Способ определения активности симпатической нервной системы

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ СИМПАТИЧЕСКОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕГ-Ы ПО содержанию катехоламинов, отличающийся тем, что, с целью повыи ения точности способа,измеряют содержание дофамина и норадреналина в слезной жидкости до и после введения L -диоксифенилаланина и по изменению этих показателей судят об активности симпатической нервной системы.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19} (И}

y(51} G 01 }(33/4 8

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3369763/28-13 (22) 25.12.81 (46) 23.02.84. Бюл. }} 7 (72) З.M.Киселева, Т.В.Зубарева, Е.В.Парфенова и Е.Г.Босых (53) 616.839.07(088.8) (56) 1. Матлина Э.(1!. Флуорометрические методы определения адреналина и норадреналина в крови и моче. В кн.: "Адреналин и норадреналин".

М., 1964, с. 268-278.

2. Вейн А,М. и др. Вегетососудистая.дистония. M., 1981, с. 35-37 (прототип). (5 4 ) (5 7 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИ ВНОСТИ СИМПАТИЧЕСКОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМ! по содержанию катехоламинов, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повн ения точности способа, изме-ряют содержание дофамина и норадреналина в слезной жидкости до и после . введения L -диоксифенилаланина и по изменению этих показателей судят об активности симпатической нервной системы.

1075162

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в медицинских исследованиях для уточнения механизмов развития сердечно-сосудистых заболеваний и повышения эфФективности лечения.

Известен способ определения состояния симпатико- адреналоной систелы по изменению уровня катехоламинов (норадреналина и адреналина) в крови и моче (11 .. 0

Известен также способ определения состояния симпатической нервной системы по клиническим признакам, например, потливости, повы ению частоты сердечных сокращений (2) .

Недостатком известного способа является то, что этот способ основан. на субъективной оценке и специфических признаков и, следовательно, не позволяет количественно определять 3 активность симпатической нервной системы.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения активности симпатической .нервной системы, измеряют содержание дофамина и норадреналина в слезной жидкости до и после введения - диоксифенилаланина, и изменение этих показателей свидетельствует об активности симпаткческой нервной системы.

Способ осуществляется следующим образом.

В течение контрольного периода 35 (4-5 сут) из пищи обследуемого исключают продукты, влияющие на обмен катехоламинов, а также отменяют медикаментозные препараты. На шестые сутки иэ конъюнктивального мешка глаза 40 обследуелых лиц забирают микропипет)кой 0,05-0,5 мя слезной жидкости после вдыханкя через нос раствора нашатырного спирта. K образцу добавляют

0,3-0,5 мл 0,1% раствора ЭДТА. Затем обследуемому перорально вводят L,.-ДОФА иэ расчета 3,8-4,2 мг/кг веса и через 3-5 ч после приема L-ДОФА повторяют отбор слезной жидкости, к которой также добавляют то же количество ЭДТА. Оба образца довс дят до рН 8,2-8,5 фосфатным буфером рН .6,5 и 1н ° NH 40H и помещают на колонку с окисью алюминия.

После адсорбции катехоламины элюируют 0,25 н. уксусной кислотой дважды по 3,5 мл. Уксуснокислый элюат доводят до рН 4,2 1-2 каплями 1 н. раствора аммиака и затем отбирают, по 1 мл в контрольную и опытную пробы, в которые предварительно поме- 6Î щают по 1 мл 0,1 M фосфатного буфера..с рН 4,2, Затем оставшееся количество элюата доводят до рН 6,2, учитывают количество аммиака, пошедшего на титрование, и в две пробы отбирают65 количество раствора, соответствующее

2 мл элюата. В эти пробы предварительно помещают по 1 мл 0,1 M фосфатного буфера с рН 6,2.

Полученные дне опытные пробы уксусного элюата с рН 6,2 и 4,2 окисляют 0,1 мл 0,25%-ного раствора феррицианида калия в течение 4 мин и затем добавляют как н опытную, так и в контрольную пробу 0,5 мл 0,2%-ного раствора аскорбиновой кислоты, свежеприготовленного на 5 н.растноре щелочи. Через 3 мин все пробы доводят водой до 5,0 мл, а н контрольные пробы добавляют по 0,1 мл 0,25%-ного раствора феррицианида калия. Для большей стабилизации флюоресценции опытные и контрольные пробы охлаждают на льду в период измерения флюоресценции.

