Среда для разбавления и замораживания спермы хряков

 

1. СРЕДА ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ И ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ ХРЯКОВ, включающая источник углерода - глюкозу, цитрат натрия 5,5-водный, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный , трис(оксиметил)аминометан, сульфат аммония, глицерин и липидньй компонент , отличающаяся тем, что, с целью лучшего сохранения выживаемости и оплодотворяющей способности сперматозоидов при замораживании , в качестве липидного компонента среда содержит водный экстракт подсолнечного масла, а в качестве источника углерода дополнительно содержит сорбит при следукяцем соотношении компонентов, мас.%: Сорбит2,5-3,5 Глюкоза0,6-0,8 Цитрат натрия 5,5-водный 0,2-0,3 Сульфат аммония 0,2-0,3 Этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный 0,3-0,4 Трис(оксиметил) аминометан 0,04-0,06 (Л Глицерин 3,0-4,0 Водный экстракт подсолнечного маслаДо 100 2. Среда по п. 1, отличающаяся тем, что водный экстракт подсолнечного масла содержит подсол с нечное масло и воду в соотношении 0,4-0,6:1. iu

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (39) (Н) 4(s)) А, 61 D 7/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3676199/30 — 15 (22) 27.09.83 (46) 07.03.85. Бюл. У 9 (72) В.А.Наук и А.И.Гуськов (71) Институт зоологии и физиологии

АН Молдавской ССР (53) 636.082.453.5(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

N 549148, кл. А 61 D 7/02, 1977.

2. Авторское свидетельство СССР

У 626773, кл. A 61 D 7/02, 1978.

3. Кононов В.П., Голышев Н.А., Хачатуридзе Э.А. Среда для замораживания спермы хряков. — "Свиноводство",1975, Р 11, с. 25-26 (прототип). (54)(57) 1. СРЕДА ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ .

И ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ ХРЯКОВ, включающая источник углерода — глюкозу, цитрат натрия 5,5-водный, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, трис(оксиметил)аминометан, сульфат аммония, глицерин и липидный компонент, отличающаяся тем, что, с целью лучшего сохранения выживаемости и оплодотворяющей способности сперматозоидов при замораживании, в качестве липидного компонента среда содержит водный экс" тракт подсолнечного масла, а в качестве источника углерода дополнительно содержит сорбит при следующем соотношении компонентов, мас.X:

Сорбит 2,5-3,5

Глюкоза 0,6-0,8

Цитрат натрия

5,5-водный 0,2-0,3

Сульфат аммония 0,2-0,3

Этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный 0,3-0,4

Трис(оксиметил) аминометан 0,04-0,06

Глицерин 3,0-4,0

Водный экстракт подсолнечного масла До 100

2. Среда по. п. 1, о т л и ч а ющ а я с я тем, что водный экстракт подсолнечного масла содержит подсолнечное масло и воду в соотношении

0,4-0,6:1.

1143413

Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, в частности к синтетическим средам для разбавления и замораживания семени преимущественно хряков.

Известны среды для разбавления и замораживания семени животных, включающие дисахара„ глюкозу, окись магния, окись кальция, этилендиамин- 10 тетраацетат двунатриевый двуводный, лимоннокислый аммоний, глицерин, желток куриного яйца и воду (3) .

Недостатком таких сред является отсутствие антиоксидантов, предотвра-15 щающих развитие в сперматозоидах перекисного окисления липидов.

Известна также среда для разбавления и замораживания семени сельскозозяйственных животных, например 2п хряков, содержащая дисахарид, моносахарид, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, окись кальция, окись магния, аммоний лимоннокислый, глицерин, желток, воду и ан- 25 тиоксиданты (2,б-дибутил-п-крезол либо 2-(и 3)-бутил-4-гидрооксианизол) (2) .

Недостатком указанной среды является то, что входящие в ее состав антиоксиданты недостаточно эффективны для применения в составе криозащитных сред из-за нерастворимости в воде и дефицитности.

Известна среда для разбавления

5 и замораживания спермы хряков, включающая источник углерода — глюкозу, цитрат, натрия 5,5-водный, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, трис(оксиметил)аминометан, суль. фат аммония, глицерин и липидный компонент j3) .

Недостатком известной среды является то, что она не обеспечивает устойчивость мембран сперматозоидов при замораживании и длительном хранении семени вследствие отрицательного влияния желтка, а также отсутствия природных антиоксидантов, предотвращающих вредные последствия перекисного окисления липидов. Желток к тому же является потенциальным носителем паталогии и отличается непостоянным химическим составом, что в свою очередь сказывается на стабильности получаемых результатов.

Морфофизиологические показатели замороженно-оттаянного семени в значительной степени связаны со ероком хранения яиц. Кроме того, желток куриного яйца повышает кислотность среды, что вызывает необходимость применения в составе сред дополнительных буферных систем и соответственно дополнительных затрат.

