Способ определения активности гемосенситинов

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ГЕМОСЕНСИТИНОВ одинаковой специфичности , включающий измерение антителосвяг .зывающей или антигенсвязывающей актив .пости сенситина, сенсибилизацию эритроцитов и расчет начальной скорости сенсибилизации, отличающийс я тем, что, с целью повышения точности способа, сенсибилизацию зритроцитов осуществляют равнозффективными по связыванию дозами сенситина .

сОюз сОВетсних

Wg °

РЕСПУБЛИК ае 01) зш А 61 В 10/00

ГОсудАРстзенный нОмитет сссР по делдм изоьРеткний и отнРытий

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСНОММ ЮИДЮВЪСТВУ (21) 3578172/28-13 (22) 10.02.83 (46) 15.12.84. Бюл. Ó 46 (72) Б.В.Каральник (71) Киевский научно-исследователь . . ский институт эпидемиологии, и инфекционных болезней им.Л.В. Громашевского (53) 615.373(088.8) (56) 1.,Каральник Б.В. "Эритроцитар;ные диагностикумы". М., "Медицина", 1976, 14-74. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ AKTHBHOCTH

ГЕМОСЕНСИТИНОВ одинаковой специфичности, включающий измерение антителосвя-. эывающей или антигенсвязывающей активности сенситина, сенсибилизацию- эритроцитов и расчет начальной скорости сенсибилиэации, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, сенсибилизацию эритроцитов осуществляют равноэффективными по связыванию дозами сенситина.

1128914 г

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к приготовлению иммунодиагностических препаратов.

Известен способ определения активности гемосенситинов одинаковой

5 специфичности, по величине оптимальной гемосенситивности дозы препарата, или по величине максимального литра реакции пассивной гемаглотинации

-РПГА j1) .

Однако, известный способ недостаточно точен, поскольку препараты сенситина обладают неодинаковой способностью связывать гамеглютинирующий элемент (антитело или антиген) .

Известен также способ определения активности гемосенситинов одинаковой специфичности, включающий измерения антителосвязывающей активности сен- щ ситина, сенстабилизацию эритроцитов и расчет печальной скорости сенсибилизации (2) .

Однако этот способ также недостаточно точен, поскольку по оценке 25 сказывается неодинаковая способность различных препаратов сенситина одной специфичности связывать гемсанлютипирующий агент, которая не имеет отношения к собственно гемсенситивной активности.

Целью изобретения является повышение точности способа";

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения активности гемосенситинов одинаковой специфичности, включающему измерение антителосвязывающей или антигенсвязы.вающей активности сенситина, сенсибилизацию эритроцитов и расчет начальной 4 скорости сенсибилизации,сенсибилизацию эритроцитов осуществляют равноэффективными по связыванию дозами сенситин а °

Способ осуществляется следующим 4g образом.

Любым количественным методом (например, при помощи реакций нейтрализации или торможения пассивной гемагглютинации) измеряют антителосвязывающую активность антигена— сенситина или антигенсвязывающую активность антител-сенситина. Сравниваемые препараты сенситина разводят до равноэффективной IIo связыванию антител (или антигена) концентрации.

После этого эритроциты сенсибилизируют кажцый из сравниваемых препаратов, взятым в равноэффективной по связыванию гемагглютинирующего агента концентрации, в течение различного времени при прочих (температура, рН среды и т.п.) одинаковых условиях.

Сенснбилизированные эритроциты отмывают при центрифугировании забуференным (рН 7,0-7,2) 0,857-ным раствором хлористого натрия (при необходимости— со стабилизатором) и определяют уровень их сенсибилизации — титр РПГА при использовании одного и того же препарата гемагглютинирующего агента, Затем, исходя из характера зависимости титра РПГА от длительности сенсибилизации, рассчитывают значения начальной скорости сенсибилизации по ранее разработанному методу. Более активным гемосенситином является тот препарат, у которого значение начальной скорости сенсибилизации выше.

Пример 1. Сравнивали гемосенситивную активность двух серий антигенных препаратов, выделенных из Senteritidis. Их оптимальные гемосенситивные дозы, определенные по известному способу, оказывались одинаковыми — 8 мкг/л, а максимальный титр РПГА существенно не различался— для первого препарата он был равен ,1:51200, для второго — 1:64000. Определение коэффициента относительной гемосенситивной активности также дало весьма близкие значения для препаратов двух серий — 2,9-2,0. Определение известным способом значений начальной скорости сенсибилизации препаратами, взятыми в эквивалентных по выходу дозах (выход 1-ro и 2-го препаратов из сухой микробной массы соответственно равен 11,9 и 9, 1X), показало практически одинаковую активность (значения скорости равны соответствен. но 1120 и 1200). Таким образом, все известные способы не позволили выбрать, лучший из двух препарат гемосенситина.