Обе пробы с уксуснокислым элюатом рН 6,2 и 4,2 измеряют на спектрофлюориметре при длинах волн 410 и 510 нм, Для определения дофамина количество уксуснокислого элюата, доведенного до рН 6,2 и соответствующего

1 мл исходного элюата, добавляют к

1,0 мп 0,1 И фосфатного буфера с рН 6,2 в опытную и контрольную пробы.

Объем опытных и контрольных проб доводят до " 5 мл водой и окисляют

0,2 мл 0,02 н,раствором йода в течение 4 мин. Затем к опытной пробе добавляют 0,5 мл щелочного сульфита (1 г кристаллического сульфита натрия растворяют в 2 мл воды и доводят

5 н.раствором едкого натра до 20 мл), .а н контрольную пробу 0,45 мл 5 н. раствора щелочи. Через 7 мин во все пробы помещают по 0,7 мл 5 н.раствора уксусной кислоты и тщательно их взбалтывают. Затем пробы облучают кварцевой лампой н течение 15 мин и после добавления в контрольные йробы по 0,05 мл сульфита (1 r кристаллического сульфита на 2 мл воды) из-, меряют флюоресценцию при длинах волн

330 и 380 ммк.

Флюоресиенцию образцов сравнивают с флюоресценцией стандартных растворов катехоламинов известной концентрации, производят расчеты и выражают результаты в нг/0,1 мл слезной жидкости.

Количественное определение катехоламинов н слезе является показателем активности только симпатической нерв ной системы ввиду особенностей иннер. нации слезной железы. Это подтверждается отсутствием увеличения в слезной жидкости адреналина, так как биосинтез катехоламинов в симпатической нервной системе заканчинается на стадии образования норадреналина, Пример 1. Обследуемый К, практически. здрров, Ha основании определения катехоламинов в слезной жидкости было ус1075162

Пример 3. Больная A. Диагноз — первичный альдостеронизм.

Результаты определения показали, что в этом случае имеет место нормальный уровень активности симпатической нервной системы по высвобождению дофамина и норадреналина. В то же время в слезной жидкости содер. жится 170,4 кг адреналина, котбрый исчезает после введения, -ДОФА

30 (табл. 3) .

Содержание в нг/0,1 мм слезной жидкости

Показатели дофами- норадре- адрена на налива лина

Таблица 3

Содержание в нг/0,1 мл 5 Показатели слезной жидкости

0 0

350

Фон

Через 3 ч после приема L -ДОФА 2800,0 70,0 0 дофами- норадрена- адрена лина налина

Пример 2. Больной Л. Диагноз — гипертоническая болезнь. 20

Результаты определения показали, что реакция симпатической нервной системы у данного больного отличается от таковой у здоровых лиц. В ответ на L -ДОФА содержание норадрена- 25 лина повышает я так же, как и у здоровых, а дофамина, напротив, значительно понижается (табл. 2) .

- Т а б л и ц а

250,4 0

170,4

30

2,5 35

Фон 1,3

Через 3 ч после приема L -ДОФА 16,0

5 8 0

Составитель И. Емельяненко

Редактор Т. Кугрышева Техред С.Легеза Корректор И. Эрдейи

Заказ 490/37 Тираж 823

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 тановлено одновременное увеличение содержания дофамина и норадреналина после приема L -ДОФА, что указывает на достаточность их биосинтеэа и является количественным выражейием активности симпатической нервной систе. мы у здорового человека /табл. 1) .

Таблица 1

Через 3 ч после приeMa L -ДОФА 410,0 28,1

Предлагаемый способ может найти широкое применение в клинических исследованиях, поскольку для точно направленного патогекетического лечения, обладашщего наибольшей эффектив ностью, необходимо звание состояния симпатической нервной система - одной из ведущих систем нейро-гуморальной регуляции.