Введение в состав среды дефицитных дорогостоящих компонентов — желтка куриного яйца и фруктозы делает среду дорогой и труднодоступной.

Целью изобретения является улучшение сохранения выживаемости и оплодотворяющей способности сперматозоидов при замораживании..

0,3-0.,4

Поставленная цель достигается тем, что среда для разбавления и замораживания спермы хряков, включаю. щая источник углерода — глюкозу, цитрат натрия 5,5-водный, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, трис(оксиметил) аминометан, сульфат аммония, глицерин и ли идный компонент, содержит в качестве липидного компонента водный экстракт подсолнечного масла, а в качестве источника углерода дополнительно содержит сорбит при следующем соотношении компонентов, мас. :

Сорбит 2, 5-3,5

Глюкоза 0,6-0,8

Цитрат натрия

5 5-водный 0,2-0,3

Сульфат аммония 0,2-0„3

Этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный

Трис(оксиметил) аминометан 0,04-0„06

Глицерин 3,0-4„0

Водный экстракт подсолнечного масла До 100

Причем водный экстракт подсолнечного масла содержит подсолнечное масло и воду в соотношении 0,4-0,6:1.

Введение в среду водного экстракта подсолнечного масла вместо желтка куриного яйца обуславливает присутствие в растворе ненасыщенных жирных кислот (подсолнечное масло содержит

52-64 . линолевой и 2-5 линоленовой кислот)., которые способствуют увеличению выживаемости сперматозоидов и в конечном счете повышают оплодотворяющую способность семени.

Кроме того, экстракт подсолнечного масла богат природными антиоксиданта-.

13 4 кой зкономической эффективности.

Пример. Среду для разбавления и замораживания семени сельскохозяйственных животных готовят следующим образом.

В 1 л водного экстракта подсолнечного масла при комнатной температуре растворяют соответствующее количество компонентов среды (табл.1) для экспериментов взято 5 составов (сред). Затем среду доводят до температуры семени, предварительно выдержанного. в течение одного часа прн комнатной температуре, разбавляют семя средой в соотношении 1:1, выдерживают при +15оС в течение 4 ч, затем охлаждают до +4 С в течение о часа и замораживают при -100 С в пас рах жидкого азота на фторопластовой пластине, причем оттаивание ведут при +60 С.

11434

Таблица 1

Состав среды, мас.%

Трис(оксиметил) аминоГлице одный экстракт рин одсолнечного асла

ЭДТА натри евая соль

Цитрат Сульфат натрия аммония

Вариан Сорты бит

Глюко за метан

1 2,0 0,35 0,15 0,15 0,2 2,5, 2 2,5 0,6 0,2 0,2 0,3 3,0

3 3,0 0,7 0,25 0,25 0,35 3,5

4 3,5 0,8 0,3 0,3 0,4 4,0

5 4,0 1,0 0,4 -0,4 0,5 0,07 5,0

До 100

До 100

До 100

До 100

0,003

0,04

0,05

0,06

До 100

Для получения экстракта подсолнеч. ного масла последнее (ГОСТ 1129-73) 40 встряхивают в течение 1 ч с дистиллированной водой в соотношениях, представленных в табл. 2, затем центрифугируют при 1,5-2,0 тыс. об/мин в течение 15-20 мин, либо оставляют в сосуде экстрагирования на 1 ч для разделения слоев, верхний слой отсасывают водоструйным насосом, а нижний используют для приготовления син-

I тетической среды.

Т а б л и ц а 2

Продолжение табл. 2

Количество, ч.

0,5

0,6

Количество, ч.

0,25

0,4 ми (51 мг% альфа-токоферола) и следовательно, предотвращает вредные последствия перекисного окисления липи-: дов, что в свою очередь ведет к стабилизации мембран и сохранению целостности акросомы сперматозоидов при замораживании-оттаивании семени.

Снижение утечки ферментов в плазму . также ведет к повышению оплодотворяющей способности сперматозоидов ° 10

Эффективность от использования предлагаемой среды достигается за счет высоких криозащитных свойств ненасыщенных жирных кислот и присутствия природных антиоксидантов. 15

Сорбит значительно снижает себестоимость предлагаемой среды по сравнению с известной, что наряду со снижением себестоимости среды за счет применения водного экстракта подсол- 20 нечного масла помогает достичь высоПодсолнечного масла воды

Подсолнечного масла воды

Эффективность применения разработанной среды оценивают по подвижнос-. ти, выживаемости при 37 С, проценту

О интактных акросом и оплодотворяющей способности сперматозоидов после замораживания-оттаивания семени.

Результаты испытания пяти вариантов сред представлены в табл. 3 и 4.

