Способ определения количества фенотиазина в меде

 

I.СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ФЕНОТИАЗИНА В МЕДЕ, предусматривающий экстракцию фенотиазина из . водного раствора меда ацетоном с последуюсдим перераспределением в гексан, упаривание экстракта, нанесение его на пластину, воздействие проявляющим реактивом и установление количества фенотиазина по площади и интенсивности окраски пятна, о т л и ч а |ощ и и с я тем, что, с целью повышения точности определения путем предотвращения образования загрязнения на пятне исследуемого вещества и упрощения анализа, в качестве проявляющего реактива используют 0,1-2 и.раствор соляной кислоты. 2.Способ поп.1.отличающ и и с я тем, что при нанесении экстракта на пластину силуфол в качестве проявляющего реактива используют 0,1-0,5 н. раствор соляной кис- . лоты. 9 3.Способ поп.1,отличающ и и с я тем, что при нанесении экстракта на пластину со споем окись алюминия - гипс в качестве проявляющего реактива используют 1-2 н. раствор соляной кислоты.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

NIINC

РЕСПУБЛИК (19 01) 315и С 01 К 33/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ.

М АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3389837/28-13 (22) 15,01.82 (46) 23.I0.84. Бюл. М 39 (72) В.И.Ярошенко (71) украинский ордена Трудового

Красного Знамени научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии (53) 638.162.2:577.1 (088.8) (56) 1, Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде, ч.Х.М., 1980, с.133.

2. "Пчеловодство". 1980, У 5,с.25. (54) (57) I . СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА фЕНОТИАЗИНА В МЕДЕ, предусматривающий экстракцию фенотиазина из водного раствора меда ацетоном с последующим перераспределением в гексан, упаривание экстракта, нанесение его на пластину, воздействие проявляющим реактивом и установление количества фенотиазина по площади и интенсивности окраски пятна, о т л и ч а ршийся тем, что, с целью повышения точности определения путем предотвращения образования загрязнения на

1 пятне исследуемого вещества и упрощения анализа, в качестве проявляющего реактива используют 0,1-2 н.раствор соляной кислоты.

2. Способ по п.l о т л и ч а ю шийся тем, что при нанесении экстракта на пластину силуфол в качестве проявляющего реактива используют О, l-0,5 н. раствор соляной кислоты.

3. Способ по п.l, о т л и ч а юшийся тем, что при нанесении экстракта на пластину со слоем окись алюминия - гипс в качестве проявляющего реактива используют 1-2 н. раст-ф вор соляной кислоты.

1!20237

Изобретение относится к санитарии и может быть использовано при санитарно-гигиенической оценке меда после обработки пчел фенотиазином.

Фенотиазин находит широкое исполь- 5 зование для диагностики и лечения варроатоэа и браулеза (вшивости) пчел. Его применяют путем сжигания в виде порошка или специальных таблеток в улье с больными пчелами. !О

При лечении варроатоза пчел фенотиазином остатки его попадают в мед.

Широкое применение фенотиазина в пчеловодстве вызывает необходимость постоянно проводить ветеринарно-санитарную оценку меда в отношении остаточных количеств этого препарата.

Известен способ определения фенотиазина в меде с помощью тонкослойной хроматографии, согласно которо- 20 .му экстракцию фенотиазина из меда проводят с помощью 60 мл бензола.Полученный экстракт очищают путем элюирования (вымывания) через колонку с силикагелем АСК и окисью алюминия, где в качестве вымывающего раствора также используют бензол (40 мл}, Конечное определение фенотиазина проводят на пластине силуфол обрабатывая (опрыскивая) ее раст- З0 вором хлорного железа (!)

Недостатками этого способа являются использование при анализе больших количеств бенэола, который обладает канцерогенным действием, а так- 35 же проявление хроматографических пластин раствором хлорного железа, которое выявляет и многие другие вещества, Кроме того, чувствительность метода составляет 3 мкг препарата 40 в пробе, что вынуждает брать навеску меда не менее 30 г, с которой очень неудобно работать.

