Тест-система иммуноферментная для полуколичественного определения аллергенспецифических ige и igg-антител для диагностики микозов (ифтс-мико-ige-igg-at)

 

Тест - система иммуноферментная для полуколичественного определения аллергенспецифических IgE и IgG - антител для диагностики микозов (ИФТС-мико-IgE-IgG-AT) Полезная модель используется в медицинской лабораторной диагностике. Поставленная задача осуществляется посредством предлагаемой тест -системы ИФТС-мико-IgE-IgG-AT, разработанной с помощью твердофазного сэндвич-метода в 96-луночном стрипированном планшете с использованием моноклональных антител, входящих в состав пероксидазных конъюгатов, МКАТ-анти-IgE и МКАТ-анти-IgG. Метод основан на сочетании иммунологических реакций на первом этапе между грибковыми аллергенами, иммобилизованными на полистироловой поверхности лунок планшета, и специфическими к этим аллергенам IgE - и IgG - антителами из образца сыворотки с образованием на твердой фазе иммунологических комплексов АГ-AT 1. На втором этапе между комплексами АГ-АТ 1 и конъюгатами МКАТ-анти-IgE и МКАТ-анти-IgG с образованием иммунологических комплексов AT-AT1-AT 2, меченных ферментом пероксидазой. Последующая ферментативная цветная реакция происходит между пероксидазой и субстратом. Продукты расщепления реакции превращают молекулы хромогена - ТМБ в окрашенное производное, количество которого пропорционально ферментативной активности. Степень окрашивания учитывается фотометрически при 450 нм. Содержание аллергенспецифических IgE-IgG-антител в исследуемых образцах выражается в классах (1-4), соответствующих низкой, средней, умеренно высокой и высокой концентрации IgE и IgG. Полезная модель представляет собой комплект, в состав которого входит набор реагентов, включающий полистироловые планшеты с иммобилизованными аллергенами, референс - сыворотки, промывающий раствор, хромоген, субстрат, стоп - реагент и инструкцию по применению, упакованных в одной коробке.

Полезная модель относится к медицине, а именно, к лабораторной диагностике.

Проблема диагностики и лечения микозов приобретает особую актуальность в связи со значительной распространенностью грибковых заболеваний, общее количество которых за последнее десятилетие выросло более, чем в 2 раза.

Одной из глобальных причин роста микозов считается ухудшение экологических условий на планете, способствующих изменению микроэкологии и иммунореактивности организма.

К настоящему времени накоплено достаточное количество фактов, доказывающих способность грибковых антигенов и различных компонентов их клеточных стенок вызывать различные типы аллергических реакций (I-IV типы), как немедленных IgE-зависимых, так и замедленных - клеточно-опосредованных реакций - IgG-зависимых с участием нескольких иммунных механизмов в формировании этих реакций (Новиков П.Д. Грибковая аллергия / Иммунопатология. Аллергология. Инфектология. - 2004. - №1. - С.37-42; Сергеев Ю.В. Онихомикозы. - М.: ГЭОТАР, 1988. - 256 с.; Mari A. Sensiti-iation to fungi: Epidemiology, comparative skin tests and IgE reactivity of fungal extracts / Clin. Exp. Allergy. - 2003. - v.33, №10. - P.1429-1438).

Очень часто микотическая аллергия сочетается с сенсибилизацией к бытовым, пищевым, пыльцевым аллергенам, что значительно затрудняет диагностику. Серьезную клиническую проблему представляет оценка значимости грибковой сенсибилизации в развитии микозов. Это связано с тем, что

реально человек контактирует примерно со 100 видами грибов, споры которых находятся в атмосферном воздухе, в составе домашней и рабочей пыли, заплесневелых пищевых продуктах и многих других объектах, и из-за их многообразия трудно установить преобладающий вид грибов (Паттерсон Р. Аллергические болезни: диагностика и лечение - М.: ГЭОТАР, 2000. - 768 с).

Клиническая картина микотических заболеваний очень разнообразна, поэтому важная роль принадлежит специфическим методам диагностики. Наиболее предпочтительными и информативными являются методы «in vitro» иммуноферментные и радиоиммунные (РИА).Эти методы обладают высокой специфичностью, чувствительностью и лишены каких-либо ограничений, они позволяют выявить биологически высокоактивные аллергенспецифические антитела, вырабатывающиеся в организме в процессе сенсибилизации (Нго Т.Т. Иммуноферментный анализ. - М.: Мир, 1988. - 446 с.; Чард Т. Радиоиммунологические методы. - М.: Мир, 1981. - 248 с.; Тотолян А.А. Современные подходы к диагностике иммунологических состояний / Мед. Иммунология. - 1999. -T.1, №1-2. - С.75-108).