K о

4с л ь

CO О

td

Ы

В 1

С0 И

Е

O л

t(A

Е

v о

2 о а

СГЪ л л ь

Н и л

Ch

О ) л

О1 л

О о

I л а0

С4 о

34с

Ф

С»4 л

C)

+I

Ю О

О i

С 4 л

Ю

+1

С4 л

Е (0

С 4 л ь

+I

СС л л

С»4 ь

+I ь л

Зф .! л

Ю н ь

00 т л ь Н

CO л О

I

tf о

И ж о

Е Р

О Е

Ф Ж ш о

С0 Ы

1 Р

1

1

3\»

»л

I Я

1 Р. о

1 3

I Е

1 Х

С0 ж

1

1

1

1

I IC 1 ! Ж !

I Rl

I а!

Е 1 о

1

1 Ж

1 и 1

1 е 1

1143413

00 ф

С»! О л л

+1 +1

00 л A

Ю

С 4 О

Ф

С»4 С 4 л л

Ю Cb .Н +1

Ю <Ч л л

СУ

МС

Ф .ф л ь ь, +1 -Н

O C0 л

С»4 С ) 4с

Ф б < 1 л ь ю н н ь а л а . л

Эф ф ъ4

00 43

»l ° I

+ I +I О О л A

ОЪ U1

Ifl СЧ

Ф

Ъ(М Ф

» (\

СЧ С 4 л л

Ю Ю

+! Н

Л Ю л л и

Ф ф ф

С» ) С»4 л ю ь

+ I .Н

СГ1 СЧ л л

СЧ ф ф л л ь ь н .н

Щ л л л Д л ь л

+I I

C0 I л О 1

Сл> 1 аь ьюь л л л ьюь ч l l.

Р Р Р л ю ф з(с 1 Ф зф

1143413 о

44

° Ф

° 1 со

«0

00 «О сч еч an и ° 1

+I Н +I о

СЧ «Ъ О

00 «О а

+! +1

1- о х v ъ Ф ф о !

» C«. о

«:!

«!« I а и

° о\

«ъ о ь я

-u е !« о а«

В и«««иЪ х е цvx

° ° сч (ч ФЧ я.я я а Я Я

«Л ЪО о

v 1

«I«1 р х ! х о

«о Р 1!

Ъ

С4 а ь

»« » ия° и» « л иь «а о о о

+! +I .Н

О Co an е а

«»I C»«а У ф! !

«« I х 1

z „l и о

t0 !

«Х о о х и

««Ъ «Ч

Р ° 1

° «! ФЧ

I а !

10 I

1-v!к

v o

«»Ъ

° ° ° а а а и а

«» а а а о е х 6 111 ,! о с l а

o g o о л о

° » а а

° «h! о

Ф! а 1 х I

1 а

1/Ъ

СЧ»2 ««Ъ а и\ ° 1

o o o о о а я

° Ф «бЪ

e o

A O а

CV «иЪ « иЪ х о

«: х х ае э ! 1-«Х Х!

1 ф

1 Х aal ! Р

1 Ф Ф ф ! 1 I I

О «

CV С»Ъ «»Ъ и ° и Я

o o

««Ъ а ь о о х Ф I л«» д!

Ю о

° n «/Ъ

° Си«СЧ

Ф Я Я о о о

МЪ «ГЪ

« 1 CLI

Ии а а о о о ф о

Фа) а а о о

00 о

««Ъ «О « » а ° 1 Я о о о о х

Ц о

И х

Х

5 о о ! х

I ! ! !

i ! о е

1 «:(М и«« оа1-! ао с« -х

1 1 а ц «. l

° аооф —: — "- пйхz х а

1 «а«

I х I ! -" — ! о

Я

1 1

1 Х !

3 !

1, an co о о о о о а а I1 а о о о о о

1143413

Составитель M.Áåëoóñoâà

Редактор О.Черниченко Техред С.Легеза Корректор В.Бутяга

Заказ 795/5 Тираж 722 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãoðîä, ул.Проектная, 4

Оплодотворяемость свиноматок при использовании семени, замороженного в предлагаемом составе среды по сравнению с известным, повышается на 31,6Х, Ожидаемый экономический 5 э49ект от использования предлагаемой среды составляет Я 58 тыс. руб на 1000 свиноматок

Применяемые в предлагаемой среде компоненты являются дешевыми и неде4ицитными. Это позволяет получить дополнительный экономический э4@ект в сумме 245 руб. на 1000 свинбматок

sa счет сахаров и экстракта.

Применение водного экстракта подсолнечного масла в составе синтетических сред для разбавления и замо" раживания семени сельскохозяйственных животных позволяет заранее проверять пригодность больших партий масла к применению, что исключает нежелательные случайности в работе, имеющие место при использовании желтка куриного яйца.