Штамм @ @ свбк 141 @ -универсальный реципиент для генетической идентификации культур @ @ @ @

 

Штамм Pseudomonas pseudomallei СВБК 141 pur (Музей живых культур Института Микроб) универсальный реципиент для генетической идентификации культур Pseudomonas pseudoraallei и Pseudomonas mallei.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

WUIVNOI

РЕСПУБЛИК

69) (11) ОПИСАНИЕ ИЭОБРЕТЕНИ

К ABTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

FlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3664666/28-13 (22) 24.11.83 (46) 30.12.84. Бюл. М 48 (72) А.Л.Буланцев и В.Т.Кучеряева (71) Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт (53) 576.8.093. 1(088.8) (56) 1. Патент США Р 4038143, кл. 195-100, опублик. 26.07.77.

2. Томов А.Ц., Цветкова Е., Милушева М. Лизогения у рода Malleomyces. - "Микробиология", 1970, У 8, с, 102-105. зсю С 12 N 1500 С 12 104 (54) ШТАММ PSEUDOMONAS PSEUDOMALLEI

СВБК 141 PUR — УНИВЕРСАЛЬНЫЙ РЕЦИПИЕНТ ДЛЯ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ КУЛЬТУР PSEUDÎMÎNAS PSEUDOMALLEI И

PSEUDOMONAS MALLEI (57) Штамм Pseudomonas pseudomallei

СВБК 141 pur (Музей живых культур

Института "Микроб" ) универсальный реципиент для генетической идентификации культур Pseudomonas pseudomalIei и Pseudomonas mallei.

1131902

Изобретение относится к микробио- . логии и может быть использовано для идентификации возбудителя мелиоидоза и сапа.

Известен комплект штаммов микроорганизмов для генетической индикации миирооргаииамов (1) .

Однако известный .комплект штаммов .не содержит индикаторного штамма на

Pseudomonas. 1О

Известен штамм Pseudomonas pseudomallei С 141 — прототроф (2f .

Однако данный штамм не может быть использован в трансформации в качестве реципиента ввиду отсутствия се- 15 лективного маркера.

Целью изобретения является подбор штамма универсального реципиента для генетической идентификации культур Pseudomonas pseudomonallei u Zp

Pseudomonas mallei от других видов бактерий.

Поставленная цель достигается с помощью штамма Pseudomonas pseudomallei СВБК 141 pur. 25

Штамм Pseudomonas pseudomallei

СВБК 14.1 pur (коллекция Музея живых культур Института "Микроб", коллекционный номер СВБК l41 pur) получен методом селекционного отбора и ха- 30 рактеризуется следующими признаками.

Культурально †морфологическ признаки. Клетки прямые, палочковидные.

Величина клеток двухсуточной культуры бактерий, выросших на мясопептонном глицериновом агаре (0,5-0,8) х (3,0-5,0) м.к. Подвижные, лофотрихи, спор и капсул не образуют, грамотрицательные,.

На мясопептонном гл .периновом бульоне через 1-2 суток растет диффузно, образуя придонный осадок и на поверхности нежную пленку.

Физиолого-биохимические признаки.

Факультативный аназроб ° Оптимум роста . 45 при 32-34ЗС. На средах с глюкозой, лак тозой, мальтозой, ксилозой осуществляет окисление без ферментации со сдвигом рН в кислую сторону. Лизин не декарбоксилирует, аргинин деарбоксилирует активно через 24 часа со сдвигом рН в щелочную сторону. Гидролизует желатин. Индол и сероводород не образует. Гемолизирует эритроциты барана на четвертые сутки.

Штамм Pseudomonas pseudomallei

СВБК 141 pur — ауксотрофен по гипоксантину. Обладает естественной. компенентностью. В тестах трансформации по маркеру ауксотрофности с хлороформированными бульонными культурами (хлороформенными лизатами) диких штаммов PseudoEEEonas pseudomallei и .Pseudomonas mallei дает высо/ кий уровень частоты трансформации авирулентен.

Пример . С целью проверки возможности генетической идентификации культур P.pseudomallei u

P mallei от других видов бактерий с помощью универсального реципиента

Pseudomonas pseudomal1ei СВБК 141

pur испытаниям подвергают 15 видов

Pseudomonas (по одному штамму каждо.— го вида) 5 штаммов E.coli 2 штамма

Pseudomonas, 2 штамма Shigello, 1 штамм Staphylococcus anreus, 2 штамма I.pestis, 5 штаммов р.mallei u

5 штаммов Р. pseudomallei (всего 37 штаммов-доноров), а также универсальный реципиент Pseudjmonas pseudomallei СВБК 141 pur.

До проверки все испытуемые штаммы, кроме универсального реципиента, были зашифрованы произвольными цифровыми обозначениями. Кроме зтого, были приготовлены и зашифрованы три культуральные смеси..

Исследуемые культуры бактерий высевают на Z-бульон (5 мл) и культивировали при 34 С в течение 48 ч. 3атем бульонные двухсуточные культуры бактерий хлороформируют (т.е. змульгируют с двумя мл хлороформа до получения жидкости молочного цвета).. Хлораформированные культуры бактерий на

2 ч помещают в термостат, а затем р

gIepeEIocHT в холодильник (для удале= ния паров хлороформа и его полного осаждения). Хлороформенные лизаты проверяют на стерильность: высевают материал по О, 1 мл на поверхность Zагара.

Идентификацию культур бактерий проводят следующим образом. Готовят смеси реципиантной культуры с исследуемым лизатом в равных объемах (обычно по 1 мл) и высевают их йа минимальную среду по О, 1 мл.

Чашки с -посевами инкубируют 45 суток. На чашках с посевами универсального реципиента просматривается фоновый рост, образованный ауксотрофными клетками и наблюдается появление колоний прототрофных клеток (рекомбинантов), которые появляют3 1131902 4 ся в результате генетической тра»сфор- Использование штамма Pseudomonas маци» при совпадении по гомологии до- pseudomallei СВБК 141 pur универсаль, норного материала (ДИК в хлорофор- ного реципиента при применении метоменных лизатах) с рецнпиентнымн куль- да генетической трансформации позвотурами. ляет отднфференцнровать культуры

Использование штамма СББК 141 pur Pseudomonas рзеидоша11е1 и Pseudomo-. позволяет выявить 100Х.идентифицн- nas mallei от других видов бак« руемых культур бактерий. терий.. Составитель И.Красильников

Редактор А Ревик Техред И.Пароцай Корректор A.Îáðó÷að

Заказ 97!9/21 Тираи 52.1 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР.по делам изобретений и открытий!

13035, Москва, И-35, Раувская наб., д. 4/5

Филиал ППП"Патент", г. Мкгород, ул. Проектная, 4