 илн более.

Концентрация в крови.

Иышам (самкам) BDF,, достигшим возраста 6 нед, стоматическим способом вводят каждый испытываемый материал в дозе 1 ммоль/кг. Спустя некоторое время у мышей берут кровь. Пос9 1 258325 )О ле отделения сыворотки от крови кровь ного диска (Эйкен) . Неизменные соедиразделяют на фракции: на неизменный нения А и Б определяют при помощи материал и 5-фторурацил, который уча- высокоскоростной жидкостной кромаствует и обмене веществ. Далее изме- тографии. Эксперимент осуществляют ряют концентрацию 5-фторурацила и g с использованием 3-4 мышей в каждой тегафура с использованием метода группе. тонкого слоя в чашке и штамма Staphylococcus aureus 209Р в половине коли- Полученные результаты приведены чества культурной среды чувствитель- в табл. 2 и 3.

Таблица 2

Концентрация метаболита (5-фторурацила) s крови (в г/мл) 2,0

7,0

4)О

1,0

0,5

Испытываемый материал

0)33 + 0)05 Оэ24 + 0»01 0)21 + 0 ° 01 0)10 + +Оэ02 0 ° 06 «+ Оэ01

Тегафур

Соединение А 2,00 + 0,14 1,14 + 0,12 0,65 «+ 0,94 0,14 + 0,0f О) f0 + 0,01

Соединение Б 1,95 + 0,38 3,55 + 0,24 1,96 + О) 23 0,45,+ 0,11 0,09 + 0,01

Та блица 3