При использовании этих методов следует учитывать возможную роль различных иммунологических механизмов в развитии аллергических реакций и то, что для диагностики необходимо применять несколько методов, позволяющих оценить участие всех четырех типов сенсибилизации. Следовательно, для обнаружения микотической сенсибилизации реагинового и клеточно-опосредованного типов аллергических реакций первостепенное значение имеет определение специфических IgE- и IgG-антител к грибковым аллергенам.

Близкие по техническому решению зарубежные тест - системы для определения специфических IgE-антител и IgG-антител выпускаются в пробирочном и микропланшетном форматах с комплектом базовых реагентов (конъюгата, калибраторов). Вместе с тем, аллергодиски и аллергены, иммобилизованные на твердофазном носителе (пробирки или стрипы) заказываются дополнительно из предлагаемого перечня аллергенов (до 700 видов) -

Dr. Fooke, Laboratorien GmbH [дистрибьютер фирмы Dr. Fooke, Laboratorien GmbH (Германия) - ЗАО «БиоХимМак Диагностика», г. Москва.] Однако, в указанных тест - системах:

- Отсутствует единый комплект тест - системы для диагностики микозов, включающий все иммунореагенты для выявления специфических IgE- и IgG-антител к грибковым аллергенам;

- Исследование длительно, наборы реагентов дорогостоящие, в 10-15 раз превышающие стоимость отечественной тест - системы;

- Необходимо специальное дорогостоящее оборудование.

Поставлена задача диагностики микотических заболеваний единым комплектом высокоактивных специфических реагентов, сокращения сроков исследования, использования не дорогостоящего оборудования.

Поставленная задача достигается иммуноферментной тест-системой (ИФТС) для полуколичественного определения специфических IgE-IgG-антител к грибковым аллергенам (ИФТС-мико-IgE-IgG-AT) с помощью твердофазного сэндвич-метода в 96-луночном стрипированном планшете с использованием моноклональных антител, входящих в состав пероксидазных конъюгатов, МКАТ-анти-IgE- и МКАТ-анти-IgG. Метод основан на сочетании иммунологических реакций на первом этапе между грибковыми аллергенами, иммобилизованными на полистироловой поверхности лунок планшета, и специфическими к этим аллергенам IgE- и IgG-антителами из образца сыворотки с образованием на твердой фазе иммунологических комплексов АГ-АТ 1. На втором этапе - между комплексами АГ-АТ 1 и конъюгатами МКАТ - анти - IgE и МКАТ-анти-IgG с образованием иммунологических комплексов AT-AT1-AT 2, меченных ферментом пероксидазой. Последующая ферментативная цветная реакция происходит между пероксидазой и субстратом. Продукты расщепления реакции превращают молекулы хромогена - ТМБ в окрашенное производное, количество которого пропорционально ферментативной активности. Степень окрашивания учитывается фотометрически

при 450 нм. Содержание аллергенспецифических IgE-IgG-антител в исследуемых образцах выражается в классах (1-4), соответствующих низкой, средней, умеренно высокой и высокой концентрации IgE и IgG.

Предлагаемая полезная модель представляет собой комплект, в состав которого входят следующие реагенты, упакованные в одной коробке:

Реагент 1 (P1) - планшеты полистироловые 96-луночные стрипированные с вертикальными рядами из прозрачного полимерного материала (кат. №46460, фирма Nunc, Дания или кат. №95029100, фирма Labsistems, Финляндия), в которых лунки первого и второго рядов сорбированы аллергеном из пыльцы амброзии (А) стандартизированном по содержанию азота белка (производство ГП «Аллерген»), с концентрацией 6±1 мкг/мл - референс - стрипы; лунки с 3 по 12 ряд сорбированы грибковыми аллергенами десяти видов с концентрацией 5±1 мкг/мл, (производство «Sevapharma»,Чехия), запаянные в пакет из полиэтилена, готовы к использованию - P1 - 2 шт.

