Способ выделения гиббереллинов

„„SU „„1060121

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

3(51) С 12 P 27 00.%

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA (21) 2910802/28-13 (22) 21.04.80 (31) P-218555 (32) 27.09.79 (33) ПНР (46) 07.12.83. Бюл. 9 45 (72) Рышард Хэропольитаньски, Хальина Снойэк, Анита Иновольска-Осытэк и Анна ЯсКуловска (71) Институт Хэмии Пшэмыслоэй и

Кутновске Закалады фармацэутычнэ

"Польфа" (ПНР) (53) 632.9(088.8) (56) 1. Патент СЫА: Р 2980700, кл.: 260-343.3, 1961.

2. Патент СИА Р 2950288, кл. 260-343.3, 1960 (прототип). (54)(57) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ГИББЕРЕЛ-i

ЛИНОВ, включающий экстракцию исходного сырья этилацетатом и кристаллизацию целевого продукта, о т л и— ч а ю ш и и с я тем, что, с целью расширения сырьевой азы, в качестве исходного сырья используют маточный раствор, остающийся после кристаллизации целевого продукта, экстракцию проводят при соотношении маточный раствор: этилацетат 1г4-15, отделяют выпавший осадок, полученную осветленную жидкую фазу экстрагируют водным раствором гидроокиси натрия или кислого карббната натрия, затем экстракт подкисляют до рН 3,5-1,5 при интенсивном перемешивании, смесь разделяют на жидкую и масля- . нистую фазы и выделяют целевой продукт из маслянистой фазы экстракцией этилацетатом или сорбцией.

1060121

Изобретение относится к микробно логической промышленности и касается получения гиббереллинов.

Известен способ получения гиббереллиновой кислоты из культуральной жидкости путем экстракции кетоном, несмешивающимся с водой, с последующей адсорбцией гиббереллиновой кислоты нейтральными карбонатами щелочных металлов, промывкой и кристаллизацией целевого продукта {1 ).

Известен также способ выделения гиббереллинов, включающий экстракцию исходного сырья — культуральной жидкости при рН 1,5-4,0 этилацетатом и кристаллизацию целевого продукта Г21.

Однако известные способы предусматривают использование в качестве исходного сырья культуральной жидкости.

Цель изобретения — расширение сырьевой базы.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу выделения гиббереллинов, включающему экстракцию исходного сырья .этилацетатом и кристаллизацию целевого продукта,. в качестве исходного сырья используют маточный раствор, остающийся после кристаллизации целевого продукта, экстракцию проводят при соотношении маточный раствор: этилаце тат 1:4-15, отделяют выпавший осадок, полученную осветленную жидкую фазу экстрагируют водным раствором гидроокиси натрия или кислого карбоната натрия, затем экстракт подкисляют до рН 3,5-1,5 при интенсивном перемешивании, смесь разделяют на жидкую и маслянистую фазы и выделяют целевой продукт из маслянистой фазы экстракцией этилацетатом или сорбцией.

Сущность предлагаемого способа заключается в том, что высоковязкие отбросные маточные растворы разбавляют тем же растворителем, что и в маточном растворе, в отношении

1:4-15 с целью уменьшения вязкости обрабатываемого раствора.

35 рН. водного экстракта

Концентрация гиббереллинов в экстрагированном слое ацетата, В

Экстракт

0,77

4,8

0,39

5,4

0,12

6,9

7,7

Следы

0,00

8,0

5О

В 5-м водном экстракте не обнаружено присутствия гиббереллинов.

1-й — 4-й экстракты соединяют. В сумме получают 30 л экстракта со средним значением рН 6,1, содержащего 0,73% гиЬВереллинов. Выход после экстрагиронания 93,6% от исходного количества гиббереллинов в маточ60 ном растворе .. К водному экстракту при сильном перемешивании механической мешалкой добавляют медленнопо каплям 5Ъ-ный водный раствор соляной кислоты. По ходу добавления

65 кислоты прозрачный раствор мутнеет

Такая обработка приводит к осаждению значительного количества осадка в виде хлопьев, содержащего только 0,05% гиббереллинов. После отделения осадка ацетатный раствор экстрагируют водным раствором соединения основного характера, например кислый карбонат натрия, гиббереллины образуют соли и переходят в водный раствор. Переходящие в раствор загрязнения почти полностью удаляют путем постепенного и осторожного подкисления нодного экстракта. Медленная дозировка кислоты при постоянном сильном перемешивании противодействует выделению гиббереллинов совместно со смолообразными веществами, чаще всего достаточно подкислять до рН 3,5-1,5.