Известен также способ определения количества фенотиазина в меде, пре- 45 дусматривающий экстракцию фенотиазина иэ водного раствора меда ацетоном с последующим перераспределением в гексан, упаривайие экстракта, нане-,; сение его на пластину,воздействие про- 50 являющим реактивом и установление количества фенотиаэина по площади и интенсивности окраски пятна.

Для дополнительной о чис тки экстра к- 55 та хроматографическую пластину вначале помещают в боковом положении в камеру с гексаном, а затем в камеру с системой подвижных растворителей гексан-ацетон. Конечное определение препарата проводят на хроматографических пластинах со слоем окись алюминия — гипс, так как при использовании этих пластин требуется не очень тщательная очистка экстракта. В качестве проявляющего реактива применяют 1 7.-ный водный раствор азотнокислого серебра. Чувствительность метода составляет 1 мкг препарата в пробе меда или 0,1 мг/кг (2)

Недостаток этого способа — использование в качестве проявляющего реактива азотнокислого серебра, которое является дефицитный.и дорогостоящим реагентом и относится к особо ядовитым лекарственным средствам списка А ("Яды"),которые необходимо хранить, учитывать и использовать согласно специальным строгим правилам.

Кроме того, в качестве хроматографических пластин используют пластины . cq слоем окись алюминия — гипс, которые исследователь готовит,самостоятельно. После нанесения конечного экотракта на хроматографическую пластину проводят „цополнительную очистку экстракта путем помещения пластин в боковом положении в хроматографическую камеру, насыщенную гексаном.

Принцип этой очистки заключается в том, что гексан не двигает остаточные количества фенотиазина на пластине, но сдвигает коэкстрактивные вещества, покрывающие фенотиазин на пластине. После прохождения фронта растворителя через всю пластину ее вынимают из камеры и оставляют на воздухе до исчезновения запаха гексана. Затем эту пластину помещают в камеру со смесью подвижных растворителей гексан — ацетон в соотношении 24:6, повернув ее на 90 по ото ношению к первоначальной раэгонке.

После подъема фронта растворителей на высоту 10 см пластину вынимают из камеры и через 10 с опрыскивают

17.-ным водным раствором азотнокислого серебра.

После обработки пластины проявляющим реактивом (нитратом серебра) обнаружены темно-зеленые пятна фенотиаэина в пробе меда и стандартном растворе фенотиазина. Коэкстрактивные вещества из пробы меда проявляются рядом с пятном фенотиазина, прикрывая его только с одной правой!

120237 стороны, что позволяет определить количество фенотиазина в сравнении с пятном стандартного раствора исследуемого препарата. Сравнивая площадь и интенсивность окраски пятна 5 из пробы с пятном стандартного раствора фенотиазина, количество фенотиазина в пробе меда определяют по формуле

А ° S

Х

S1 ° Р где Х вЂ” общее количество фенотиазина в меде, мг/кг;

А †количество фенотиазина в стандартном ацетоновом растворе, нанесенном на пластину рядом с опытной пробой, мкг;

S — площадь пятна стандартного 20

1 раствора фенотиазина, нанесенного на пластину, мм ;

S — площадь пятна пробы, мм

Ъ °

Р— масса пробы меда, взятого для анализа, г. 25

Кроме того, при определении фенотиазина известным способом на пластинах силуфол не удается получить удовлетворительные результаты из-за проявления аэотнокислым серебром 30 коэкстрактивных веществ меда (воск, пигменты),которые закрывают собой пятно фенотиазина, т.е. наблюдается четкая зависимость результата анализа от степени загрязнения меда коэкстрактивными веществами. При искусственном внесении фенотиазина в пробы меда и особенно при анализе свежеоткачанного меда после лечения пчелиных семей фенотиазином нередко 40 не удается выявить остатки фенотиаэина на пластине силуфол, а на пластинах со слоем окись. алюминия — гипс препарат в этих пробах определяется.

