Способ определения активности липазы

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

СПОСОБ ОПРЕДЕЛКНИЯ АКТИВНОСТИ ЛИПАЗЫ путем добавления к исследуемой пробе субстрата, инкубации смеси в присутствии индикатора с последующим определением продуктов гидролиза субстрата, отличающийс я тем, что, с целью повышения точности и ускорения определения к исследуемой пробе одновременно добавляют в качестве субстрата О,1 .0,2 мл трибутирина и в качестве индикатора феноловый красный в буферном растворе с рН 8,4-8,5, инкубацию реакционной смеси проводят в течение 30-60 мин, а продукты гидролиза субстрата определяют колориметрически.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) Я (111

3(5D С О1 N 33/48

1 (,,9

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ/ Р .

Н АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

r1O ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3289452/28-13 (22) 21.05.81 (46) 07. 05.84. Бюл. Ф 17 (72) А.С.Логинов, К.Ю.Асташенкова и З.С.Исакова (71) Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии (53) 577.153.2(088.8) (56) 1. Балаховский С.Д., Балаховский И.С. Методы химического анализа крови. M., Медгиз, 1953, с. 617-620.

2.Tietz N.W. Elisco V.R. Pzoposed Standard Method for measuring

Lipase Activy in serum by à contirqpe

Sampling technique. Clin chemystry, 1973, ч. 19, Ф 11, р. 1268-1275. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЛИПАЗЫ путем добавления к исследуемой пробе субстрата, инкубации смеси в присутствии индикатора с последующим определением продуктов гидролиза субстрата, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности и ускорения определения к исследуемой пробе одновременно добавляют в качестве субстрата О, 1

0,2 мл трибутирина и в качестве индикатора феноловый красный в буферном растворе с рН 8,4-8,5, инкубацию реакционной смеси проводят в течение

30-60 мин, а продукты гидролиза субстрата определяют колориметрически.! 1091

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии.

Известен способ определения активности липазы, основанный на определении в сыворотке крови продуктов гидро5 лиза субстрата липазы специфическими цветными реакциями (13. ,Однако способ трудоемок и требует дорогостоящих реактивов.

Известен также способ определения активности липазы путем добавления к исследуемой пробе субстрата липа.зы, инкубации смеси и введения в нее индикатора с последующим определением продуктов гидролиза г убстрата (2 1. 15

Однако метод недостаточно точен, поскольку результат оценивается титрометрически субъективно и длителен. Кроме того, способ применим только для определения активности липазы в сыворотке крови.

Цель изобретения - повышение точности и ускорения определения.

Указанная цель достигается тем, .что согласно способу определения активности липазы путем добавления к исследуемой пробе субстрата, инкубации смеси в присутствии индикатора с последующим определением продуктов гидролиза субстрата, при котором к исследуемой пробе одновременно добавляют в качестве субстрата О, 10,2 мл трибутирина и в качестве индикатора феноловый красный в буферном растворе с рН 8,4-8,5,, инкубацию реакционной смеси проводят в течение

30-60 мин, а продукты гидролиза субстрата определяют колориметрически.

Способ осуществляют следующим образом.

Берут в орошенную антикоагулянтом 4О микропипетку цельную капиллярную кровь и вносят в изотонический физиологический раствор, центрифугируют.

Инкубируют 0,1 мл центрифугата с буфером (рН 8,4-8,5), подкрашенным 45 феноловым красным и с субстратомтрибутирином (О, 1-0,2 мл). После прекращения инкубации колориметрируют на фотоэлектроколориметре при зеленом светофильтре против воды. Цент- ® рифугат добавляют в контрольную пробу после инкубации.

По изменению цвета реакционной среды по сравнению с контролем судят о количестве липазы. 55

Пример 1. В центрифуражную пробирку вносят 0,2 мл 0,9Х-ного ,хлористого натрия н 0,2 мл капилляр065 2 ной крови, взятой из пальца в микропипетку, окращенную антикоагулянтом.

Смесь центрифугируют.

В две пробирки (опытную и контрольную) разливают по 2 мл буфера, подкрашенного индикатором. В каждую из этих пробирок добавляют по 0,2 мл трибутирина. В опытную пробу вносят

О, 1 мл центрифугата, слабый гемолиз супернатанта практически не влияет на результаты анализа. Обе пробирки (опыт и контроль) помещают в водяную баню при 37 С на 1 ч. После инкубации пробы охлаждают. В контроль добавляют 0,1 мл центрифугата. Затем и в опыт, и в контроль приливают по 3 мл заранее охлажденной дистиллированной воды. Обе пробы центрифугируют 5 мин при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно отсасывают в кювету и колориметрируют против дистиллированной Н О при

536 нм в кюветах толщиной 10 мм.

По разнице экстинкций контрольной и опытной проб рассчитывают количество липазыв образце крови по формуле:

Е -Е Ке-Е 5 1 20 = вЂ” -.вЂ” -1 100, Е, Е1( где Еа вЂ” экстинкция опыта;

Ец вЂ” экстинкция контроля;

5 вЂ” коэффициент пересчета на . 1 мл. трибутирина, 0,2 мл трибутирина вводят в пробу 0,2 5 1 мл

20 вЂ” коэффициент пересчета на t мл крови (расходуется

0,1 мл центрифугата, содержащего разведенную в 2 раза кровь), поэтому 0,05 мл х х 20 = 1 мл.

Реактивы

1. Вероналовый буфер рН 8,5:

1 545 г мединала (веронала натрия) растворяют в 500 мл воды, добавляют 9 мл 0,1 н. НС1 и 150 мл

0 01Х-ного раствора фенолового красного. Довобят рН до 8,5, Объем буфера доливают водой до 1 л. (Хранить в холодильнике. Пригоден в течение 1 мес).

2. Раствор индикатора:

100 мг фенолового красного растворяют в 5,7 мл 0,06 í.йаОН.После полного растворения объем индикатора доводят водой до 25 мл. Получают 0,4 -ный раствор. Иэ него готовят 0 01Х-ный раствор (9 мл

0,4Х-ного индикатора доводят до

200 мл Н20).

Составитель Е.Житникова

Техред И.Метелева Корректор В.Бутяга

Редактор Л.Филь

Заказ 3073/40 Тираж 823 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðoä, ул.Проектная, 4 з 1091065 Я

П р и и е р 2. Больной А. Актив- поджелудочной железы н при дальнейность липазы в крови, определяемая шем обследовании у больного обнарупредлагаемым способом, составила жен панкреатит.

EK - Ео 5 1.20 вЂ” Оа5-Од4 100 20 Предлагаемый способ позволяет проЕ 0,5 водить точное определение активности

Полученные данные свидетельствуют липазы в цельной капиллярной крови о нормальной функции поджелудочной за 1 ч, малотравматичен, не требует железы. дорогостоящих реактивов, что необхоПример 3. Больной 5. Актив-. димо в клинической практике для исность липазы составила 75,5 ед, что 1п следования состояния подкелудочной свидетельствовало о нарушении функции железы.

Способ окраски кровеносных сосудов внутренних органов на гистологическом препарате // 1091058

Способ окраски гиалуроновой кислоты в тканях глаза // 1091056

Способ определения моноформазана в ткани на гистологическом препарате // 1091054

Способ определения содержания гидроперекисей липидов в биологических тканях // 1084681

Устройство для определения реакции мышечной ткани на раздражение // 1084680

Способ определения дигидротестостерона и его производных в масляной смеси // 1083116

Способ выделения специфического фактора уш // 1082338

Способ определения фаголизосомальных структур клетки // 1081542

Способ определения активности ферментов крови после длительного хранения // 1081541

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750