После отделения смолообразных примесей выделение гиббереллинов из водного раствора-экстракта можно проводить экстрагированием этилацетатом, концентрированием экстракта и кристаллизацией или путем отгонки растворенного в воде этилаце10 тата и возвращения водного остатка в основной цикл обработки свежей партии культуральной жидкости.

Пример 1. 3 л этилацетатного маточного раствора после днукрат15 ного выделения гиббереллинон кристаллизацией, содержащего 7,8% гиббереллинон, разбавляют 12 л чистого этилацетата.

После тщательного перемешива20 ния раствор оставляют на 30 мин.

В течение этого времени выпадает хлопьевидный сильнокоричненый осадок. Осадок отделяют и осветленный ацетатный раствор экстрагируют

2Ъ-ным водным раствором кислого карбоната натрия. Экстракцию проводят пятикратно, применяя каждый раз по 7 л водного раствора кислого карбоната натрия.

В таблице приведены выходы целевого продукта после каждой экстракции.

106012l

Составитель Г. Смирнова

Редактоо М. Рачкулинец Техред М.Надь Корректор Г.Огар

Заказ 9872/61 Тираж 523 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 и выделяется темная маслянистая жидкость.

После доведения рН экстракта до

2,5 прекращают перемешивание и оставляют жидкость на 3 ч. По истечении этого времени происходит разделение. Маслянистая темная жидкость скапливается на дне реактора, в котором проводят подкисление. В результате получают фракцию смолообразных веществ объемом 450 смЗ, содержа- 10 щую 5,3Ъ (23,8, r) гиббереллинов.

Водный раствор после подкисления экстрагируют этилацетатом, а затем выделяют гиббереллины. В результате получают 182 г кристаллического . 35 продукта, содержащего 76,2Ъ гиббереллинов. Общий выход процесса выделения 59,26Ъ.

Пример 2. 3 л этилацетат; ного маточного раствора той же производственной партиИ,что и в примере

1, разбавляют 12 л этилацетата, а образовавшийся осадок отделяют. Осветленный ацетатный раствор трижды экстрагируют 1Ъ-ным водным раствором гидроокиси натрия, применяя в каждой экстракции по 7 л раствора.

Экстракты соединяют, получая .22 л жидкости с рН 7,2, содержащей

1,02Ъ гиббереллинов. Общий выход экстракции 95,89Ъ.

Водный экстракт подкисляют. при интенсивном перемешивании 8Ъ-ным водным раствором серной кислоты.

Подкислив экстракт до рН 3,5, жидкость оставляют отстаиваться. После отстаивания получают 320 см 3 масляйистой фракции, содержащей 3,9Ъ гиббереллинов. Осветленный раствор после отделения смолообразующих веществ обрабатывают, как и в примере 1. В общем получают 253 г кристаллического продукта, содержащего

62,5Ъ гиббереллинов. Полный выход процесса выделения 67,5Ъ, однако продукт требует дополнительной кристаллизации.

П р и м.е р 3. 3 л этилацетатного маточного раствора разбавляют

30 л этилацетата. После тщательного перемешивания отделяют выпавший осадок. Осветленный фильтрат зкстДагируют четыре раза 2,5Ъ-ным водным раствором кислого .карбоната натрия в объеме 8 л для каждой экстракции.

Полученные экстракты соединяют и подкисляют 18Ъ-ной соляной кислотой до рН 1,5 при интенсивном перемешивании. Затем жидкую массу оставляют для разделения фаэ, после чего отделяют выделившуюся маслянистую жидкость. Получают 280 см 3 масла, содержащего 3,2Ъ гиббереллинов. После о-.деления маслянистого слоя жидкость экстрагируют этилацетатом.

Получают 150 г кристаллического продукта, содержащего 85,2Ъ гиббереллинов. Общий выход процесса извлечения 55Ъ, однако получают продукт более чистый, чем в примерах 1 и 2.

Использование изобретения поз воляет получать дополнительные коли чества гиббереллинов иэ отходов производства гиббереллиновой кислоты.