Цель изобретения — повышение точ- 45 ности определения путем предотвращения образования загрязнения на пятне исследуемого вещества и упрощение анализа.

Поставленная цель достигается тем 50 что согласно способу определения количества фенотиазина в меде, включающему экстракцию фенотиазина из водного раствора меда ацетоном с последующим перераспределением в гексан 55 упаривание экстракта, нанесение его на пластину, воздействие проявляющим реактивом и установление количества фенотиаэина по площади и интенсивности окраски пятна, в качестве проявляющего реактива используют

0,1-2 н. раствор соляной кислоты.

При нанесении экстракта на пластину силуфол в качестве проявляющего реактива: используют 0,1-0,5 н. раствор соляной кислоты, а на пластину со слоем окись алюминия — гипс

1-2 н. раствор соляной кислоты.

Сущность изобретения заключается в том, что при обработке пластины силуфол или со слоем окись алюминиягипс раствором соляной кислоты фенотиазин проявляется на пластине в виде розовых пятен на белом фоне.Коэкстрактивные вещества меда при этом не проявляются и не мешают выделению пятен фенотиазина, что не требует проведения не только тщательной основной, но и даже дополнительной очистки экстрактов путем помещения пластин в камеру с гексаном.

Пример I. Навеску меда (10 r) содержащего фенотиазин в количестве

0,18 мг/кг, растворяют в !О мл дистиллированной воды, переносят в делительную воронку и фенотиаэин экстрагируют

30 мл ацетона, встряхивая воронку

3 мин. Слоям дают разделиться и нижний слой отбрасывают, а верхний (ацетоновый экстракт) переносят в чистую делительную воронку, добавляют 60 мл дистиллированной воды и !реэкстрагируют !0 мл гексана, встряхивая воронку 2 мин. Реэкстракцию фенотиазина в гексан повторяют дважды. Затем гексановые экстракты объединяют, 10 г безводного сернокислого натрия сушат в течение 15 мин, упаривают до небольшого объема (0,2 мл) и наносят на пластину силуфол. Рядом с опытной пробой наносят известные коли чества фенотиаэина в ацетоне и пластину помещают в хроматографическую камеру со смесью гексан — ацетон в соотношении 24:6. После подъема фронта растворителей на высоту 10 см пластину вынимают из камеры и обрабатывают

О,! н. раствором соляной кислоты.фенотиазин проявляется через 60 с после начала опрыскивания в виде четких,пятен .розового цвета. Коэкстрактивные вещества из пробы меда не проявляют« ся на пластине при обработке ее раствором соляной кислоты и не мешают проявлению розовых пятен фенотиазина. Rf препарата 0,45.

1120237

А $2

S4 - Р

Количество фенотиаэина в исследуемой пробе меда устанавливают путем сравнения интенсивности окраски и площади пятна из анапиэируемого образца и известного количества фенотиаэина в ацетоне (стандартный раствор), нанесенного рядом с опытной пробой на пластинке до помещения ее в хроматографическую камеру, Общее количество фенотиаэина в ме. де определяют по формуле где Х вЂ” общее количество фенотиаэина в меде,мг/кг;

А — количество фенотиаэина в стандартном растворе, нанесенном на пластину, мкг;

S — площадь пятна стандартного раствора, мм2;

S — площадь пятна исследуемой

2 пробы, мм

P — масса исследуемой пробы меда, r, Подставив полученные показатели в формулу

2 32

Х 0 2 мг/кг, 32 10

1 устанавливают, что количество фенотиаэина в меде 0,2 мг/кг.

Пример 2. Анализ пробы меда проводят аналогично, примеру 1, эа исключением того, что экстракт наносят на пластину силуфол и опрыскивают 0 5 н. раствором соляной кислоты. В результате этого розовые пятна фенотиаэина проявляются через

l0 с после начала .опрыскивания и имеют более интенсивную окраску.Коэкстрактивные. вещества иэ пробы меда не проявляются на пластине и не загрязняют собой пятна фенотнаэина. Количество фенатиаэина в пробе меда 0,2 мг/кг.

