Способ определения хлорофиллида в растениях с повышенным содержанием органических кислот

 

Изобретение относится к способам определения бесфитольной формы хлорофилла в растениях с разным типом метаболизма и позволяет повысить точность определения. Растительньш материал гомогенизируют с песком и мелом в среде хлороформа, сливая его и добавляя свежие порции до полного обесцвечивания материала. Экстракт хроматографи руют в смеси хлороформгексан (8:2). Фитолизированные пигменты имеют Rf, равный 1, а бесфильные - Rf, равный 0,3. Хлорофиллид элюируют с хроматограммы ацетоном и спектрофотометрируют для расчета концентрации. 1 табл. (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (5i) 4 С o1 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ,; :7

Н ABTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA (21) 3699714/30-15 (22) 13.12.83 (46) 23.04.86. Бюл. N 15 (71) Институт фотобиологии АН БССР (72) Э.В.Ходасевич, А.И.Арнаутова, Н.К.Акулович, В.Н.Гвардиян и А.M.Neльникова (53) 612.0154.581.19 (088.8) (563 Калер В.Л., Шлык А.А. Изменение содержания прото-хлорофиллида в процессе жизни зеленого растения.

Биохимия, 1962, т.27, вып. 4.

Власенюк Л.И,, Шлык А.А. Хлорофиллид как промежуточный продукт в процессе превращения протохлорофиллида в хлорофилл, — Биохимия, 1963, т.28, вып. 1.

„.ЯО„„яяя я д (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРОФИЛЛИДА

В РАСТЕНИЯХ С ПОВЫШЕННЫМ СОДЕРЖАНИЕМ

ОРГАНИЧЕСКИХ КИСЛОТ (57) Изобретение относится к способам определения бесфитольной формы хлорофилла в растениях с разным типом метаболизма и позволяет повысить точность определения. Растительный материал гомогенизируют с песком и мелом в среде хлороформа, сливая его и добавляя свежие порции до полного обесцвечивания материала. Экстракт хроматографируют в смеси хлороформгексан (8:2). Фитолизированные пигменты имеют Rf, равный 1, а бесфильные — Rf, равный 0,3. Хлорофиллид элюируют с хроматограммы ацетоном и спектрофотометрируют для расчета концентрации. 1 табл.

1226312

Фиксация паром

Зкстракция ацетоном

Растение

nacre,Híêóáàöèè 2 ч в хлороформе быстрая

0,0338

0,0327

0,0321

0,0312

0,0265

0,0251

0,0238

0,0229

Хлорофиллид отсутствует

0,0326+0,0021

0,0255

0,0243

0,0233

0,0247+0,0028

0,0291

0,0281

0,0273

Сосна

Изобретение относится к биохимии растительных пигментов, в частности к способам определения хлорофиллида (бесфитольной формы хлорофилла) в растеннях с разным типом метаболизма, и в том числе в растениях, содержащих большие количества органических кислот (например, в листьях хвойных, щавеля и др.), и может быть использонано при исследовании эффективности 1О работы системы биосинтеза хлорофилла, как одного из важнейших звеньев проблемы управляемого фотосинтеза.

Цель изобретения — повышение точности способа. ll5

Для этого растительный материал гомогенизируют с песком и мелом в среде хлороформа, сливая его окрасившиеся и добавляя свежие порции до полного обесцвечивания материала. 2О

Полученный экстракт хроматографируют в смеси хлороформ — гексан (8:2).

Предлагаемая смесь позволяет быстро и надежно отделить фитолизированные пигменты от бесфитольных, поскольку 25

Rf первых из них в этом случае равен 1, à Rf вторых 0,3. Хлорофиллид элюируют с хроматограммы ацетоном и спектрофотометрируют для расчета концентрации. ЗО

Пример. Берут 2 г растительного материала, растирают в ступке с песком и мелом под хлороформом, который по мере окрашивания декантируют, повтоРяя процедуру до полного обесцвечивания растительного материала.

Полученный экстракт наносят полосой на хроматографическую бумагу марки средняя и хроматографируют в смеси хлороформ — гексан (8:2).

Использование такой смеси позволяет быстро и надежно отделить фито1 лизированные пигменты от бесфитольных, поскольку Rf первых из них в этом случае равен 1, à Rf вторых

0,3. Хлорофиллид элюируют с хроматограммы и спектрофотометрируют для расчета концентрации. Сравнительное содержание хлорофиллида (в процентах к хлорофиллу) при разных способах обработки растительноГо материала приведено в таблице.

Формула изобретения

Способ определения хлорофиллида в растениях с повышенным содержанием органических кислот, включающий гомогенизацию материала в органическом растворителе, экстракцию пигментов органическим растворителем, выделение хлорофиллида и его спектрофотометрическое определение, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повьш ения точности способа, в качестве органического растворителя при экстракции используют хлороформ, а выделение осуществляют смесью хлороформа и гексана при их соотношении

8:2 °

Экстракция хлороформом

1226312. Продолжение таблицы

Фиксация паром

Экстракция ацетоном

Экстракция хлороформом

Растение после инкубации 2 ч в хлороформе быстрая

0,0267

0,0225

Геракл еум

0,0331

0,0322

0,0315

0,0305

0,0307

Рожь

0,0305+0,0009

Ячмень

0,0408+0,0021

0,0378+0,0009

Составитель И.Тареева

Техред Л.Олейник Корректор М.Демчик

Редактор А.Шишкина

Заказ 2123/41 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие,г.ужгород,ул.Проектная,4

0,0319+0,0018

0,0380

0,0378

0,0373

0,362

0,0375+0,0014

0,0422

О, 0411

О, 0402

О, 0394

0,0240+0,0020

0,0306

0,0297

0,0290

0,0285

0,0295+0,0017

0,0312

0,0303

0,0296

0,0290

0,0296+0,0009

0,0384

0,0381

0,0379

0,0378

О, 0279+0, 0019

0,0329

0,0319

О, 0311

0,0317+0,0018

0,0311

0,0305

0,0301

0,0299