Способ идентификации @ @

 

СПОСОБ ИДЕНтаФИКАЦИИ STAPHYLOCOCCUS AUREUS путем прйго овления мазков микробной культуры, фиксации , обработки гетерологйчной люминесцирующей сьтоороткой и определением белка А при люминесцентной микроскопии клеток, о т л и ч а ющ и и Ё я тем, что, с. целью повышения точности способа, мазки культуры стафилококков обрабатывАют гетерологйчной ослиной.сывороткой при рН 9,0-9,4.

С01ОЭ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3470007/28-13 (22) 12.07.82 (46) 23.11.85. Бюл. Р 43 (71) Ленинградский санитарно-гигиенический медицинский институт (72) О.И.Пересыпкин (53) 615.373(088.8) (56) Савицкая К.И.; Солодилова О.Е.

Определение клеточносвязанного,протеина А в стаАилококках методами иммунофлюоресценции. Лабораторное дело, 1981, Р 1, с. 43-45.

„.,SU„„.1 192830 . А (54) (57) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ STAPHYLOCOCCUS AUREUS путем приготовления мазков микробной культуры, фиксации, обработки гетерологичиой люминесцирующей сывороткой и определением белка А при люминесцентиой микроскопии клеток, о т л и.ч я юшийся тем, что, с целью ловыщения точности способа, мазки культуры стафилококков обрабатывают гетерологичной ослиной. сывороткой при рН 9,0-9,4.. 1192830

Изобретение относится к микробиологии, а именно к методам идентификации стафилококков, и может быть применено в диагностических целях.

Целью изобретения является повышение точности идентификации .St.

aureus по белку А.Ф

Пример 1. Идейтификация

St. aureus по белку А в мазках чистых культур, выращенных на плотных средах. Из материала колонии, выращенной на питательном агаре, готовят извесь культуры в 0,15 М растворе хж р!!стого натрия плотность!о

200 млн микробных тел в 1 мл по опти !ос.".о!!y стандарту мутности. Полученную взвесь наносят на предметное стекло в виде тонкого мазка. Мазок высушивают при 18 С. Высушенный мазок фиксируют погружением в ацеГ

0 тон на 15 мин и высушивают при 18 С.

Сухую ампулированную люминесцентную ослиную сыворотку (коммерческий биопрепарат) разводят до рабочего титра согласно указанному. на этикетке ампулы титру конкретной серии биопрепарата 0,05 М раствором тетрабо1>>!та натрия (Na, В„. О 10Н, О), пригото>зленным на 0,15 М растворе хлористого натрия. рН полученной разведенной ос!!иной люминесцентной сыворотки 9,2.

Получе>Бой разведенной сывороткой обрабатывают маэки культуры при о, рН 9,2 во влажной камере при 37 С в течение 20 мин.

Окра!пен!!»е мазки промывают в течение 10 мин трехкратно меняемыми порциями О,I5 II раствора хлористого натрия, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают при 18 С.

На высушенный мазок наносят каплю не люминесцирующего иммерсионного масла и микроскопируют мазок в люминесцентном микроскопе с объективом 90 и окуляром 7 . БГ. aureus к >! идентифицируют по специфической люмннесце!ьции клеток в виде яркой, изумрудной, сверкающей люминесценции по ле>ерии клеток с темным центром, интенсивностью 4 креста (++++), Пример 2, Идентификация

St. aureus по белку А в мазках чистых культур, выращенных в жидких питательных средах. Каплю культуры, выращенной на мясо-пептонном бульо50

55 %10Í О), приготовленным-на 0,15 М

25, 30

45 не, наносят в виде топкого мазка на предметное стекло. б, Мазок высушивают при 18 С. Высушенный мазок фихсируют .погружением в ацетон на 15 мин и снова высуши- вают при 18 С.

Сухую ампулированную люминесцентную ослиную сыворотку (коммерческий биопрепарат) разводят до рабочего титра согласно указанному на этикетке ампулы титру конкретной серии биопрепарата 0,05 М раствором тетрабората натрия (На В!,0 10Н О), приготовленным на 0,15 М растворе хлористого натрия. рН полученной разведенной ослиной люминесцентной сыноротки 9,2.

Полученной разведенной сывороткой обрабатывают мазки кУльтуры при рН 9,2 во влажной камере при 37 С в течение 20 мин.

Окрашенные мазки промывают в течение 10 мин трехкратно меняемыми порциями 0,.15 М раствора хлористого натрия, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают при 18 С, На высушенный мазок наносят каплю не люминесцирующего иммерсионного масла и микроскопируют мазок в люминесцентном микроскопе с обьектих l! вом 90 и окуляром 7 . St. aureus идентифицируют по специфической люминесценции клеток в виде яркой, изумрудной, сверкающей !!!оминесценции по периферии клеток с темным центром, интенсивностью 4 креста (++++), Пример 3. Идентификация

St.aureus по белку А в мазках из материалов от больных, Из материала от больных в виде гноя ран, полостей делают тонкий мазок на предметном

0 стекле. Мазок высушивают при 18 С..

Высушенный мазок фиксируют погружением в ацетон на 15 мин и снова высушивают при 18 С.

Сухую ампулированную люминесцентную .ослиную сыворотку (коммерческий биопрепарат) раэводяг. до рабо, чего титра согласно указанному на этикетке ампулы титру конкретной серии бионрепаратa 0,05 М раствором тетрабората натрия (Na В О " растворе хлористого натрия. рН полученной. разведенной ослиной люминесцентной сыворотки 9,2, 1192830

Составитель Г.Крюкова

Редактор Т.Кугрышева Техред С.Мигунова Корректор В.Синицкая

Заказ 8119 Тираж 721 Подписное

BHHHIIH Государственного. комитета СССР

IIo делам изобретений и.открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Полученной. разведенной сывороткой обрабатывают мазки материала от больных при рН 9,2 во влажной камере при 37,С в течение 20 мин, Окрашенные мазки промывают в течение 10 мин .трехкратно меняемыми порциями. 0,15 М раствора хлористого натрия, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают при 18 С.

На высушенный мазок наносят каплю не люминесцирующего.иммерсионного масла и микроскопируют мазок в люминесцентном микроскопе с объективом 90" и окуляром 7". St.aureus идентифицируют по специфической люминесценции клеток в виде яркой, изумрудной, сверкающей люминесценции по периферии клеток с темным центром, интенсивностью 4 креста (++++).

В результате использования способа идентификации. St.aureus по белку А при рН 9,0-9,4 с помощью гетерологичной ослиной люминесцирующей сыворотки повышается точность . идентификации St. aureus до 99,6Х.

Предлагаемым способом-и известным изучено 1. 180. культур микроорганизмов разных видов и таксономи10 ческих групп.

При использовании известного способа удалось идентифицировать только 22,9Х культур вида St.aureus.

При использовании предлагаемого

15 способа идентифицируется 99,6Х культур St. aureus, а также незначительное число St.epidermidis (2,9Х культур). Микроорганизмы прочих видов и физиологических групп, 20 не обладая протеином А, не идентифицируются с помощью предлагаемого способа .