Способ определения антигенной новизны штаммов вируса гриппа

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕН- НОЙ НОВИЗНЫ ШТАММОВ ВИРУСА ГРИППА путем обработки суспензий исследуемых вирусов антителами с последующим инкубированиемполученной смеси и определением специфического связывания антител, отличающийс я тем, что, с целью упрощения способа, суспензии вирусов обрабатывают плацентарным гамма-глобулином, после инкубирования отделяют образовавшийся комплекс вирус-антитела и антигенную новизну в«рус гриппа определяют по степени репродукции связанного с антителами вируса.

(1Е (ii) СОЮЗ СОВЕТСНИХ

OIHUMOII

РЕСПУБЛИК

MD 1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

l

1 (21) 3228215/28-13 (22) 24.11.80 (46) 15.08.83. Бюл. Р 30 (72) Г.С.Скрипченко, И.M.Håçáðîæ, A.Ã.Âëàñîâà и Т.М.Рыбакова (71) Одесский научно-исследовательский институт вирусологии и эпидемиологии им. И.И.Мечникова (53)Л 616-07(088.8) (56) 1. Такачи Дж., Барб К. Новый

-метод выбора штамма вируса гриппа.В кн.: Эпидемиология и профилактика гриппа в социалистических странах, стр. 140-145, 1975 (прототип). (54)(57) COOCOS ОПРЕДЕПЕНИЯ AHTHFEH-1

НОЙ НОВИЗНЫ ШТАММОВ ВИРУСА ГРИППА путем обработки суспензий исследуемых вирусов антителами с последующим инкубированием полученной смеси и определением специфического связывания антител, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью упрощения способа, суспензии вирусов обрабатывают плацентарным гамма-глобулином, после инкубирования отделяют образовавшийся комплекс вирус-антитела и антигенную новизну вируса гриппа определяют по степени репродукции связанного с антителами вируса.

1035061

60

Изобретение относится к вирусологии и касается определения антигенной новизны и эпидемичности вируса гриппа..

Известен способ определения антигенной новизны штаммов вируса гриппа путем обработки суспензий исследуемых вирусов антителами ко всем исследуемым вирусам с последующим инкубированием полученной смеси и определением специфического связывания антител (1) .

Однако известный способ является трудоемким.

Цель изобретения - упрощение способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения антигенной новизны штаммов ви. руса гриппа, включающему обработку суспензий исследуемых вирусов антителами с последующим инкубированием полученной смеси и определением специфического связывания антител, суспензии вирусов обрабатывают пла" центарным гамма-глобулином, после инкубирования отделяют образовавшийся комплекс вирус-антитела и ан" тигенную новизну вируса гриппа определяют по степени репродукции связанного с антителами вируса.

Способ осуществляют следующим образом.

Аллантоисную жидкость, содержащую вирус, соединяют в равных количествах с пулами гамма-глобулина разных лет, смеси инкубируют при

4 С 24 ч, центрифугируют при

4 х 10 З 2 ч. Осадки ресуспендируют в мединал-вероналовом буфере рН 8,6 в объеме, равном половине объема смеси. Надосадочной жидкостью и ресуспендированным осадком в разведениях 10 " — 10 заражают культуру клеток, инкубируют при 35,5С С

48 ч и наличие вируса определяют в реакции гемагглютинации с 1%-ной взвесью куриных эритроцитов. Если в надосадочной жидкости установленоотсутствие вируса, то вирус не характеризуется антигенной новизной.

Если вирус не прочно связывается с антителами одних лет и прочно с антителами последующих лет и не обнаруживается в надосадочной жидкости, то он является антигенно более но" вым по сравнению с первым, но не перспективным для отбора, так как хорошо связывается антителами последующих лет. Последовательно проводя эту процедуру со всеми вирусами,( определяют. какой вирус обладает наи1большей антигенной новизной.

Пример 1. Аллантоисную жидкость, содержащую .вирус А (Гонконг) 1/68, соединяют в равных количествах с пулами гамма-глобулина

1973-1979 годов производства (пул каждого года готовят раздельно).

Смеси инкубируют при 4 С 24 ч. 3атем центрифугируют при 4х10 9 2 ч.

