Способ определения концентрации ингибиторов биологической активности
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
„SU(„,. (504 2 1 26
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPbITHA
I
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н АВТОРСКОМЪ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Р (21) 3652917/23-26ч
:(22) 11,10.83 (46) 15.01.86. Бюл. Р 2 (71) Институт биофизики СО АН СССР и Красноярский государственный меди,цинский институт (72) В, А. Кратасюк, P. И. Кручинивши
А. М. Кузнецов, А. М. Фиш и В. Д. Макаренко (53) 543.9:543.4.42(088.8) (56) Промышленная аллергия и токсикоз (платиноз) . Под редакцией проф.
М(. Ж. Рапопорта. Красноярск, 1976, с. 73-81.
Авторское свидетельство CCCP
У 865904, кл. С l2 С 1/26, 1980. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ИНГИБИТОРОВ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ, включающий обработку анализируемой пробы реакционной смесью, содержащей альдегид и НАДН в насыщающих концентрациях, люциферазу, НАНД: ФМН-оксидоредуктазу и ФМН, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и чувствительности определения концентраций соединений металлов платиновой группы, реакционная смесь содержит
ФМН в количестве (0,5-0,55) ; 10 М, а концентрацию определяют по вели,чине интенсивности свечения, добтитаемой через 10-30 с.
Таблица 1 ю отн.ед °
Тю отн.ед.
Ъ отн. ед °
Концентрация хлористоплатиноводородной кислоты, %
30 36
30 36
26 30
18 24
10 11
5,2 10
5 2.10
5,2 10
0,00 1
0,0021
0,0052
8 8,5
t 12 йзобретение относится к исследованию материалов химическими способами, в частности с помощью ферментных реакций, и может быть использо-вано для определения концентрации ингибиторов, в частности металлов платиновой группы, являющихся компо- нентами сточных вод и воздушной среды промышленных предприятий, оседающих на одежду и кожу работающих.
Цель изобретения — повышение точности и.чувствительности определения концентраций соединений металлов платиновой группы..
Пример. Для определения концентрации платиноидов в растворе строят калибровочнyM).КрНВ, Для этого используют частично очищенные препараты люциферазы, содержащие активность НАДН:ФМН-оксидоредуктазы.
Приготавливают раствор, содержащий IOQ мкл препарата люциферазы и
НАДН:ФМН-оксидоредуктазы (3,75 мкг белка в 1 мл препарата), 50 мкл
0,00057.-ного раствора тетрадеканаля, 50 мкл 5,4 10 M раствора НАДН. Измеряют величину интенсивности свечения> достигнутую через 20 с без вещества (Е,) и при внесении в реакционную смесь разных концентраций хлористоплатиноводородной кислоты.
Результаты представлены в табл ° 1, 04639 2
По этим данным строят калибровочную кривую. При добавлении в реакционную смесь неизвестного количества хлористоплатиноводородной кислоты получают Х =14, сравнивают измеренные величины с калибровочной кривой и определяют, что концентрация хлористоплатиноводородной кислоты в растворе равна 7,3 10 X.
10 Чувствительность анализа—
-5
5,2 10 7-ного раствора хлористоплатиноводородной кислоты, что соответствует 0 5 ° 10, M или 2,6 ° 10 r, точность определения +2,57..
Примеры реализации способа для граничных значений времени, равных
10 и 30 с, приведены в табл. 1 и 3.
Примеры реализации способа определения концентрации хлористоплати2б новодородной кислоты при разном содержании ФМН в реакционной смеси приведены в табл. 2 и 4.
При увеличении содержания ФМН в реакционной смеси до 5,4 10 М и
5,4 ° 10 M чувствительность анализа хлористоводородной кислоты меньше
-0,00017 и 0,002Х соответственно.
При уменьшении содержания ФМН в реакционной смеси становится. невозможным определение концентрации ингибиторов, так как интенсивность свечения становится малой, 1204639
Та блица 2
Концентрация хлористоплатиноводородной кислоты, Х
5,4" 10 М ФИН
4 1(T Ч ФМН
10
5,2-10
10
5,2- 10
Таблица 3
Концентрация
ФМН, M
Т!о Т20 Тю ТФ5
40 16 25 32 37 38
40 12 24 30 36 37
46 11 22 27 32 36
72 6 14 18 21 23
0,5,"10,0,5 10
103 5 10 13
15 16
Т а б л и ц а 4
Концентрация
ФМН; М
0,3 10 M
0,3 ° 10 И
0,25" 10
0,3 10 М
+5%
+5%
+5X
0,5 "10 M
1-10 М
0,5 10 M
0,5 10
+2,5Х
+2, фд
-6
0,6 "10 И .
0,55"10
+2,5+
1 10 М
0,5 10
+2,5X .
ВНИИПИ Заказ 8493/26 Тираж 524 Подписное
Филиал ППП "Патент", r.Ужгород, ул.Проектная, 4
0,25 10
0,5 10
0,55 10
0,5 10 М
+7,5Х
0,6 ° 10 M
+7,2%
+2,5Х
1 "10 M
+2,5%
0,5 ° 10 М
+2j5X
0,6 "10 M
0,6 10 М
+2,5%
1-10 М
+2,5%
+2,5Х
1,2 ° 10 М
+2,5Х