Пример 3. Анализ меда проводят по примеру 1, однако гексановый экстракт, упаренный до объема 0,2 мл, наносят на пластину со слоем окись алюминия — гипс. После развития хроматограммы в камере со смесью подвюкных растворителей гексан — ацетон в соотношении 24:6 пластину вынимают иэ камеры и обрабатывают 1н, раствором соляной кислоты. В результате остатки фенотиаэина проявляют5 !

О

30 ся непосредственно после опрыскивания в виде четких пятен розового цвета, которые через 30 мин приобретают зеленую окраску. Rf препарата

0,50. Коэкстрактивные вещества не проявляются на пластине и не перекрывают собой пятен фенотиазина, а также не нарушают их конфигурации.

Количество фенотиазина в пробе меда

0,22 мг/кг.

Пример 4. Анализ меда проводят по примерам 1 и 2, однако пластину со слоем окись алюминия — гипс опрыскивают 2н. раствором соляной кислоты. В результате фенотиаэин проявляется в виде четких пятен розового цвета с более интенсивной окраской. Через 30 мин пятна приобретают зеленую окраску. Коэкстрактнвные вещества на пластине не выявляются и не мешают проявлению розовых пятен фенотиаэина.Количество фенотиаэина в исследуемой пробе меда

0,22 мг/кг.

Таким образом, остатки фенотиазина, обнаруженные в исследуемом меде предлагаемым способом, составляют

0,2 и 0,22 мг/кг (примеры 1-4), а известным — 0,18 мг/кг. Это объясняется тем, что при анализе меда известным способом коэкстрактивные вещества на пластинах со слоем окись алюминия — гипс. мешают проявлению пятен фенотиаэина и снижают полноту его определения.

С целью установления чувствительности метода и полноты определения фенотиазина в пробы меда вносят известные количества препарата н проводят анализ предлагаемым способом.

Результаты исследований представлены в табл.l..

Данные табл. 1 показывают, что чувствительность предлагаемого способа составляет 0,5 мкг в пробе меда (10 г) или 0,05 мг/кг, полнота определения 70-80 X.

Предлагаемый способ определения количества фенотиаэина в меде по сравнению с известным обладает повьппенной точностью определения и позволяет устранить зависимость результата анализа от присутствия в меде коэкстрактивных веществ. При этом способ дает воэможность проводить конечное апределение фенотиаэина на пластинах силуфол беэ проведения трудоемких ме1!20237

Таблица l

Определено фенотиаПроцент определения способом оличество исследозина, мкг способом даа мкг способом ваний

Предлагаемым на пластине иэвестпредлагаемым на пластине иэвест предла гаемым известным силу(1) (2) (2) 0 5

0 5

1,0

1,0

0,7

81,0 76,0 80,0

1,5

2,0

2,0

l,62 l,7

5 0

4,3

5 0

Таблица 2

Показатели

Способ предлагаемый известный

2 руб.88 коп.

0,03-0,59 коп.

29,6 коп.

0,03-0,59 копа

Итого: 3 руб.17 6 коп.

Составитель Н.Арцыбашева

Техред Т.Иаточка

Корректор, А.Зимокосов

Редактор A.Êîýîðèý

Заказ 7732/32 Тирах 822

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Е-35, Раушская наб., д.4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г.ухгород, ул.Проектная, 4 тодов очистки экстракта иэ меда.Кроме того, способ более экономичен (табл.2) и не требует для проведения

Внесено фенотиаэина в пробу ме(из расчета на 100 анализов) Затраты на дополнительную очистку экстрактов

Затраты на проявляющие реактивы анализа опасных и дефицитных реактивов, что делает его перспективным, для использования. со слоем. окись алю миния— гипс (1) .

О, 36 0,4 — 72,0 80,0

0,7 0,82 70,0 70,0 82,0

4эl 4в25. 86ю0 82 85