Способ выделения компонентов из пыльцы покрытосеменных растений

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1145954 A ц51) А 01 Ci 7 00; А 01 Н 1 04 (;)ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОМЪГ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

4 (21) 3613566/30-15 (22) 14.04.83 (46) 23.03.85. Бюл. № 11 (72) П. Д. Соложенцев

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (71) Всесоюзный ордена Трудового Красного

Знамени научно-исследовательский институт кормов им. В. P. Вильямса (53) 631.521 (088.8) (56) Bajaj Y. Р. >. Protoplast culture

and production of haplaids. Iп: Form, Structure and Function in Plants. В. М. Johri

Commem. Vol. рр. 107 — 115. Meerut: Sarita Prakashan, 1975. (54(57) 1. СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ КОМПОНЕНТОВ ИЗ ПЫЛЬЦЫ ПОКРЫТОСЕМЕННЫХ РАСТЕНИЙ воздействием на зре-, лую пыльцу гипотоническим раствором, отличающийся тем, что, с целью повышения процента и ускорения процесса выделения живых неповрежденных генеративных клеток, на пыльцу воздействуют раствором углевода, осмотичес кое давление которого составляет 10 — 500 0 осмотичности раствора изотонического для взятой пыльцы.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем. что плотность пыльцевых зерен составляет не более 200 тыс. на 1 мл раствора углевода.

1145954

Время инкубации, ч

Выдел е ни е живых неПлотность

Концентрация осмо тика в гипотоничесВещество, используемое в качестве пыльцевых зерен в

1 мл гипоВид растений поврежденных генеосмотика в гипотоническом растворе тонического раствора, тыс, ративных клеток, %ком растворе, X

Люцерна изменчивая (Medicago varia

Магс,) (2n=32) 50-60

10-15

150

Д-сорбит

Клевер луговой (Trifolium

prarense 1 .) (2п=14) Д-сорбит

Д-глюкоза

Сахароза

35-45

150

3-12

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в исследованиях по получению в селекционных целях гаплоидных растений в культуре изолированных генеративных клеток in vitro, для получения из этих клеток протопластов, а также для улучшения мужского гаметофита растений.

Цель изобретения — повышение процента и ускорения процесса выделения живых неповрежденных генеративных клеток.

Пример. Проводят выделение генеративных клеток из пыльцы растений люцерны изменчивой сорта Зайкевича. Зрелую пыльцу помещают в растворы углевода с различным осмотическим давлением, устанавлива15 ют изотонический для нее, в котором не происходит ее изливание и не отмечается плазмолиз у пыльцевых зерен. Затем готовят раствор углвода (например, D-сорбита) с величиной осмотического давления по данному способу (например, 10% íый раствор с осмотическим давлением 14,7% от изотонического). В чашки Петри диаметром 6 см наливают по 2 мл 10%-ного раствора D-сорбита. Шпателем собирают пыльцу с цветков растений и стряхивают в чашки Петри. Перемешиванием раствора достигают равномерного распределения пыльцевых зерен. в его объеме. Чашки оставляют на 2 ч при комнатной температуре. В течение этого времени в йих происходит изливание пыльцы и выделение генератив. ных клеток. Через 2 ч выделившиеся генеративные клетки отделяют с помощью центрифугирования от других продуктов выделения — оболочек и веществ цитоплазмы вегетативных клеток излившихся пыльцевых зерен, а также от неизлившейся пыльг, цы. После этого генеративные клетки используют по назначению. Для определения живых выделенных генеративных клеток применяют витальный краситель-синька Эванса в

0,5%- но м растворе. ф ертвые клетки этим красителем окрашиваются в синий цвет, а живые не окрашиваются. Процент поврежденных генеративных клеток определяется подсчетом под микроскопом генеративных клеток с поврежденной оболочкой.

С использованием этого способа достигнуто массовое выделение живых неповрежденных генеративных клеток у некоторых видов растений.

В таблице представлены результаты выделения генеративных клеток из растений.

В результате изучения выделения генеративных клеток у данных видов растений установлено, что максимальное количество живых неповрежденных клеток выделяется в гипотоническом растворе углевода, с осмотическим давлением в интервале 10 — 50% осмотичности раствора изотонического для их vûëüöû. Установлено, что 95% от обшего количества пыльцы, изливающейся в гипотоническом растворе за время инкубации в нем, приходятся на первые 2-3 ч. Определено, что при плотности пыльцы свыше 200 тыс. на

1 мл гипотонического раствора су цественно уменьшается количество излившейся пыль. цы. Поэтому, если за счет неравномерного распределения пыльцевых зерен в объеме гипотонического раствора резко увеличится плотность в отдельных его частях, вследствие этого произойдет уменьшение процента излившейся пыльцы и, соответственно процента выделения генеративных клеток. Установлено, что температура гипотонического раствора 20 — 30 С наиболее оптимальна для выделения генеративных клеток из пыльцы.

1145954

Продолжение таблицы

5 6

30-40

4-9

100

Вика посевная Д-сорбит (Vicia sativa L) Сахароза

6-10

30-40

150

Д-сорбит

Дурман безвредный (Datura. innoxia Mi11) Сост а в и тел ь Е. Ш кр ад юк

Редактор Н. Пушиенкова Техред И. Верес Корректор Г. Решетник

Заказ 1216/1 Тираж 743 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )K — 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4