Реагент 2Е (Р2Е) - человеческие референс - сыворотки с различным содержанием специфических IgE-антител к аллергену (А). Концентрация IgE-антител 4 уровней соответствует 4 классам (условные единицы): P2E1 (0,35-1,0) -, Р2Е2 (1,0-3,5), Р2Е 3 (3,5-17,5), Р2Е4 (17,5-50,0) КЕ/л IgE, опалесцирующие жидкости светло-желтого цвета (ЦНИИРИ, ООО «Полигност», Россия, ЭПР №896-99, ФСП 42-0190-0593-00), стандартизованы относительно Второго Международного Стандартного препарата ВОЗ для IgE человека - 2nd JRP, 75/502, готовы к использованию, Р2Е - 4 фл. (по 0,06 мл).

Реагент 2G (P2G) - человеческие референс - сыворотки с различным содержанием специфических IgG-антител к аллергену (А). Концентрация IgG-антител 4 уровней соответствует 4 классам (условные единицы): P2G 1 (0,8-2,0), Р2С2 (2,0-5,0), P2G 3 (5,0-20,0), P2G4 (20,0-44,0) мкг/мл IgG, опалесцирующие жидкости светло-желтого цвета, стандартизованы относительно

препарата WHO 67/97, готовы к использованию, P2G - 4 фл. (по 0,06 мл).

Реагент 3 (Р3) - отрицательная контрольная сыворотка (ОК), не содержащая А - специфических IgE-IgG-антител, опалесцирующая жидкость светло-желтого цвета, готова к использованию, Р3-1 фл (0,1 мл).

Реагент 4Е (Р4Е) - положительная контрольная сыворотка (ПКЕ), содержащая А-специфические IgE-антитела в концентрации более, чем 3,5 КЕ/л IgE, готова к использованию, Р4Е - 1 фл.(0,1 мл).

Реагент 4G (P4G) - положительная контрольная сыворотка (ITKG), содержащая А-специфические IgG-антитела в концентрации более, чем 0,8 мкг/мл, готова к использованию, P4G - 1 фл. (0,1 мл).

Реагент 5Е (Р5Е) - коньюгат мышиных моноклональных антител (МКАТ) анти IgE человека с пероксидазой из корня хрена (коньюгат МКАТ анти IgE), 100-кратный концентрат, вязкая прозрачная жидкость голубого цвета (ЦНИИРИ, ООО «Полигност», Россия, ЭПР №896-99, ФСП 42-0190-0593-00), Р5Е - 1 фл. (0,13 мл).

Реагент 5G (P5G) - конъюгат мышиных моноклональных антител (МКАТ) анти IgG человека с пероксидазой их корня хрена (конъюгат МКАТ анти IgG), 100-кратный концентрат, вязкая прозрачная жидкость голубого цвета (ЦНИИРИ, ООО «Полигност», Россия, ЭПР №896-99,ФСП 42-0190-0593-00 от 16.01.2002 г.), P5G - 1 фл. (0,13 мл).

Реагент 6 (Р6) - промывающий и разводящий раствор, 10-кратный концентрат, прозрачная бесцветная жидкость, Р6 - 1 фл. (10 мл), (рН 7,2): трис гидроксиметилоксиметан, натрия хлорид, твин - 20 (фирма Sigma, США, кат. №Т67-91, ГОСТ 62 59-75, фирма Serva, Германия, кат. №37470).

Реагент 7 (Р7) - хромоген тетраметилбензидин (ТМБ), прозрачная бесцветная жидкость, Р7 - 1 фл. (12 мл) (ООО «Протеиновый контур», Россия, код М 040).

Реагент 8 (Р8) - субстрат перекись водорода, прозрачная бесцветная жидкость, Р8 -1 фл. (12 мл) (ООО «Протеиновый контур», Россия, код М 040).

Реагент 9 (Р9) - стоп - реагент, прозрачная бесцветная жидкость, кислота серная Н 2SO4 IN, P9 - 1 фл. (12 мл) (ГОСТ 4204-79).

