Способ выделения антител при помощи сорбции антигенами, фиксированными химическим путем на целлюлозе, с последующей элюцией
Класс 30h, 6
Мв 119658
СССР,С; .г <, „ чот —, kiVIl ó — —-ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
А, Е. Гурвич и P. С. Незлин
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ ПРИ ПОМОЩИ СОРБЦИИ
АНТИГЕНАМИ, ФИКСИРОВАННЫМИ ХИМИЧЕСКИМ ПУТЕМ
НА ЦЕЛЛЮЛОЗЕ, С ПОСЛЕДУЮЩЕЙ ЭЛЮЦИЕЙ
Заявлено 14 июля 1958 г. за № 603942/31 в Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Опубликовано в «Бюллетене изобретений» № 9 за 1959 г.
Для лечения и профилактики ряда заболеваний (столбняка, дифтерии, газовой гангрены и других) используются сыворотки крови иммунизированных животных.
Дей твующим началом этих сывороток являются белковые вещества — антитела. Все остальные белки иммунной сыворотки, составляющие основную ее массу, не обладают лечебными свойствами, являются чужеродными для человеческого организма и могут вызвать нежелательные реакции
Изобретением является спо"об выделения чистых антител иммуносорбентом, представляющим собой антиген, фиксированный на целлюлозе при помощи галоидалкилата.
Способ осуществляется следующим образом. 50 г целлюлозного порошка заливают 100 мл 7%-ного раствора галоидалкилата в 2,5 -ном растворе уксу снокислого натрия. Перемешивают, высушивают при 60—
80 и затем прогревают в течение. 40 мин, при 125. При этом остаток галоидалкилата вступает в прочную химическую связь с целлюлозой. Целлюлозный порошок на бюхнеровской воронке отмывают водопроводной водой (в течение 20 мин.) от несвязавшегося с целлюлозой галоидалкилата. Переносят в сушильный шкаф и вновь полностью высушивают при
80 . Сухой порошок три раза промывают бензолом (по 200 мл), высушивают на бюхнеровской воронке, переносят в стакан с 300 мл 15 -ного раствора гидросульфита натрия, нагретого до 50 — 60; и выдерживают порошок в этом растворе при постоянном перемешивании 30 мин. Содержимое стакана переносят на бюхнеровскую воронку, жидкость отсасывают, а порошок промывают 20 мин. водопроводной водой. Далее порошок на 30 мин. помещают в стакан с охлажденной диазотирующей смесью (1,5% ЫаИОг в 5 /О НС1). Во время диазотирования сме;ь непре№ 119658 рывно перемешивают, после этого порошок промывают 5 мин. водопроводной водой и подсушивают на бюхнеровской воронке. Для комплексирования с белком слегка подсушенный порошок переносят в эрленмейеровскую колбу с 150 мл раствора белка (10, 20 или 25 иг на миллилитр) в боратном буфере рН 8, 6. Колбу укрепляют на магнитной мешалке и помещают ее на 24 час. в рефрижератор, после чего тщательно отмывают порошок от несвязавшегося с целлюлозой белка водопроводной водой и физиологическим раствором. К отмытому порошку добавляют вероналовый буфер рН 9,2 с бета-нафтолом, оставляют на 8—
10 час. и отмывают от бета-нафтола. Готовый иммуносорбент высушивают на воздухе.
Удаление белков, не связанных с иммуносорбентом, проводится пропусканием через колонку 10% iUaCI до тех пор, пока в вытекающей из колонки жидкости содержание белка не будет меньшим, чем 5 — 10 гиг на
1 мл жидкости.
Элюция антител проводится при помощи подкисленного до рН 3,2
1% раствора хлористого натрия. Элюцирующий раствор пропускают через колонку и собирают вытекающую из нее жидкость, либо к насыщенному иммуносорбенту добавляют элюцирующий раствор и перемешивают 60 мин. при комнатной температуре.
Предмет изобретения
Способ выделения а нтител при помощи сорбции антигенами, фиксированными химическим путем на целлюлозе, с последующей элюцией, отличающийся тем, что, с целью повышения степени очистки антител, фиксацию антигенов производят через остаток галоидалкилата.
Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Редактор А. К. Лейкина Гр. 139
Информационно-издательский отдел. Поди. к печ. 8Л -59 г.
Объем 0,17 п. л. Зак. 2206 Тираж 720 Цена 25 коп.
Типография Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Петровка, 14.