По предлагаемому способу осуществили необходимые операции в такой последовательности.

Вначале определяют дозы сравниваемых препаратов, вызывающие торможение пассивной гемагглютинации в 2 раза. Они оказались равными 0,013 т 0,016 мгк/л для первого и второго препаратов соответственно. Эритроциты нагружают антигенами в равноз 1128914 эффективных по связыванию антител дозах (0,92 и 0,64 мкг/л соответственно). Измеряют титр РПГА при разной длительности нагрузки — при этом получили следующие результаты (табл. 1).

Таблица 1

Длительность нагрузки, мин

2-й

1-й

4000

4800

32000

4000

38400

4800

44800

11200

44800

11200

44800

16000

44800

16000

44800

19200

64000

16000

64000

22400

22400

44800

51200

Не измеряли

120

64000

51200

51200

64000

25600

180

64000 .

22400

64000

22400

64000

25600

Начальная скорость сенсибилизации

8120

487

НЕ доверительный интервал

6400-11100

430-550

P ((0,001

Различие значений начальной скорости сенсибилизации

Титр РПГА с "антигеном серии

32000

1128

Таблица 2

Способ оценки с

100

1:51200-1:102400

1: 44800-1: 102400

0,8

0,7

560

580

640

1840

Затем расчитывают значения начальной скорости сенсибилизации следующим образом: корреляционный и регрессионный анализ связи между обратными значенйями титра РПГА (1/У) и экспо- 5 зиции (1/Х) позволил определить зна« чения коэффициента регрессии 1/У по

1/Х. Они равны 0,002058 (для.первого препарата) и 0,0001232 (для второго препарата). Отсюда значения начальной скорости сенсибилизации (величина, обратная значению коэффициента регрессии) оказались равными 486 и

6126 соответственно. Таким образом, предлагаемый способ выявил сущест- 15 венные преимущества антигена второй серии погемосенситивным свойствам.

Приготовление эритроцитарньм диагностикумов в полупроизводственном объекте из антигенньм препаратов 20 двух серий дало следующие результаты.

Максимальный титр РПГА с диагностикумами составили 1:44800-1:51200 (для первого антигена) и 1:64000-1:76800 (для второго антигена).

Известный - по величине огтимальный сентивной дозы, мкг/мл

Известный — по величине максимального титра

РПГА

Известный — по коэффициенту относительной гемосенситивной активности .

Известный - по величине начальной скорости сенсибилизации для эквивалентных по выходу концентраций

Предлагаемый - по величине начальной скорости сенси- билиэации равноэффективными( по антителесвяэыванию . дозами

914 6

Длительность нагрузки, необходимой для достижения такой чувствительности, составил 2-3 ч (для первого антигена) и только 10-30 мин (для второго антигена). Характеристика чувствительности диагностикумов из антигенов двух серий продемонстрировала, таким образом, лучшие гемосенситивные свойства второго препарата, что проявилось в некотором повышении чувствительности РПГА и значительном (в 4-18 раз) сокращении длительности сенсибилизации эритроцитов.

Данный пример показывает, что предлагаемый способ позволит дать более точную количественную оценку гемосенситивной активности антигенов по сравнению с известными.

Пример 2. Аналогичным образом (известным и предлагаемым) сравнивали гемосенситивную активность двух серий антигенов E. Coli

011184. Результаты приведены в табл. 2.

Составитель Г. Крюкова

Редактор M. Товтин Техред З.Палий Корректор А. Тяско

Заказ 9268/4 Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

7 112891

Видно, что при использовании всех известных способов различия между двумя сериями антигена обнаружены не были. Предлагаемый способ показал почти трехкратное преимущество,йервого антигена по гемосенситивной активности.

Приготовление полупроизводственньм серий эритроцитарных диагностикумов иэ антигенов двух серий в дозе 10

200 мкг/мл показало, что чувствительность диагностикума из сенситина первой серии составила 1:102400, а иэ второго — 1:51200. Необходимая длительность сенсибилизации при !5 использовании первого антигена соста4 8 вила 30 мин, а второго — 2-3 ч. Эти данные подтверждают лучшую гемосенситивную активность первого антигена, что было выявлено только с помощью предлагаемого способа.

Таким образом, предлагаемый способ, в отличие от известных, дает воэможность более точной оценки активности гемосенситинов, независимо от различного сочетания характеристик активности, измеренных по известным способам, что важно для правильного выбора сенситина, ипользуемого при изготовлении эритроцитарных диагностикумов.