Способ диагностики ранней стадии ревматоидного артрита

 

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАННЕЙ СТАДИИ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА путем определения в сыворотке крови больного антител к цельным клеткам / -гемолитического стрептококка группы В, штамм 090R, в серологической реакции с последующим учетом результатов , отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности и чувствительности способа, микробные клетки перед постановкой реакции обрабатывают раствором пепсина в течение 3tO,l ч, антитела определяют в реакции связывания комплемента .

„„SU„„1076089 A

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

3(5п A 61 В 10/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И,ОТНРЬПЗФ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ .

1 (L

f т

К ABTOPGHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3334626/28-13 (22) 18.05.81 (46) 28.02 ° 84. Бюл. М 8 (72) A. Б.Эборовский и Б.A.Ëåìïåðò (71) Волгоградский государственный медицинский институт (53) й616-07 (088. 8) (56) l. Svartz N. J.Acta medicine

Scandinavia, v.199, 1972, рр,231.239 (прототип) . (54) (57.) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАННЕЯ

СТАДИИ РЕВИАТОИДНОГО АРТРИТА путем определения в сыворотке крови больного антител к цельным клеткам

) -гемолитического стрептококка группы В, штамм 090R, в серологической реакции с последующим учетом результатов, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности и чувствительности способа, микробные клетки перед постановкой реакции обрабатывают раствором пепсина в течение 3+0,1 ч, антитела определяют в реакции связывания комплемента.

C)

Сп

4Р

ОО ©,1076089

Показатели

Деформирующий

Здоровые лица

Ревиатоидный артрит

2 r — свыше

5л 5 лет до 6 мес— б мес - 2 r

Число обследованных

Частота выявления антител,Ъ

Среднйй геометрический титр

ЗО

37

13

86, 49

66,67 50

92,31 95

2 35+

1,13

3, 28+

1,14

28, 76 26, 91+ 13, 541 8, 62+

1,35 1,27 1,16 1,13

Изобретение относится к медицине а именно к ревматологии, и может бить использовано для дифференциальной диагностики ревматоидного артри» та на ранних стадиях.

Известен способ диагностики ранней стадии ревматоидного артрита путем определения в сыворотке крови больного антител к цельным клеткам р-гемолитического стрептококка группы В, штамм 090В, в серологической реакции с последующим учетом результатов (11.

Однако известный способ является малоспецифичным из-за наличия перекрестно-реагирующих белковых антиге- 15 нов и рецепторов к Г® фрагменту чеповеческого иммуноглобулина G в оболоч-. ке клеток стрептококка.

Цель изобретения — повышение.специфичности и чувствительности спосо- .2р ба.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу .диагностики ранней стадии ревматоидного артрита путем определения в сыворотке крови 25 больного антител к цельным клеткам (3-гемолитического стрептококка группы B, штамм 090R, в серологической реакции с последующим учетом результатов, микробные клетки перед постановкой реакции обрабатывают раствором пепсина в течение ЗФ0,1 ч, антитела определяют в реакции связывания комплемента.

Способ осуществляют следующим 35 образом.

Клетки штамма 090R ГСВ выращивают на бульоне Хоттингера.рН 7,6> содержащем 140-160 мгЪ аминного азота и 1% глюкозы в течение 20 ч 40 о при 37 С. Клетки собирают центрифугированием при 3000 g, трижды отмывают физиологическим раствором рН

7,2 и ресуспензируют в фиэиологичес- ком растворе рН 2,0, содержащем пепсин s концентрации 1 мг/мп (иэ расчета 500 мл исходной питательной среды - 10 мл раствора) . После инкубации на водяной бане при 37 С в течение 3 ч клетки трижды отмывают физиологическим раствором рН 7,2, ресуспензируют в 10 мл того же раствора и инкубируют на водяной бане при

56 С в течение 1 ч, после этого взвесь разводят физиологическим раствором рН 7.,2 до густоты 10 ед по стандарту, добавляют мертиолят в концентрации 1:10000 и хранят при 4 С, используя при необходимости в качестве антигена для PCK.

Кровь у больных берут из локтевой вены в количестве 5 мл и готовят сыворотку по общепринятой методике.

При необходимости сыворотку можно хранить при - 200C в течение 2 мес, беэ снижения титра антител.

Эритроциты барана для постановки

PCK хранят при 4 С в растворе Алсевера, содержащем 0,5% сульфацила-натрия и 0,15% левомицетнна, в течение

2 мес. без признаков гемолиза и бактериального роста. Комплемент для реакции титруют в день постановки опыта. PCK ставят на холоде по..общепринятой методике в объеме 0,5 мл, используя полистироловые панели для титрования. Первым разведением сывороток бОльного является 1:4. Одна рабочая доза антигена содержится в

О, мл взвеси клеток штамма 090R густотой 10 ед по стандарту.

Предлагаемым способом было обследовано 95 больных ревматоидным артритом с различной давностью заболевания.

Таким образом, способ является эффективным для дифференциальной диагностики ревматоидного артрита на ранних стадиях, что подтверждается данными таблицы.

1076089

Составитель В.Дроздов

Редактор Л.Филь Техред В.Далекорей КоррекТор A.IIoax

Заказ 574/5 Тираж 688 Подпи оное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва,,Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

«жФилиал ППП Патент ., г.ужгогод, ул.Проектная, 4

При обследовании группы иэ 34 больных ревматоидным артритом с дав. ностью заболевания до 1 года аитнтела к клеткам штамма 090R, обработанным пепсином, выявлены в 87,5т6,9В случаев, повышенный титр ревматоидного фактора в 56,46110,3% случаев, повышенное содержание нейраминовой кислоты в 51,92+10,42% случаев и.С-реактивный белок выявлен в 44,71+

+10,37% случаев . Разница между частотой выявления антител к стрептококку и других патологических признаков статистически достоверна.

Применение изобретения позволяет повысить специфичность и чувст вительность способа диагностики ревматоидного артрита.