Способ получения экстракорпорального шунта

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО ШУНТА, включающий приготовление ферментколлагеновой суспензии , получение активного материала, дубление глузгаровым альдегидом и формирование шунта, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности работы шунта , активный материсш получают прокачиванием ферментколлагеновой суспензии через лавсановый протез кровеносного сосуда, а шунт формируют изоляцией внешней поверхности протеза силиконом и последующей его спирализацией. (Л

„„Su„„1014883 А

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСЙИХ

РЕСПУБЛИК

З 511 С 12 N 11/00, A 61 M 1/00

Ф»»» ".,I

» ) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

AO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3 226 257/30-1 5 (22) 29.12.80 (46) 30.04.83. Бюл. Р 16 (72) Б.Д. Халяпин и T Â. Штукина (71) Всесоюзный научно-исследователт;ский институт особо чистых биопрепаратов (53) 615.779 ° 94(088.8) (56) 1. Hyden Н. "An extra-corporeal shunt apparatus for blood detoxification".=Arzneim-Forch, 1971, v. 21, Р 11, р. 179.

2 ° Horvath С. et al "L-asparaginase tubes kinetic schavior апй

application in physiological studies", "J of Appl. Physiol", 1973, v. 34, 9 2, р. 181.

3. Bernath F.R. et al. "Therapentic Perspectives of Enzymes

Reactors", "Biomedical Applications

of immobilise enzymes and protein.

Plenum Press", 1977, v. 1, 9 4, р. 35 ° (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧКНИЯ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО ШУНТЫ, включаюций приготовление ферментколлагеновой суспензии, получение активного материала, дубленке глутаровым альдегидом и формирование шунта, о т л и ч а— ю ш и и с я тем, что, с целью повышения эффективности работы шунта, активный материал получают прокачиванием ферментколлагеновой суспензии через лавсановый протез кровеносного сосуда, а шунт формируют изоляцией внешней поверхности протеза силиконом и последуюшей его спирализацией.

1014883 соса, повышают рН до 4,1 добавлением .1NNa0H и вносят препарат АГ до концентрации 12 мг белка/мл. Полученной смесью пропитывают лавсановый протез кровеносного сосуда (внутренний диаметр 0,6 см, длина 150 см) путем прокачивания с помощью перистальтического насоса и высушивают на воздухе. Затем протез погружают в 200 мл 1% раствора rA (рН 7,0) на 30 с для дубления. Непрореагировавший ГА отмывают ледяной водой и снова высушивают. Затем протез помещают в силиконовую трубку для внешней изоляции и свивают в спираль диаметром 4,6 см. Оставшуюся после пропитки суспензию используют для определения активности Ar в комплексе. Суспензию высушивают в виде пленок, дубят и отмыва-. ют описанным вьпае способом. Активность, измеренная по количеству отщепившегося аммиака, составляет

3000 ME/г, а для пропитанного суспензией протеза 60 NE/г протеза. Активность модели ЭШ составляет 390 МЕ.

Полученный данным способом ЭШ имеет следующие характеристики:

1. При скорости прокачивания рас твора Asn(33mM) в фосфатном 0,1 M буфере (рН 7,8 ) 45 мл/мин и комнатной температуре активность спиральной модели на 55% выше, чем у прямоточного варианта.

2. 1 л раствора Asn в 0,1 N фосфорном буфере (рН 7,8) с концентрацией 100 мкмоль/л при .1 = 37 C прокачивается через ЭШ со скоростью

48 мл/мин в рециклическом режи- ме. Время расщепления 95% субстрата составляет при таких условиях

50 мин. При увеличении скорости прокачивания до 93 мл/мин время расщепления Asn сокращается до 30 мин.

3. 120 мл человеческой крови прокачивают через ЭШ со скоростью

38 мл/мин при комнатной температуре в рециклическом режиме в течении

18 мин. Перед прокачиванием крови внутреннюю поверхность ЭШ промывают 0,5 л 0,15 N раствора Рингера с содержанием гепарина 20 ед/мл. За указанный период гидролизуется 87%

Asn, находящегося в плазме крови.

Гемолиз, тромбообразование, а также видимые микроскопические повреждения клеток крови не выявлены. Фер ментативная активность модели ЭШ в результате контакта с кровью не снижается.

Таким образом способ получения экстракорпорального шунта позволяет получить ЭШ, обладающий активностью

390 NE, Проведенные на человеческой крови эксперименты демонстрируют возможность применения ЭШ. Тираж 523 Подписное жгород,ул.Проектйая,4

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к методам получения устройств для экстракорпорального воздействия на организм, может быть также использовано в области биохимии и ветеринарии. 5

Известно несколько разработок экстракорпоральных шунтов (ЭШ ) с иммобилизованной L,-аспарагиназой (АГ). ЭШ изготовляют путем присоединения АГ к силаниэированным стеклян-10 ным пластинкам 1, к части но гидролизованным нейлоновым трубкам (2). . Общим недостатком перечисленныХ способов изготовления ЭШ является низкая стабильность иммобилизованной

АГ.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения ЭШ, при котором фермент-коллагеновую суспензию отливают в форме пластины, высушивают, дробят и сворачивают в рулон, который затем помещают в кожух из поликарбонатной пластмассы. Кровь пропускают через полученное устройство параллельно поверхности ферментколлагеновой пленки. Удельная активность фермент-коллагенового комплекса составляет 25-250 МЕ/г. Шунт обладает стабильной ферментативной активностью 275 МЕ. При испытаниях на собаках уровень аспарагина (Asn) в крови снижался до следовых коли- честв за 15-20 мин и оставался низким в течение 7 ч последующей перфузии со скоростью 35 80 мл/мин (3 ).

Однако способ обладает недостаточно ьысокой активностью шунта, наличием диффузионного торможения фер ментативной реакции, а также наличием контакта крови с неколлагеновыми поверхностями (поликарбонат- 40 ной пластмассой ).

Цель изобретения — повышение эффективности работы шунта.

Для достижения поставленной цели . в способе получения экстракорпорального шунта, включающем приготовление фермент-ксйтлагеновой суспензии, дубление глутаровым альдегидом и формирование шунта, активный материал получают прокачиванием фермент-коллагеновой суспенэии через лавсано50 вый протез кровеносного сосуда, а шунт формируют изоляцией внешней поверхности протеза силиконом и последующей его спиралиэацией.

Пример. Приготовление фермент-коллагенового комплекса.

К 20 г грубо измельченного коллагена 82% влажности добавляют воду до объема 400 мл, доводят рН до 3,0 40% молочной кислотой и гомогениэируют 60 на блендере до образования однородной массы. Полученную суспензию деаэрируют с помощью водоструйного наВНИИПИ Заказ 3132/21

Филиал ППП "Патент !, г.у