Реагенты набора ИФТС вносят в лунки по стадиям в следующем порядке (таблицы 1, 2, 3, 4):

Таблица 1
1. Иммунологическая стадия I этап
Вносимые компоненты в лунки планшетовРеференс-стрипы (Р1)Стрипы, сорбированные грибковыми аллергенами (Р1)
Референс - сыворотки 10 мкл 
Отрицательная контрольная сыворотка; OK (P3) 10 мкл 
Положительные контрольные сыворотки; ПКЕ и ПКО 10 мкл 
Неизвестный образец сыворотки (ОС) 10 кл
Промывающий раствор (Р6)90 мкл 90 мкл

- После внесения реагентов, планшеты закрывают крышками и перемешивают содержимое лунок на шейкере в течение 30 секунд, после чего инкубируют планшеты при температуре (37±1)°С в течение 1 часа.

- Отмывка. По окончании инкубации удаляют содержимое лунок декантированием и промывают лунки 3 раза. При каждой промывке вносят во все лунки по 200 мкл рабочего промывающего раствора №1. Выдерживают в течение 1 минуты с последующим декантированием. При каждом декантировании тщательно удаляют остатки жидкости из лунок постукиванием планшетов в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.

Таблица 2
2. Иммунологическая стадия II этап
Вносимые компоненты в лунки планшетовРеференс-стрипы (Р1)Стрипы, сорбированные грибковыми аллергенами (Р1)
Коньюгат МКАТ -анти IgE (P5E)100 мкл100 мкл
Коньюгат МКАТ -анти IgG (P5G) 100 мкл100 мкл

- Во все лунки одного планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора коньюгата P5E, другого планшета - по 100 мкл раствора коньюгата P5G. Закрывают планшеты крышками и инкубируют при температуре 37°С в течение 1 часа.

- Отмывка. По окончании инкубации удаляют содержимое лунок и промывают лунки 3 раза так, как это указано на первом этапе, после чего промывают лунки 2 раза дистиллированной водой (по 200 мкл в лунку). Удаляют следы жидкости из лунок постукиванием планшета в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.

Таблица 3
3. Ферментативная стадия
Вносимые компоненты в лунки планшетовРеференс-стрипы (Р1)Стрипы, сорбированные грибковыми аллергенами (Р1)
Субстрат - хромогенная смесь (Р7+Р8)100 мкл100 мкл

- Вносят во все лунки планшетов по 100 мкл субстрат - хромогенной смеси (Р7+Р8) (раствор №3), закрывают планшеты крышками и инкубируют в течение 15-20 минут в темном месте при комнатной температуре с постоянным перемешиванием на шейкере; при этом содержимое лунок окрашивается в голубой цвет.

Таблица 4
4. Остановка реакции
Вносимые компоненты в лунки планшетовРеференс-стрипы (Р1)Стрипы, сорбированные грибковыми аллергенами (Р1)
Стоп - реагент 1 N раствор H2SO4 (P9) 50 мкл50 мкл

- Вносят во все лунки по 50 мкл стоп - реагента (Р9) и перемешивают содержимое лунок осторожным окачиванием планшета, при этом содержимое лунок окрашивается в ярко-желтый цвет.

- Измеряют величину оптической плотности (ОП) растворов в лунках планшетов на фотометре вертикального сканирования при длине волны 450 нм сразу после остановки реакции.

Далее производят учет результатов.

Рассчитывают среднее арифметическое значение оптической плотности (ОП) для лунок, содержащих отрицательную контрольную сыворотку(ОК), для лунок, содержащих положительную контрольную сыворотку (ПК) и для каждой пары лунок, содержащих референс - сыворотки Р2Е и P2G.

Анализ считается специфичным, чувствительным и действительным, если:

- Разница значений ОП отрицательной (ОК) и положительной (ПК) контрольной сывороток находится в пределах ед. ОП не менее 0,2.

- Показатель ОП положительной контрольной сыворотки (ПКЕ) должен быть не менее 0,3, a ITKG - не менее 0,8. Сравнивают ОП образца сыворотки (ОС) с ОП референс - сывороток Р2Е 1-4к и Р2G1-4к определяют соответственный уровень (класс) для каждого образца сыворотки (ОС) (таблица 5, 6).

