Способ подготовки для исследования на электронном микроскопе мелких водных животных
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОИМЪЮ
РЕСПУБЛИК (19) (11) 1
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ, Н АВТСРСЙОМУ СЭИЙВ ФЮЪСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
Лй Ю
121) 3419260/30-15 (22) 07.04.82 (46) 23.09.83. Бюл. И 35 (721 Г.И. Маркевич и Е.А. Коренева (711 Институт биологии внутренних ,еод Ан СССР (53).59.086.086.3 (088.8 ) (56l 1. Hendelberg М., Morling G., Peddler В. The ultrastructure of the . lorica of the roofer keratell a
serrulata (Eh. bg), "Zoon", 1979, l> p "9-59 (54)(57) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ДЛЯ ИС -.
СЛЕДОВАНИЯ HA ЭЛЕКТРОННОМ МИКРОСКОПЕ
3(я) А 01 8 1/00; А 01 N 1/02
МЕЛКИХ ВОДНЫХ ЖИВОТНЫХ, включающий фиксацию животных органическими растворителями, химическое обезвоживание многократной промывкой эфиром при повышении его концентрации и субли- мационную сушку, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью снижения затрат на осу)цествление способа „ сублимационную сушку проводят с помощью нафталина, которым пропитывают животных, предварительно введя нафталин в эфир в процессе химического обез. воживания, причем отгонху эфира проводят при 20 - 30 С.
1 1042 1зобретерие относится к способам подготовки для исследования на растровом электронном микроскопе мелких, преимущественно водных животных: инфузорий, коловраток, ракообразных, и может быть использовано для изучения морфологического строения микроорганизмов, водорослей и других биологических объектов, форма которых меняется при высушивании их. 1О
Известен способ сушки биологических образцов при критической точке, в котором предварительно фиксированные в спирте или формалине организмы проводят через ацетоновые растворы повышающейся концентрации с последующей обработкой жидким углекислым газом. После переведения биологиче:кого объекта, из ацетона в углекислоту последнюю испаряют в специальном аппарате при температуре критической точки углекислого raза 1J. . Недостатками этого способа являются дороговизна его и малая доступность для большинства исследователвй из-за необходимости применения особых криостатов, главным образом зарубежного производства, а также необходимость получения и хранения
: сжиженного углекислого газа.
Цель изобретения - устранение дороговизны, малой доступности для исследователей - морфологов и необходимости работы со сжиженными газами.
Поставленная цель достигается
35 тем, что согласно способу подготовки для исследования нз электронном микроскопе мелких, водных животных, включающему фиксацию животных органичес40 кими растворителями, химическое обезвоживание, многократную промывку эфиром при повышении его концентрации и сублимационной сушке последнюю проводят с помощью нафталина, 45 которым пропитывают животных, предварительно введя нафталин в эфир в процессе химического обезвоживания, причем отгонку эфира проводят при
20 - 30 С.
П р и. м е р, Объект фиксируют
50 спиртом и помещают на поверхность шелкового сита в стеклянную трубку, Концентрацию водного раствора спирта в ванночке повышают до абсолютного спирт@ путем полнои смены растворов.
Абсолютный спирт сменяют дважды, после чего его заменяют серией растворов диэтилового эфира повышающихся
Этиловый спирт в воде 30
20
То же 50
75
« I 1»
Спирт этиловый 100
Двойная смена реактива
Диэтиловый эфир в спирте 30
То же 50
20
Диэтиловый эфир 100
Тройная смена реактива
Нафталин в эфире
30
То же
30
«11»
Насыщенный раствор 60
Двойная смена реактива
720 2 концентраций. Объект трижды промывают чистым диэтиловым эфиром, а затем проводят через серию растворов нафталина в диэтиловом эфире. Последний раствор этой серии насыщенный при
20 С раствор нафталина в эфире сменяют дважды, Концентрация растворов и время выдерживания в них объекта приводятся в таблице.
Составитель С . Светлышев
Редактор Н. Данкулич Техред С.Мигунова
Корректор Л, Бокшан
Заказ 7171 15 Тираж 721
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Подписное
Филиал ППП "Патент -, г. Ужгород, ул. Проектная, 3 1042720 4
После этого объект пипеткой пере- носят в вытяжной шкаф, где при 20о 1 носят с шелкового сита на столик 30 С производят сублимацию нафталина. растрового электронного микроскопа После возгонки нафталина объект ос" вместе с небольшим количеством раст- тается на поверхности столика в том вора, Эфир йостепенно отгоняют, при же виде, какой имел в водной среде, этом нафталин кристаллизуется и объект причем неповрежденными оказываются оказывается включенным в монолит, даже тончайшие реснички коловращательнафталина. Столик с объектом пере- ного аппарата.