Осадки ресуспендируют в мединал-вероналовом буфере рН 8,6 в объеме, равном половине объема смеси. Полученной после центрифугирования надосадочной жидкостью и ресуспендированным осадком в разведениях 10-" - .

10 заражают фрагменты ХАО (фрагмен15 ты хорионаллантоисных оболочек куриного эмбриона) . Инкубацию проводят при 35,56С 48 .ч, наличие вируса определяют в реакции гемагглютинации с 1%-ной взвесью куриных эритроцитов. В надосадочной жидкости установлено отсутствие вируса. Вирус перешел в осадок вместе с антителами и находится с ними в прочной связи, которая не разрушается при разведении комплекса. Вирус прочно связывается и полностью нейтрализуется антителами, находящимися в плацептарном гамма-глобулине 19731979 годов производства и, следовательно, не обладает антигенной

30 новизной

tI p и м е р 2 . Применяя методику, описанную в примере 1, определяют антигенную новизну штаммов

35 вируса гриппа A (Виктория) 35/72, штамма вируса гриппа A (Виктория)

3/75, штамма вируса гриппа A (Техас ) 1/77, штамма вируса гриппа А (Одесса ) 3/79.

В таблице представлены данные о * прочности комплекса штаммов вируса гриппа с антителами плацентарного гамма-глобулина различных лет полу45

Антигенную специфичность испытуемых вирусов определяют на осно--вании предварительного типирования 5

Г их в РТГА с коммерческими диагностическими сыворотками.

Специфичность антител оценивают по наличию антигемагглютининов,к испытуемым вирусам в плацентарном гамма-глобулине, Использование изобретения позволяет просто и быстро проводить определение эпидемической актуальности вновь выделенных вирусов гриппа, QTбор штаммов для производства вакцин и диагностических препаратов.

1035061

Инфекиионный титр вируса иэ комплекса оды по- лучения амиалобулиcl т р

20,31 < 0,001

1973

20,31 с 0,001

1974

20,31 с 0,001

1975

20,31 с 0,001

197б

20,31 с О 001

20,31 с 0,001

20,31 с 0,001

7,69 с 0,001

1977

1978

A t Виктория) 35/72

2,50

: 6,50

1973

1,67 11,23 с 0,001

11,23 с 0,001

1,67

1975

20,31

6,001 с 0,001

20,31

1977

20,31 с 0,001

1978

20,31 с 0,001

1979

А (Виктория )

3/75

4,54

2,77

6,00

1974

14,28

5,22

2,23

1975

1i33

1976

1977

1978

1979

2,67

1973

5,16 с 0,001

1974

0,42 0,1

0,78 ) 0,1

5 50

5,23

1975

1976

5,50

0,46

4,77

1977

1,47

1978

2,19

4,50

1979

2,50.5,19

A (osaopr)1/68 6,50

A (Техас ) 1/77 5,7,7

6,71

14, 28

14,28

14ю28

0 i 001

0,001

0,001

0,001

0,001

0,001

0,001 0,1

) 0,1

> 0,05 с 0,001

1035061

Продолжение таблицы

Ви,рус

Инфекционный титр вируса из комплекса

Годы получения гаммаглобулина

Инфекционный титр вируса (исходный) 4,76

A (Одесса) 3/79 5,00

2,00

1973

1974

3,77

1,86

1975

3,50

2,45

2,00

1976

1977

4,00

1,82

3, 77

1978

1,86

1979

15,62

П р и м е ч а н и е. Достоверность отличий определялась по разнице инфекционного титра вируса в исходном материале и осажденном комплексе (статистическая обработка проводилась по методу Рида и Менча в

Модификации О.В.Давыдова, Г.С.Давыдовой

1. Значения р (О, 05 свидетельствуют о достоверности прочной связи вируса в комплексе с антителами;

2. Значения р ) 0,05 свидетельствуют о непрочной связи вируса с антителами и реактивации вируса из комплекса.

Составитель A.Маныкин

Редактор A.Лвраменко Техред М.Костик Корректор В. Бутяга

Заказ 5759/23

Тираж 523 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

<0,001 ) 0,1 (0,05

) 0,001

> 0,05

0 0,05

0,001