Таблица 5
ОП референс - сыворотокР2Е1-4клСодержание IgE (КЕ/л) Классы
E1<0,35 А0 класс или (±)
  (0,35-1,0)1 класс (низкий)
Е2 В (1,0-3,5)2 класс (средний)
Е3 С (3,5-17,5)3 класс (умеренно-высокий)
Е4 D( 17,0-50,0)4 класс (высокий)
 >50,0 очень высокий

- если ОП образца сыворотки (ОС ) ниже ОП референс - сыворотки Е, результат отрицательный (-);

- если ОПОС ниже ОП, но выше ОПОК - результат сомнительный (±);

- если ОПОС выше ОП, но ниже ОП - уровень специфических IgE низкий (1 класс);

- если ОПОС выше ОП, но ниже ОП - средний уровень ( 2 класс);

- если ОП ОС выше ОП, но ниже ОП - умеренно-высокий уровень (3 класс);

- если ОП ОС соответствует ОП - высокий уровень (4 класс);

- если ОП ОС выше ОП - очень высокий.

Таблица 6
ОП референс - сывороток Р2G1-4кл Содержание IgG (мкг/мл)Классы
0<0,8 0 класс или (±)
G 10,8-2,01 класс (низкий)
G22,0-5,02 класс (средний)
G3 5,0-20,03 класс (умеренно высокий)
G4 20,0-44,04 класс (высокий)

Для стандартизации ИФТС проверяются показатели:

- чувствительность - как минимальный уровень специфических IgE- и IgG-антител (1 класс), при котором еще можно обнаружить в ИФА реакции различие в ОП между референс - сыворотками с низким уровнем антител и отрицательной контрольной сывороткой;

- точность - как способность ИФТС давать одинаковые результаты при тестировании одной и той же сыворотки, содержащей специфические антитела к грибковым аллергенам на 1 стрипе в 8 репликатах, и выражается коэффициентов вариации;

- специфичность - как способность конъюгатов в ИФА реакции вступать во взаимодействие с положительными контрольными сыворотками и не вступать в реакцию с отрицательной контрольной сывороткой.

Проведены клинические испытания предлагаемой полезной модели на двух группах больных. Результаты обследования приведены в табл. 7.

Из таблицы 7 следует, что сенсибилизация к грибковым аллергенам проявляется как немедленными реакциями (IgE - антитела), так и клеточно-опосредованными, замедленными (IgG - антитела). Обнаружены аллергенспецифические IgE - антитела в первой группе больных с БА и ХОБ в 30-86% образцов и в 18-45% - во второй группе с аллергическими заболеваниями. IgG - антитела выявлены в первой группе - в 57-95%, во второй группе - в 42-72% случаев. Полученные данные показывают, что при сенсибилизации к грибковым аллергенам обнаруживаются более высокие уровни антител класса IgG - в 76 и 57% случаев (средние значения) у больных I и II групп в сравнении с IgE - антителами - в 58-30% случаев, соответственно. Выявление специфических антител классов иммуноглобулинов IgE и IgG необходимо для дифференциальной диагностики микозов и последующей специфической терапии.

Таблица 7
Выявление аллергенспецифических антител иммуноглобулинов классов IgE и IgG к грибковым аллергенам
Группа, колво обследованных больных (в %) Наименование грибкового аллергена Аллергенспецифические антитела иммуноглобулинов
   IgE (% случаев)IgG (% случаев)
  2 кл.3 кл. 4 кл.2кл.3 кл.4 кл.
I группа БА, ХОБ 51 человек (100%)Altemaria tenius5927 863162 93
 Aspergillus fumigatus7298120 7595
 Candida albicans711384 256893
 Penicillium chryzogenum54- 542159 80
 Fusarium oxyspora274 311344 57
 Mucor pusillus65188328 5078
II группа аллергические заболевания (пищевая аллергия, полиноз, атопический дерматит, крапивница) 84 человекаAltemaria tenius4129 70853 61
 Aspergillus fumigatus4054550 555
 Candida albicans371754 54853
 Penicillium chryzogenum254 2942- 42
 Fusarium oxyspora188 2630-30  
  Mucor pusillus4544927 4572

Значение уровня сенсибилизации: 2 класс - средний;
  3 класс - высокий;
  4 класс - очень высокий

Таким образом, предлагаемая полезная модель:

1. позволяет выявлять одновременно специфические антитела классов IgE и IgG к грибковым аллергенам;

2. обладает высокой чувствительностью, точностью и специфичностью;

3. безопасна в диагностике, проста в постановке ИФА реакции, не требует дорогостоящего оборудования;

4. возможно использование полезной модели в любой клинической лаборатории, имеющей спектрофотометр вертикального сканирования.

