Способ выделения несимбиотических азотфиксирующих микроорганизмов

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) 83 А (51)4 С 05 Г 11 08

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

llO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3666615/30-15 (22) 25.11.83 (46) 15.02.87. Бюл. У 6 (71) Всесоюзный научно-исследователь. ский институт сельскохозяйственной микробиологии (72) Л.Ф.Васюк, О,А,Берестецкий и Т.А.Элисашвили (53) 576.8.095.31(088 ° 8) (56) Day S.M., ЭоЪеге1пег I "Soil

Biol Biochem", 1976, 8, 1, р.45-50, (54) (57) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ НЕСИМБИОТИЧЕСКИХ АЗОТФИКСИРУЮЩИХ МИКРООРГАНИЗМОВ путем выращивания растений, отделения корней, промывания, измельчения и внесения их в элективную питательную среду, инкубирования с последующим выделением asотфиксирующих микроорганизмов из среды, о т ,л и ч а ю шийся тем, что. с целью повышения эффективности способа, выращивание растений осуществляют путем проращивания в течение суток семян, обработанных перекисью водорода на среде Красильникова-Кореняко с вермикулитом с последующим добавлением в эту среду разведений почв и

;,выращиванием растений 20-22 дня, а в качестве питательной среды для инкубирования измельченных корней используют среду Доберейнер.

1 121

Изобретение относится к почвенной микробиологии, в частности к способам выделения несимбиотических азотфиксирующих микроорганизмов.

Цель изобретения — разработка способа выделения несимбиотических азотфиксирующих микроорганизмов, позволяющего выделить азотфиксирующие микроорганизмы, относящиеся не только к группе Spirillum lipoferum, но и к другим группам, и, что самое главное, выделять только наиболее активные микроорганизмы-азотфиксаторы путем подавления роста неактивных и малоактивных микроорганизмов.

Пример осуществления способа.

Различные представители злаков (овсяница, кострец, райгррас., мятлик, ценхрус, рис и др.) выращивают. в условиях стерильного лабораторного опыта при нормальном освещении. Ðàñтения высаживают проросшими простерилизованными семенами (307-ная перекись водорода в течение 20 мин) в большие пробирки с вермикулитом и средой Красильникова-Кореняко следующего состава (Микробиология, 1940, 9, 1.27), г/л:

К НР0 1,0

Мязо, 1,0

Са (Р0„) 0,2

Ге$0» Следы

Вода дистиллированная До1л рН 6,2-6,4 с добавлением микроэлементов по

Федорову. Через сутки растения заражают разведениями (1:100) почв с различной степенью биологической активности. Через 20-22 дня корни растений отмывают в стерильной воде, растирают стерильно в ступке и гомогенаты корней добавляют в жидкую модифицированную среду Доберейнер, 0383 г следующего состава (Barber Z. Ь et аl. "Appl. an) Environ. Microbiology, 1976, 32, 1.108), г/л:

КН РО„ 0,4

К,ЙРО

0,1

MgSO 7Н 0 0,2

NaC1 0,1

СаС1 0,02

FeC1 0,01

10 NaMoO 2Н 0 0,002

Яблочная кислота 3,6

ЫН„С1 0,013

0,17.-ный спиртовой раствор бромтимол15 блау 5 мл

Вода дистиллированная До 1л рн 6,5-6,6

После 4-суточной инкубации при

20 26 С определяют видовой состав микрофлоры высевом на твердую модифицированную среду Доберейнер (идентична укаэанной жидкой среде, но содержит также 27 агара). При рассеве гомогената корней на твердую модицифированную среду Доберейнер вырастают колонии 4-12 видов микроорганизмов, а не 200-300, как при обычных способах, причем все выделенные микроорганиз30 мы — активные аэотфиксаторы.

Предлагаемым способом с корней растений выделяют активные аэотфиксирующие микроорганизмы, относящиеся не только к семейству Spirillaceae (род

35 Aguaspirillum, род Azospirillum), но и коринеформные бактерии (род

Arthrobacter, род Corynebacterium), представители семейства Entегоbacteriaceae (род Erwinia) и другие, еще

40 неидентифицированные бактерии. Выделенные микроорганизмы проявляют азотфиксирующую способность как в чистых культурах, так и в ассоциациях с растениями (см. таблицу).

3 1210383

Азотфиксирующая активность корневых микроорганизмов

Нитрогеназная активность в ассоциациях,мкг N (сутки) сосуд

Род бактерий

Нитрогеназная активность чистых культур, мкг N

2 (сутки) сосуд

Agrobacterium sp

О, 198

Erwinia sp

0,279

1,400

О, 186

7,93

6,95

28,93

Составитель Л.Чибисова

Редактор И.Тимонина Техред Л.Олейник

Корректор Е.Рошко

Заказ 7925/1 Тираж 430

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Arthrobacter sp

Corynebacterium sp

Azospirillum sp

Aquaspirillum sp

Azospirillum sp

0,857

0,095

42,000

22,30

20,23

56,67

15,86