Способ получения специфической сыворотки для идентификации жгутикового антигена н11 у еsснеriснiа coli

 

CIIOeOB ПОЛУЧЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ИДЕНТИадКАЦИИ ЖГУШКОВОГО АНТИГЕНА НИ у ESCHERICHIA COLI, включающий иммунизацию животных антигеном,с последуищей адсорбцией иммунной сыворотки антигенами, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью упрощения способа, в качестве антигена используют штамм (В99 г HIIM) №40 E.cpli серогруппы 055:К59(В5), а адсорбцию антител из сьшоротки ведут соматическим антигенным комплексом эшерихий этой серогруппЫо

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (1) А 61 К 35/|4

А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

FlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 3510478/13 (22) 09,11 ° 82 (46) 23.03.91. Бюл. И1 11 (71) Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (72) 10.А Ратинер и 3.В.Климова (53) 615.375(088.8) (56) Ewing M..Í. et al "Studies on

the sегоlogy of the E.coll group" .

CDC, Atlanta Georgia, August, 1956, Reprinted Аияпзй 1967.

Изобретение относится к области . микробиологии н может быть использовано в производстве диагностических препаратов, предназначенных для серологической идентификации возбудителей этерихиозов.

Известен способ получения специфической сыворотки для идентификации жгутикового антигена НХХ у Escherichia соИ путем иммунизации кроликов штаммом серов ара 086: Кб l {87): Н11 с no- « . У спедующей адсорбцией полученной сыво. ротки, прогретой культурой неподвижного варнанта гомологичного штамма. и живыми культурами сероваров 06:К15:

:Нб 079:К:840 и 0111:K58(84):Í21, Однако этот способ сложен, поскольку использование для иммунизации ди- . ких штаммов приводит к необходимости адсорбции антител к. антигенам Н2.1 и

H40 ° что сопряжено с большим расходом питательных сред и большими затратами труда.

2 (54) (57} СПОСОБ 110ЛУЧЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕС- кой сыВОРОтки для идентиФикАции жгуТИКОВОГО АНТИГЕНА НП у ЕЗСНЕЫСНХА

COAX включающий иммунизацию животных антигеном, с последунщей адсорбцией иммунной сыворотки .анткгенами, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве антигейа используют штамм (899:Hl|М)

11(40 Е.coli серогруппы 055:K59(85), а адсорбцию антител из сыворотки ведут соматическим антигенным комплексом эшерихий этой серогруппы.

Целью изобретения является упрощение способа °

Цель достигается тем, что при осуществлении способа получения специфической сыворотки для идентификации жгутикового антигена Нll у Escherichia cali, включающего иммунизацию животных антигеном с последующей адсорбцней иммунной сыворотки капсульными и жгутиковыми антигенамн, в качестве антигена используют штамм (899:Нl 1 М) И 40 Е.coli серогруппы

0551K59(85) с последующей адсорбцией из сыворотки антител к соматическому аитнгенному комплексу эшерихий этой серогруппы.

Способ выполняется следующим об( разом.

Аитиген дпя иммунизации животных готовят из искусственно сконструированного штамма .899:Нl lм, принадлежащего к серогруппе 055:K59(B5), жгутиковый антиген которого содержит

1085037

КоРРектоР М.Самборская

Редактор О.Юркова Техред М,дидык

Заказ 1059 Тираж 451 Подписное

ВЯИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 только специфический комплекс антигена Hll и не содержит парциальных факторов,, общих с антигенами Н 21 и

Н40. В связи с этим адсорбция нативной сыворотки может быть ограничена только удалением антител к соматическим антигенам с использованием в качестве адсорбента прогретой культуры любого штамма серогруппы 055:К59 (85) либо живой или формалинизированной. культуры любого штамма этой серогруппы, обладающего любым, кроме

Нll, жгутиковым антигеном, или неподвижного, Штамм 899:Нllм депонирован;. за Р 40 в коллекции ГИСК им.Л.А.Тарасевича.

Пример. OKH-сыворотки получают от кроликов, иммунизированных, штам-2р мом 899! Нl lм идля сравнения диким штаммом 8 551, принадлежащим к природному серовару 055:K59(85):Hl l.

Бульонную формалинизированную культуру пропассированных предварительно 25 через полужидкий агар бактерий вводят четырехкратно животным внутривенно в дозах 0,25; 0,5; 1,0 и 2,0 мл с интервалами 4 дня, Кровь берут на 7-й день после последней инъекции и отделяют. сыворотку. Сыворотки нативные и адсорбированные проверяют на наличие 0, К и Н-антител в пробирочных реакциях агглютинации общепринятым методом. Антигеном для индикации Н-ан-35 тител служат приготовленные таким же способом, как и для иммунизации, бульонные формалинизированные культуры Н-тест-штаммов Международной коллекции эшерихий; SU 4321-41(013:KIIL: 10 HII) UIIa-44(08:NE:Н21), 849(079:К:

:Н40) Антигенами для индикации О и

К-антител служат соответственно прогретая 1 ч при 100 С живая агаровая культура неподвижного тест-штамма Меж-45 дународной коллекции эшерихий SU391241(055:К59(85)). Сыворотку к штамму

899:Нllм адсорбируют тест-штаммом SU3912-41 или диким штаммом 8281 серовара 055:K59(85) Í21. Сыворотку к штамму 8551 адсорбируют диким штаммом 8281 и эталонным штаммом Е49. Ад- . сорбентом служат агаровые культуры, выращенные на 1,51 агаре Хоттингера в чашках Петри при 37оС в течение

20 ч. Бактерии с поверхности arapa смывают изотоническим раствором хлорида натрия,и убивают добавлением

0,51 формалина. Разные дозы адсорбента (доза выражена в количестве чашек, с которых получен адсорбент1 осаждают центрифугированием и осадок смешивают с 5 мл сыворотки, разведенной

1:10 изотоническим раствором хлорида натрия. Смесь инкубируют 2 ч при 37 С о

У после чего сыворотку освобождают от бактерий центрифугированием. Полноту адсорбции контролируют посредством реакции агглютинации и определяют ко личество адсорбента (в пересчете на

1 мл неразведенной сыворотки), необходимое для полной адсорбции антител, подлежащих удалению.

Сыворотка, полученная к штамму

899:Н11м, не содержит антител к гетерологичным Н-антигенам. Для приготовления из нее специфической чистой

Н-сыворотки требуется адсорбента (а следовательно, и расхода питательных сред) в 4,5 раза меньше, чем для приготовления аналогичного препарата способом, испытанным в.качестве прототипа. Кроме того, при использовании предложенного способа лучше сохраняются специфические. H-антитела.

Предлагаемый способ получения диагностической специфической чистой

Нll сыворотки по сравнению с известным обеспечивает уменьшение расхода адсорбента и, следовательно, упрощение производственного процесса, уменьшение расхода питательных сред, посуды и затрат труда; сохранение более высоких титров специфических Н-антител и, следовательно, увеличение выхода готовой продукции (при условии уравнивания титра специфических Н-антител в готовом препарате), Все это обеспечивает упрощение и повышение экономичности процесса производства.