Тест-система иммуноферментная для полуколичественного определения аллергенспецифических IgE и IgG-антител для диагностики микозов (ИФТС-мико-IgE-IgG-AT), включающая набор реагентов, референс-сыворотки, отличающаяся тем, что тест-система представляет собой комплект в одной коробке, содержащей два 96-луночных стрипированных планшета, в которых лунки первого и второго вертикальных рядов сорбированы аллергеном (А) из пыльцы амброзии; лунки с третьего по двенадцатый ряд сорбированы грибковыми аллергенами десяти видов, а также содержащий реагент 2Е и 2G - человеческие референс-сыворотки с различным содержанием специфических IgE и IgG-антител к аллергену (А), реагент Р3 - отрицательная контрольная сыворотка, не содержащая А - специфических IgE и IgG-антител, реагент 4Е - положительная контрольная сыворотка, содержащая А - специфические Ig-E-антитела, реагент 4G - положительная контрольная сыворотка, содержащая А - специфические Ig-G-антитела, реагент 5Е - конъюгат мышиных моноклональных антител анти IgE человека, реагент 5G - конъюгат мышиных моноклональных антител анти IgG человека, реагент Р6 - промывающий и разводящий раствор, реагент Р7 - хромоген тетраметилбензидин, реагент Р8 - субстрат перекиси водорода, реагент Р9 - стоп-реагент.



 

Похожие патенты:

Эндоскоп // 115188

Полезная модель относится к области клинической медицины, в частности онкологии, и может быть использовано для терапии патологического роста клеток организма в биологическом объекте. Устройство предназначено для лечения раковых опухолей папилломовирусной инфекции, т.е. новообразований на коже типа папиллом. Устройство снабжено ванной, заполняемой электролитом из раствора морской соли, а электроды, прижимаемые к поверхности кожи пациента по разные стороны от раковой опухоли размещены внутри ванны в указанном электролите.

Техническим результатом предлагаемого решения является повышение качества, эффективности закрепления грунта за счет снижения температуры закрепляющего раствора в процессе обработки

Изобретение относится к области колориметрии и предназначено для измерения спектральной зависимости коэффициента диффузного отражения различных материалов, что может быть использовано для определения их цветовых координатЗадача, на решение которой направлено изобретение, состоит в повышении точности измерения спектральной зависимости коэффициента диффузного отражения за счет устранения проблемы триплетного поглощения путем использования непрерывного освещения исследуемого образца

Предлагаемая полезная модель относится к медицине и предназначена для подведения лазерного световода к биологическим тканям. Устройство используется при лечении новообразований на коже. Для осуществления лазерных вмешательств при удалении доброкачественных новообразований кожи, особенно в труднодоступных местах, помимо световодов необходимы специальные приспособления для подведения лазерного излучения к мишени.

Газовая-электрическая стекловаренная печь относится к стекловаренным печам, предназначенным для варки белого и окрашенного тарного стекла, в частности из группы натриевоизвествовых стекол.

Изобретение относится к области медицины, а именно, к иммунологии, и может быть использовано при установлении этиологического фактора для последующей профилактики аллергических реакций, прежде всего на медикаменты

Изобретение относится к области медицинской техники и может быть использовано для прогнозирования генетически детерминированных заболеваний индивидуального человека на протяжении всей его жизни

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматовенерологии и представляет способ комплексной диагностики инфекций, передаваемых половым путем (ИППП), в формате ДНК-чипа, осуществляемый путем параллельной идентификации 29 микроорганизмов в полученном от пациента биоматериале, в том числе: патогенных (Neisseria gonorrhoeae, Chlamidia trachomatis, Treponema pallidum, Trichomonas vaginalis, вирус герпеса I и II типа); условно патогенных (Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Bacteroides vulgatus, Bacteroides fragilis, Mobiluncus mulieris, Mobiluncus curtisii, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Prevotella melanogenica, Prevotella oralis, Fusobacterium nucleatum, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus sanguinis, Corynebacterium spp., Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Proteus mirabilis, Enterococcus faecium, Peptostreptococcus anaerobius, Anaerobius prevotii); непатогенных (Lactobacillus spp.), с помощью олигонуклеотидных зондов, специфичных к каждому из выбранных возбудителей, иммобилизованных на стеклянных слайдах с эпокси-модифицированной поверхностью (формат ДНК-чипа)
Наверх